血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种从血清中分离纯化载脂蛋白A‑II的方法，包括利用疏水层析填料对血清中的载脂蛋白A‑II成分进行初步提纯，用不含盐的缓冲液洗杂，用含有有机醇的缓冲液洗脱并收集含A‑II载脂蛋白的洗脱液，以及利用阴离子交换层析填料对收集的含A‑II载脂蛋白的洗脱液进行精细提纯，用含有去污剂和有机醇的缓冲液对载脂蛋白A‑II进行柱上脱脂等步骤。本方法仅通过2步层析即得到纯度≥95％的载脂蛋白A‑II，回收率≥50％。

Separation and purification of serum apolipoprotein A-II

【技术实现步骤摘要】
血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法
本专利技术属于生物化学领域，具体涉及一种载脂蛋白AII的分离纯化方法。
技术介绍
ApoAⅡ是HDL中含量第二多的载脂蛋白，早在1985年ApoAⅡ蛋白质的氨基酸序列、cDNA序列及基因序列均已阐明。ApoAⅡ在人血清中以二聚体的形式存在，其单体分子量为8700Da。人ApoAⅡ蛋白C端氨基酸残基为谷氨酸，N端为吡咯烷酮酸，缺乏组氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoAⅡ有多态性存在，最主要的多态型等电点为4.9，而含量较少的多态型的等电点为5.17、4.68、4.42和4.20。ApoAⅡ的生理功能是：1、维持HDL结构。ApoAⅡ肽段12-31和肽段50-77具有与磷脂的结合能力，经二级结构分析认为，残基17-30和51-62形成的双性螺旋结构是人ApoAⅡ与脂质结合的分子基础。2、激活肝脂酶。用以水解CM和VLDL中的TG和PL。还有报道，ApoAⅡ可抑制LCAT活性。ApoAⅡ由肝脏和小肠合成。人血浆中的ApoAⅡ生物半寿期为4.4天。目前已知提取血清载脂蛋白A-II方法比较少，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，包括有以下步骤：/n1)利用疏水层析填料对血清中的载脂蛋白A-II成分进行初步提纯，用不含盐的缓冲液洗杂，用含有有机醇的缓冲液洗脱并收集含A-II载脂蛋白的洗脱液；/n2)利用阴离子交换层析填料对步骤1)中收集的含A-II载脂蛋白的洗脱液进行精细提纯，用含有去污剂和有机醇的缓冲液对载脂蛋白A-II进行柱上脱脂。/n

【技术特征摘要】
1.血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，包括有以下步骤：
1)利用疏水层析填料对血清中的载脂蛋白A-II成分进行初步提纯，用不含盐的缓冲液洗杂，用含有有机醇的缓冲液洗脱并收集含A-II载脂蛋白的洗脱液；
2)利用阴离子交换层析填料对步骤1)中收集的含A-II载脂蛋白的洗脱液进行精细提纯，用含有去污剂和有机醇的缓冲液对载脂蛋白A-II进行柱上脱脂。


2.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，疏水层析填料为PhenylSepharoseHighPerformance。


3.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，疏水层析初步提纯的过程包括平衡、上样、洗杂、洗脱。


4.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：所述步骤1)中，不含盐的缓冲液为pH7.4的20mMTris-HCl缓冲液。


5.根据权利要求1所述的血清载脂蛋白A-II的分离纯化方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏杰，王剑，王民燕，普筱薇，叶浩威，
申请(专利权)人：宁波赛珀生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33