番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ及侵染性克隆构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV‑BJ及侵染性克隆构建方法和应用，全基因组序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，其保藏号为CGMCC NO.19119。将1.4个串联重复的TYLCV‑BJ基因组序列构建到pCambia2300载体上，获得pCambia2300‑TYLCV‑BJ‑1.4 DNA重组质粒；导入农杆菌EHA105中，获得的农杆菌能够成功侵染烟草和番茄植物。重组载体pCambia2300‑TYLCV‑BJ‑1.4 DNA具有以下特征：1)具有侵染性，能够成功侵染烟草、番茄和拟南芥植物；2)能够在烟草、番茄和拟南芥植物上引起明显的病毒症状，并积累病毒的DNA；3)通过突变病毒的基因，可用于研究病毒基因的功能；4)作为毒源，可用于筛选抗病毒的番茄品种及抗病毒的拟南芥突变体。

Tylcv-bj, a tomato yellow leaf curl virus isolate, and the construction method and application of its infective clone

【技术实现步骤摘要】
番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ及侵染性克隆构建方法和应用
本专利技术涉及基因工程领域，特别是涉及一种番茄黄化曲叶病毒分离物及其侵染性克隆构建方法和应用。
技术介绍
番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellowcurlvirus,TYLCV)是单链、环状的植物DNA病毒，属于双生病毒科，菜豆金色花叶病毒属。TYLCV能够侵染茄科多种蔬菜作物与经济作物，是我国及世界农业生产上重要的病原物。一般研究植物病毒的致病性和功能，需要首先获得该病毒的侵染性克隆。病毒的侵染性克隆是通过分子生物学的手段，利用基因工程技术体外构建具有侵染力的病毒。而已知的番茄黄化曲叶病毒TYLCV-SH2侵染力不强，不利于实验开展。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ及侵染性克隆构建方法和应用。本专利技术所述的番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ是本实验室从北京温室采集疑似番茄黄化曲叶病毒侵染的番茄样品上分离的，其全基因组序列如序列表中SEQIDNO:2所示。>将上述番茄黄化曲叶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ，其特征在于：全基因组序列如序列表中SEQID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ，其特征在于：全基因组序列如序列表中SEQIDNO:2所示。


2.一种菌株，其含有权利要求1所述的番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ。


3.根据权利要求2所述的菌株，其保藏号为CGMCCNO.19119，保藏日期：2019年12月9日。


4.权利要求1所述番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ的侵染性克隆构建方法，其特征在于：将1.4个串联重复的TYLCV-BJ基因组序列构建到pCambia2300载体上。


5.根据权利要求4所述的番茄黄化曲叶病毒分离物TYLCV-BJ侵染性克隆构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)使用限制性内切酶EcoRI与BamHI酶切T-TYLCV-BJ-DNA，获得约1.2kb的DNA片段，大约为基因组的0.4拷贝；连接到EcoRI与BamHI酶切后的pCambia2300载体上；将重组载体pCambia2300-TYLCV-BJ-0.4转化到大肠杆菌DH5a中，使用引物：
TYLCV-BJ-EcoRI-F与TYLCV-BJ-BamH-R筛选阳性克隆；TYLCV-BJ-EcoRI-F与TYLCV-BJ-BamH-R如SEQID：No.5-6所示；挑选阳性克隆，进行培养；提取培养目标克隆的质粒；通过DNA测序进行验证；
TYLCV-BJ-EcoRI-F...

【专利技术属性】
技术研发人员：李方方，龚攀，李浩，周雪平，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11