【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用阳离子交换色谱法分离三轻链抗体相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月22日提交的美国临时申请第62/562,188号的优先权，所述临时申请通过引用并入本文。以电子方式提交的序列表的引用以电子方式提交的序列表(名称：2921_097PC01_ST25；大小：15,736字节；和创建日期：2018年9月21日)的内容通过引用整体并入本文。
本专利
大体上涉及将三轻链(H2L3)抗体(例如抗CD123H2L3抗体)或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和双轻链(H2L2)抗体(例如抗CD123H2L2)或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法。
技术介绍
用反应性半胱氨酸残基工程改造的重组抗体，即，“半胱氨酸工程改造抗体”可与相关药物共价结合以产生靶向治疗剂。研究显示，被稳定转染以表达这些半胱氨酸工程改造抗体的哺乳动物细胞也分泌被称为三轻链(H2L3)抗体的高分子量物质(Gomez等,BiotechnolBioeng.105(4):748-60(2010))。H2L3半胱氨酸修饰抗体是额外轻链与H2L2半胱氨酸修饰抗体上的工程改造半胱氨酸残基之一之间的二硫键形成的产物。细胞培养物中的H2L3半胱氨酸修饰抗体的水平与细胞系和培养条件有关。尽管可调节细胞培养条件以将H2L3形成最小化(例如，通过在细胞培养期间采用温度变化)，但影响在很大程度上取决于细胞系(Gomez等,BiotechnolProf.26(5):1438-45(2010))。由于与单体物质的相似性...
【技术保护点】
1.一种将H2L3抗体或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法，所述方法包括：/n(i)将所述抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；/n(ii)将具有约3.8至约5.0的pH的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；以及/n(iii)收集从所述树脂洗脱的H2L2组合物。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170922 US 62/562,1881.一种将H2L3抗体或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法，所述方法包括：
(i)将所述抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；
(ii)将具有约3.8至约5.0的pH的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；以及
(iii)收集从所述树脂洗脱的H2L2组合物。
2.一种将H2L3抗体或其抗原结合片段从包含H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段的抗体组合物中分离的方法，所述方法包括：
(i)将所述抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得H2L3抗体或其抗原结合片段和H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；
(ii)将具有约300mM至约600mM的盐浓度的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；以及
(iii)收集从所述树脂洗脱的H2L2组合物。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的不超过2％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的不超过1％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的不超过0.5％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的至少98％、至少99％或至少99.5％是H2L2抗体或其抗原结合片段。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述H2L2组合物包含施加到所述阳离子交换树脂的所述抗体组合物中的所述H2L3抗体或其抗原结合片段的不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％或不超过5％。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述H2L2组合物包含选自柱体积1-9的一个或多个洗脱柱体积。
9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述H2L2组合物包含洗脱柱体积1-4。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述阳离子交换树脂包含交联聚(苯乙烯二乙烯苯)。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述阳离子交换树脂包含磺丙基(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能团。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述阳离子交换树脂的粒度为约50μm。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述阳离子交换树脂具有双峰孔径分布。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述双峰孔径分布包括直径为约500nM的孔隙和直径为约22nM的孔隙。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述阳离子交换树脂是POROSTM强阳离子交换树脂XS。
16.如权利要求1或3-15中任一项所述的方法，其中所述洗脱组合物包含盐。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述洗脱组合物中的所述盐是氯化物盐。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述氯化物盐是氯化钠、氯化钾、氯化钙或氯化镁。
19.如权利要求16-18中任一项所述的方法，其中所述洗脱组合物中的盐浓度是约100mM至约600mM、约300mM至约500mM、或约350mM至约450mM。
20.如权利要求2-15中任一项所述的方法，其中所述洗脱组合物中的盐浓度是约300mM至约500mM、或约350mM至约450mM。
21.如权利要求19或20所述的方法，其中所述洗脱组合物中的盐浓度是约400mM。
22.如权利要求2-21中任一项所述的方法，其中所述洗脱组合物具有约3.8至约6.5的pH。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述洗脱组合物具有约3.8至约5.0的pH。
24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述洗脱组合物具有约4.2的pH。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述方法包括在将所述抗体组合物施加到所述阳离子交换树脂之前将平衡组合物施加到所述阳离子交换树脂。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述平衡组合物包含乙酸钠。
27.如权利要求25所述的方法，其中所述平衡组合物中的所述乙酸钠的浓度是约10mM至150mM。
28.如权利要求25所述的方法，其中所述平衡组合物中的所述乙酸钠的浓度是约50mM。
29.如权利要求25-28中任一项所述的方法，其中所述平衡组合物具有约3.8至约6.5的pH。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述平衡组合物具有约4.2的pH。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物包含约10至约100g/L的蛋白质。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述抗体组合物包含约30g/L至约50g/L或约35g/L至约45g/L的蛋白质。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述抗体组合物包含约40g/L的蛋白质。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物具有约3.8至约6.5的pH。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述抗体组合物具有约4.2的pH。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的约1％至约20％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述抗体组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的约1％至约15％、或约5％至约15％、或约3％至约12％、或约10％至约15％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述H2L2组合物包含施加到所述阳离子交换树脂的所述抗体组合物中的所述H2L2抗体或其抗原结合片段的至少40％、至少45％、至少50％或至少55％。
39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物包含经半胱氨酸工程改造的抗体或其抗原结合片段。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述经半胱氨酸工程改造的抗体或其抗原结合片段在EU/OU编号位置442处包含经工程改造的半胱氨酸残基。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物包含抗体。
42.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物包含抗体的抗原结合片段。
43.如权利要求1-40所述的方法，其中所述抗体组合物包含Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、单链Fv或scFv、二硫键连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、内抗体、IgGΔCH2、微型抗体、F(ab')3、四功能抗体、三功能抗体、双功能抗体、单结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。
44.如权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述抗体组合物包含由CHO细胞系产生的抗体或其抗原结合片段。
45.如权利要求1-44中任一项所述的方法，其还包括使所述H2L2组合物中的所述H2L2抗体或其抗原结合片段与细胞毒素结合以形成免疫结合物组合物。
46.一种H2L2组合物，其根据如权利要求1-45项中任一项所述的方法产生。
47.如权利要求46所述的H2L2组合物，其包含不超过2％H2L3抗体或其抗原结合片段。
48.如权利要求47所述的H2L2组合物，其包含不超过1％H2L3抗体或其抗原结合片段。
49.如权利要求48所述的H2L2组合物，其包含不超过0.5％H2L3抗体或其抗原结合片段。
50.一种免疫结合物组合物，其根据如权利要求45所述的方法产生。
51.如权利要求50所述的免疫结合物组合物，其包含不超过2％H2L3抗体或其抗原结合片段。
52.如权利要求51所述的免疫结合物组合物，其包含不超过1％H2L3抗体或其抗原结合片段。
53.如权利要求52所述的免疫结合物组合物，其包含不超过0.5％H2L3抗体或其抗原结合片段。
54.如权利要求1所述的方法，其中
(i)所述阳离子交换树脂包含交联聚(苯乙烯二乙烯苯)、磺丙基(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能团、约50μm的粒度，以及包括直径为约500nM的孔隙和直径为约22nM的孔隙的双峰孔径分布；
(ii)所述洗脱组合物包含约300至600mM氯化物盐和约3.8至约5.0的pH；
(iii)所述抗体组合物包含约10至约100g/L蛋白质并且所述抗体组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的约10％至约15％是H2L3抗体或其抗原结合片段；
(iv)所述H2L2组合物包含选自柱体积1-9的一个或多个洗脱柱体积；并且
(v)所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的不超过2％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
55.如权利要求1所述的方法，其中
(i)所述阳离子交换树脂包含交联聚(苯乙烯二乙烯苯)、磺丙基(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能团、约50μm的粒度，以及包括直径为约500nM的孔隙和直径为约22nM的孔隙的双峰孔径分布；
(ii)所述洗脱组合物包含约400mMNaCl和约4.2的pH；
(iii)所述抗体组合物包含约30至约50g/L蛋白质并且所述抗体组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的约10％至约15％是H2L3抗体或其抗原结合片段；
(iv)所述H2L2组合物包含洗脱柱体积1-4；并且
(v)所述H2L2组合物中的所述抗体或其抗原结合片段的不超过1％是H2L3抗体或其抗原结合片段。
56.一种将抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段从包含抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段的抗CD123抗体组合物中分离的方法，所述方法包括：
(i)将所述抗CD123抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；
(ii)将pH为约3.8至约5.5的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；
(iii)以及收集从所述树脂洗脱的抗CD123H2L2组合物，
其中所述抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和所述抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段包含分别为SEQIDNO:5-7的可变重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及分别为SEQIDNO:8-10的可变轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
57.一种将抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段从包含抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段的抗CD123抗体组合物中分离的方法，所述方法包括：
(i)将所述抗CD123抗体组合物施加到阳离子交换树脂，使得抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段结合于所述树脂；
(ii)将具有约300mM至约600mM的盐浓度的洗脱组合物施加到所述阳离子交换树脂；
(iii)以及收集从所述树脂洗脱的抗CD123H2L2组合物，
其中所述抗CD123H2L3抗体或其抗原结合片段和所述抗CD123H2L2抗体或其抗原结合片段包含分别为SEQIDNO:5-7的可变重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及分别为SEQIDNO:8-10的可变轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。
58.如权利要求56或57所述的方法，其中所述抗CD123抗体包含SEQIDNO:1的可变重链序列。
59.如权利要求56-58中任一项所述的方法，其中所述抗CD123抗体或其抗原结合片段包含SEQIDNO:2的可变轻链序列。
60.如权利要求56-59中任一项所述的方法，其中所述抗CD123抗体或其抗原结合片段经半胱氨酸工程改造。
61.如权利要求...
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