一种生防菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生防菌及其应用，本发明专利技术的一种生防菌，该菌株为生防菌；保藏名称为洞穴水杆菌Aquabacter cavernae Sn‑9‑2

A Biocontrol Bacterium and its application

【技术实现步骤摘要】
一种生防菌及其应用
本专利技术涉及生物农药
，尤其是涉及一种生防菌及其应用。
技术介绍
云南道地药材主要有三七、当归、云附子、重楼等。2017年云南省中药材种植面积747万亩，农业产值348.9亿元；其中，三七的种植面积80余万亩，农业产值高达120亿元，位居云南省中药材产值首位(杨馨等，2019)。根结线虫病早在10年前已成为三七种植的主要病害(杨沛文等，2008)；近年来，根结线虫病在云南的三七、当归、云附子、黄精等10多种药材上扩展蔓延迅速、泛滥成灾、常常造成毁灭性危害。三七等中药材一般直接入药，严格杜绝农残。灭线磷、涕灭威、呋喃丹等高毒高残化学杀线剂在中药材栽培中被禁用；阿维菌素几乎成为防治中药材根结线虫病的唯一可用药剂。随着线虫对阿维菌素抗药性的增强(Melissaetal.,2018)，长期依靠阿维菌素显然不能解决中药材根结线虫病的防控难题。在"减农药、减化肥"政策指引下，开发高效生物杀线剂已经成为“云药”产业可持续发展的迫切需求之一。继利用捕食线虫真菌(Arthrobotrysrobusta)开发的全球首个商品化线虫生防制剂(Royal300)问世后，利用淡紫紫孢菌(Purpureocilliumlilacinum，商品名：BioactWG，PLGold)、厚垣孢普可尼亚菌(Pochoniachlamydosporia，KlamiC、线虫必克)登记的杀线剂已在国内外用于植物线虫病的防治。食线虫细菌致死线虫的毒力因子主要包括伴胞晶体蛋白(Cry)、侵染性酶、毒性小分子代谢物、活性挥发物等(Colagieroetal.,2017)。利用生防菌Bacillusfirmus(商品名：BioNem、VoTiVo)、Pasteuriapenetrans(Econem)、Burkholderiacepacia(Deny、BlueCircle)、Paenobacillusmacerans&B.amyloliquefaciens(BioYield)、Bacillusspp.mixture(Biostart)开发的杀线剂已在不同国家登记和应用(Priyanketal.,2019)。目前，缺乏一种防治中药材根结线虫病的生防菌及其应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种防治中药材根结线虫病的生防菌及其应用。为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：本专利技术的一种生防菌，该菌株为生防菌；保藏名称为洞穴水杆菌AquabactercavernaeSn-9-2T菌株；保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是湖北省武汉市洪山区八一路；保藏日期：2019年8月8日；保藏编号：CCTCCNo:M2019582。进一步地，所述Sn-9-2T菌株为革兰氏阴性菌，在R2A培养基上，32℃下培养3天，菌落圆形，淡黄色，证件稍凸起，菌落直径1-2mm；细胞圆杆状，宽0.6-0.8μm，长1.3-2.0μm。进一步地，所述的R2A培养基包括酵母粉0.5g，蛋白胨0.5g，酪蛋白水解物0.5g，葡萄糖0.5g，可溶性淀粉0.5g，K2HPO40.3g，MgSO40.024g，丙酮酸钠0.3g，重蒸水1000.0ml，琼脂15.0g，pH7.2。更进一步地，所述的菌株在15-40℃的温度范围内生长，最适生长温度为30℃；在pH5.0-9.0的范围内可以生长，最适生长pH为7.0-8.0；在R2A培养基上耐受NaCl的最高浓度为1％(W/V)。本专利技术所述的生防菌制备的生防菌菌剂。进一步地，其活性成分为如下(a)(b)(c)中的至少一种：(a)所述的生防菌的发酵培养物；(b)所得生防菌细胞的超声裂解上清；(c)所得生防菌细胞的超声裂解沉淀。本专利技术制备所述生防菌菌剂的方法，包括如下步骤：(1)Sn-9-2T菌株试管斜面种子培养：将该菌株接种到R2A培养基斜面上，30℃下培养3天后获得斜面种子；(2)Sn-9-2T菌株液体种子培养：将斜面种子接种到装有R2A液体培养基的三角瓶中，30℃，200rpm条件下摇床培养3天获得液体种子；(3)Sn-9-2T菌株发酵罐大量培养：将液体种子按5％(V/V)的比例接入发酵罐中的R2A液体培养基中，在500升发酵罐中的培养条件控制在：温度30℃，搅拌速度150rpm，发酵时间72小时；(4)Sn-9-2T菌剂制备：经发酵罐培养获得的Sn-9-2T菌体及其代谢物与适量的硅藻土混合后在50℃以下烘干或晾干至水分含量小于7％，粉碎后制成；需保证Sn-9-2T菌株在菌剂中的活菌数含量在5×109个/克以上，制得生防菌剂。本专利技术所述的生防菌Sn-9-2T菌株在制备用于防治中药材根结线虫病的菌剂中的应用。有益效果：本专利技术利用Sn-9-2T菌株制备的菌剂，能高效防治三七、西洋参和当归根结线虫病，具有使用成本低、防效高、无残留、对人畜安全的特点。与现有技术相比，本专利技术具有如下优点：(1)利用Sn-9-2T菌株制备的菌剂对中药材根结线虫病的防效可达68％以上。利用Sn-9-2T菌株制备的菌剂，能高效防治中药材根结线虫病，保障有机药材的安全生产。(2)本专利技术的微生物菌体及其代谢产物，能与农药常规吸附载体和助剂混合制成Sn-9-2T菌剂。(3)洞穴水杆菌(Aquabactercavernae)Sn-9-2T菌株是本专利技术人2019年报道的一细菌新物种(Duoetal.,2019)。本专利技术人在近期的研究中首次发现Sn-9-2T菌株对根结线虫二龄幼虫有较强的活性，该细菌利用该菌株制备的菌剂对三七根结线虫、西洋参根结线虫、当归根结线虫的防效在68％以上，具备良好的应用前景；而该细菌的杀线虫活性及其在根结线虫病中的应用未见报道。具体实施方式以下通过实施例进一步说明本专利技术。本专利技术的一种生防菌，该菌株为生防菌；保藏名称为洞穴水杆菌AquabactercavernaeSn-9-2T菌株；保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是湖北省武汉市洪山区八一路；保藏日期：2019年8月8日；保藏编号：CCTCCNo:M2019582。所述Sn-9-2T菌株为革兰氏阴性菌，在R2A培养基上，32℃下培养3天，菌落圆形，淡黄色，证件稍凸起，菌落直径1-2mm；细胞圆杆状，宽0.6-0.8μm，长1.3-2.0μm。所述的R2A培养基包括酵母粉0.5g，蛋白胨0.5g，酪蛋白水解物0.5g，葡萄糖0.5g，可溶性淀粉0.5g，K2HPO40.3g，MgSO40.024g，丙酮酸钠0.3g，重蒸水1000.0ml，琼脂15.0g，pH7.2。所述的菌株在15-40℃的温度范围内生长，最适生长温度为30℃；在pH5.0-9.0的范围内可以生长，最适生长pH为7.0-8.0；在R2A培养基上耐受NaCl的最高浓度为1％(W/V)。本专利技术所述的生防菌制备的生防菌菌剂。其活性成分为如下(a)(b)(c)中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生防菌，其特征在于：该菌株为生防菌；保藏名称为洞穴水杆菌Aquabactercavernae Sn-9-2

【技术特征摘要】
1.一种生防菌，其特征在于：该菌株为生防菌；保藏名称为洞穴水杆菌AquabactercavernaeSn-9-2T菌株；保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是湖北省武汉市洪山区八一路；保藏日期：2019年8月8日；保藏编号：CCTCCNo:M2019582。


2.根据权利要求1所述的生防菌，其特征在于：所述Sn-9-2T菌株为革兰氏阴性菌，在R2A培养基上，32℃下培养3天，菌落圆形，淡黄色，证件稍凸起，菌落直径1-2mm；细胞圆杆状，宽0.6-0.8μm，长1.3-2.0μm。


3.根据权利要求1所述的生防菌，其特征在于：所述的R2A培养基包括酵母粉0.5g，蛋白胨0.5g，酪蛋白水解物0.5g，葡萄糖0.5g，可溶性淀粉0.5g，K2HPO40.3g，MgSO40.024g，丙酮酸钠0.3g，重蒸水1000.0ml，琼脂15.0g，pH7.2。


4.根据权利要求1所述的生防菌，其特征在于：所述的菌株在15-40℃的温度范围内生长，最适生长温度为30℃；在pH5.0-9.0的范围内可以生长，最适生长pH为7.0-8.0；在R2A培养基上耐受NaCl的最高浓度为1％(W/V)。


5.根据权利要求1所述的生防菌制备的生防菌菌剂。


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【专利技术属性】
技术研发人员：张滨，涂祖祥，白志勇，莫明和，陈佳清，
申请(专利权)人：云南天腾化工有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53