一种同时检测多种DNA糖基化酶的荧光化学传感器、其检测方法及应用技术

本发明专利技术属于DNA糖基化酶检测技术领域，具体涉及一种同时检测多种DNA糖基化酶的荧光化学传感器、其检测方法及应用。提供同时检测多种DNA糖基化酶的方法、提高检测精度有利于降低分析检测成本，提高临床应用实用性。本发明专利技术提供了一种同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(hAAG)和尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)的方法，它将单分子检测与滚环扩增驱动的编码不同的荧光分子结合起来，可用于在单细胞水平上同时检测癌细胞中的多种DNA糖基化酶，并能区分正常细胞与癌细胞。它可以进一步用于酶动力学参数的分析和DNA糖基化酶抑制剂的筛选，在生物医学研究、临床诊断和药物开发中具有巨大的潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测多种DNA糖基化酶的荧光化学传感器、其检测方法及应用
本专利技术属于DNA糖基化酶检测
，具体涉及一种同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(hAAG)和尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)数量及活性的荧光化学传感器及其检测方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。DNA损伤是生物体自发产生的危害，为了抵消DNA损伤的有害作用，细胞参与了多种修复机制，例如碱基切除修复(BER)。BER途径由DNA糖基化酶启动，DNA糖基化酶识别受损和错配的碱基，并通过水解碱基与脱氧核糖之间的N-糖苷键而将其从DNA中切除并产生脱嘌呤/脱嘧啶位点(AP位点)，以进行下游BER修复过程。人类细胞中DNA糖基化酶的异常表达可能引起碱基切除修复的功能失调，并最终导致各种疾病。因此，同时检测多种DNA糖基化酶将有利于研究DNA损伤修复过程和早期临床诊断。为了提高检测灵敏度，提出了一些核酸扩增方法。其中，滚环扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器包括双链DNA底物、人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的环状模板；/n所述双链DNA底物中，其中一条链中具有具有次黄嘌呤碱基用于hAAG识别，另一条链上具有尿嘧啶碱基用于UDG识别，分别被APE1切割形成两个引物分别与对应的模板杂交进行扩增。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器包括双链DNA底物、人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的环状模板；
所述双链DNA底物中，其中一条链中具有具有次黄嘌呤碱基用于hAAG识别，另一条链上具有尿嘧啶碱基用于UDG识别，分别被APE1切割形成两个引物分别与对应的模板杂交进行扩增。


2.如权利要求1所述同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述含有次黄嘌呤碱基(I)碱基单链及含有尿嘧啶(U)碱基单链的5'端均采用生物素修饰，3'端均采用NH2修饰。


3.如权利要求1所述同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述hAAG的环状模板由A、T和G三种碱基组成，或所述hAAG的引物通过APE1切割单链中的次黄嘌呤碱基而产生。


4.如权利要求1所述同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述UDG的环状模板由A，T和C三种碱基组成；或所述UDG的引物通过APE1切割单链中的尿嘧啶碱基而产生。


5.如权利要求1所述同时检测人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和尿嘧啶DNA糖基化酶的荧光化学传感器，其特征在于，所述荧光化学传感器还包括磁珠、核酸外切酶及荧光分子标记的dCTP和dGTP，脱氧核糖核苷酸dATP及dTTP。


6.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，李琛琛，陈慧燕，胡娟，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37