一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，涉及生物检测技术领域。包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷5‑10g/L；双甘氨肽5‑10g/L；叠氮钠0.1‑0.5g/L；试剂R2：甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸10‑20g/L；乙二醇20‑80ml/L；牛血清白蛋白2‑8g/L；叠氮钠0.1‑0.5g/L。在实施过程中试剂R2中加入比例为1‑5：1‑2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺，并控制R1和R2的体积比为5‑10：1，增强了试剂的稳定性和准确性，并且提高了试剂的抗干扰能力，有利于在市场中进一步的推广使用。

A kit for the determination of glycylproline dipeptidyl aminopeptidase

【技术实现步骤摘要】
一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒。
技术介绍
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)分布于肝、肾、结缔组织、唾液腺和血清等体液中，能特异的水解肽链末端第2位为脯氨酸所形成的肽键，在细胞内的微粒体和可溶部分其比活性明显增高，其生理意义主要是水解血液中来自胶原的多肽，因此甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的生理作用可能与胶原肽降解相关。早在1966年，Hopsu-Havu和Glenner等在鼠的肝、肾组织中发现了一种新的二肽氨基肽酶。这种酶能水解甘氨酰-脯氨酰-B-萘胺，释放二肽甘氨酰脯氨酸，而被称为甘氨酰脯氨酸-B-萘胺酸。由于甘氨酰脯氨酰-B-萘胺有致癌作用，Nagatsu等合成了新底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺，并为大家广泛接受，这种酶也一度被称为甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺酶，现已通称为甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycylprolinedipeptidylaminopeptidase，GPDA)。经临床的大量实验和研究数据分析，发现GPDA在疾病的诊断中有着明显的变化趋势，急性肝炎、慢活肝、肝硬化、阻塞性黄疸等，血清GPDA可有不同程度升高；胃癌病人血清GPDA明显下降，一般在正常人的1/2左右；类风湿关节炎病人病程在15个月以上者，血清GPDA活性显著降低；系统性红斑狼疮病人血清GPDA显著降低；急性淋巴细胞性白血病、淋巴肉瘤和霍奇金病病人，血清GPDA显著降低；药物性肝损害、原发性胆汁性肝硬化引起肝内胆汁郁积者，血清GPDA活性升高。由于甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的含量变化与多种疾病有关，因此对甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶含量的准确检测具有重要的意义。但是在甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的检测试剂中使用的主要原料甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐配制成液体后不稳定，易水解变质，从而造成整个试剂盒的稳定性降低，进而影响了整个试剂盒的测定结果，因为如何提高甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒的稳定性成为主要的研究方向。例如，中国专利申请201510233316.X公开了一种定量测定人体血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性的试剂，该试剂由分别放置的试剂I和试剂II组成，其中，所述试剂I含有Tris-双甘肽缓冲液、底物稳定剂；所述试剂II含有甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸、底物稳定剂。该专利技术采用的试剂盒及检测方法只需十几微升血清，无需离心或电泳等分离处理，操作简便，可满足全自动化分析的要求，适用于大规模样品的及时准确检测，但是该申请中所使用的底物稳定剂为NaN3，其在试剂I和试剂II中的加入量为0.01-0.15g/mL，其添加量比较高，较高含量的防腐剂会在一定程度上影响检测结果的准确性和精密性，并且该申请在试剂盒中加入NaN3，仅在一定程度上提高了甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸的稳定性，对试剂的准确性以及抗干扰性能并没有提高。又如，中国专利申请201610273288.9中公开了一种测定甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：Tris缓冲液120-310mmol/L、双甘肽3.0-14.0g/L、叠氮钠0.6-1.5g/L，其溶剂为纯化水，试剂R2：甘氨酰-L-脯氨酸对硝基苯胺110-300mmol/L、乙二醇15-65mL/L、牛血清白蛋白3-12g/L、叠氮钠0.6-1.5g/L，其溶剂为纯化水。该申请同样以含量较高的叠氮钠作为稳定剂，仅在一定程度上提高了甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸的稳定性，对试剂的准确性以及抗干扰性能并没有提高。为了从根本上解决甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶试剂盒的稳定性，以及提高甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶试剂盒的准确性以及抗干扰能力。本专利技术在试剂盒中添加了特殊的稳定剂不仅提高了试剂盒的稳定性，还提高了试剂盒的准确性和抗干扰能力。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中试剂不稳定、测定准确度低以及抗干扰能力差的缺陷，而提供一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：本专利技术公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷5-10g/L；双甘氨肽5-10g/L；叠氮钠0.1-0.5g/L；试剂R2：优选地，所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷6-9g/L；双甘氨肽6-9g/L；叠氮钠0.2-0.4g/L；试剂R2：再优选地，所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷7-8.5g/L；双甘氨肽7-8.5g/L；叠氮钠0.25-0.3g/L；试剂R2：进一步优选地，所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷8.5g/L；双甘氨肽8.32g/L；叠氮钠0.25g/L；试剂R2：本专利技术所述的试剂R2中还含有稳定剂，所述的稳定剂为甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺中的一种或几种；优选地，所述的稳定剂为甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺；再优选地，所述的稳定剂的质量比为1-5：1-2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺。进一步优选地，所述的稳定剂的质量比为2-3：2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺。更进一步优选地，所述的稳定剂的质量比为3：2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺。所述的甘露醇的加入量为2-10g/L；所述的甘露聚糖的加入量为2-6g/L；所述的葡糖胺的加入量为2-3g/L。作为一些优选的技术方案，本专利技术所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷5-10g/L；双甘氨肽5-10g/L；叠氮钠0.1-0.5g/L；试剂R2：作为另一个优选的技术方案，本专利技术所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷8.5g/L；双甘氨肽8.32g/L；叠氮钠0.25g/L；试剂R2：所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为5-10：1，优选为9：1。另一方面，本专利技术还提供了上述甘氨酰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：/n试剂R1：/n三羟甲基氨基甲烷 5-10g/L；/n双甘氨肽 5-10g/L；/n叠氮钠 0.1-0.5g/L；/n试剂R2：/n

【技术特征摘要】
1.一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：
试剂R1：
三羟甲基氨基甲烷5-10g/L；
双甘氨肽5-10g/L；
叠氮钠0.1-0.5g/L；
试剂R2：





2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，其成分及相应含量为：
试剂R1：
三羟甲基氨基甲烷8.5g/L；
双甘氨肽8.32g/L；
叠氮钠0.25g/L；
试剂R2：





3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中还含有稳定剂，所述的稳定剂为甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺中的一种或几种。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂的质量比为1-5：1-2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂的质量比为3：2：1的甘露醇、甘露聚糖和葡糖胺。

【专利技术属性】
技术研发人员：商忆文，章晓庆，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33