用于检测核酸PAP扩增的焦磷酸化激活性荧光制造技术

本发明专利技术涉及用于测定核酸PAP扩增的焦磷酸化激活性荧光的全新荧光检测方法。荧光基团‑淬灭基团双标记阻断性引物用于PAP反应，该引物的内部区域或5'末端核苷酸带有一个荧光基团，3'末端阻断性核苷酸则带有一个淬灭基团。多个荧光基团‑淬灭基团双标记阻断性引物也用于多重PAP反应，这些引物则带有不同的荧光基团用以区分一个反应中的多个模板。

Pyrophosphorylation activated fluorescence for Pap amplification

【技术实现步骤摘要】
用于检测核酸PAP扩增的焦磷酸化激活性荧光序列表本申请同时提交序列表。
本专利技术涉及分子生物学领域，特别涉及焦磷酸化激活性聚合反应(Pyrophosphorolysisactivatedpolymerization,PAP)核酸扩增。
技术介绍
焦磷酸化激活性聚合反应(PAP)焦磷酸化激活性聚合反应(Pyrophosphorolysisactivatedpolymerization,PAP)是一种使用3'末端阻断性引物，利用DNA聚合酶催化焦磷酸化反应串联耦合聚合反应的一种核酸扩增方法(LiuandSommer,2000；LiuandSommer,2004b)。其引物在3'末端由具有不可延伸性的核苷酸(3'末端阻断剂)如双脱氧核苷酸所封闭,因此不能直接被DNA聚合酶所延伸。当3'末端阻断性引物与其互补性DNA模板杂交时，在焦磷酸或其类似物的存在下DNA聚合酶可以去除3'末端阻断性引物上的3'末端阻断剂，这一反应称为焦磷酸化反应。然后DNA聚合酶能沿着已去除3'末端阻断剂的引物而延伸DNA模板,这一反应称为聚合反应。除了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于焦磷酸化激活性聚合反应中扩增模板的3'末端阻断性引物，其内部区域或5'末端核苷酸上带有荧光基团以及3'末端阻断性核苷酸上带有淬灭基团，一旦焦磷酸化反应去除了与淬灭基团连接的3'末端阻断性核苷酸，在PAP扩增中的荧光基团即产生可检测到的荧光信号。/n

【技术特征摘要】
20181109 US 62/757,7671.一种用于焦磷酸化激活性聚合反应中扩增模板的3'末端阻断性引物，其内部区域或5'末端核苷酸上带有荧光基团以及3'末端阻断性核苷酸上带有淬灭基团，一旦焦磷酸化反应去除了与淬灭基团连接的3'末端阻断性核苷酸，在PAP扩增中的荧光基团即产生可检测到的荧光信号。


2.根据权利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其特征在于，FAM或HEX荧光基团连接在内部区域或5'末端核苷酸上，而TAMRA淬灭基团连接在3'末端双脱氧核苷酸上。


3.根据权利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其特征在于，所述荧光基团的发射光谱与淬灭基团的吸收光谱重叠。


4.根据权利要求1所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其中荧光基团的位置为从3'末端起的30个碱基或更少。


5.一种用于焦磷酸化激活性聚合反应中扩增模板的3'末端阻断性引物，其内部区域或5'末端核苷酸上带有淬灭基团以及3'末端阻断性核苷酸上带有荧光基团，一旦焦磷酸化反应去除了与淬灭基团连接的3'末端阻断性核苷酸，在PAP扩增中的荧光基团即产生可检测到的荧光信号。


6.根据权利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其特征在于，TAMRA淬灭基团连接在内部区域或5'末端核苷酸上，而FAM或HEX荧光基团连接在3'末端双脱氧核苷酸上。


7.根据权利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其特征在于，所述荧光基团的发射光谱与淬灭基团的吸收光谱重叠。


8.根据权利要求5所述的用于焦磷酸化激活性聚合反应的3'末端阻断性引物，其特征在于，所述淬灭基团的位置为从3'末端起的30个碱基或更少。


9.多个3'末端阻断性引物用于多重焦磷酸化激活性聚合反应以扩增在一个反应中的多个模板，包括：
a)用于扩增第一模板的第一阻断性引物，其内部区域或5'末端核苷酸上带有第一荧光基团以及3'末端阻断性核苷酸上带有一种通用淬灭基团，一旦焦磷酸化反应去除了与淬灭基团连接的3'末端阻断性核苷酸，在PAP扩增中的第一荧光基团即产生可检测到的荧光信号；和
b)用于扩增第二模板的第二阻断性引物，其内部区域或5'末端核苷酸上带有第二荧光基团以及3'末端阻断性核苷酸上带有相同的通用淬灭基团，一旦焦磷酸化反应去除了与相同的通...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁少峰，刘强，
申请(专利权)人：丁少峰，刘强，
类型：发明
国别省市：美国;US