TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。本发明专利技术通过建立基于THP‑1来源巨噬细胞的细胞炎症模型，探究TRPA1与P2X7间的相互作用以及TRPA1参与ATP诱导的炎症反应。研究结果表明，TRPA1能够与P2X7间相互作用，TRPA1参与ATP或BzATP引起的THP‑1来源巨噬细胞钙离子内流，线粒体活性氧产生，线粒体膜电位降低，线粒体损伤，caspase‑1活化，IL‑1β的分泌，细胞活性降低以及细胞毒性增加。TRPA1的抑制剂对细胞质及线粒体的钙离子内流具有显著抑制作用，能显著抑制线粒体活性氧的生成，明显抑制线粒体膜电位降低的趋势，明显抑制线粒体损伤发生，显著抑制caspase‑1的活化和IL‑1β的分泌，能明显抑制巨噬细胞活性降低。因此可以使用TRPA1的抑制剂来治疗ATP诱导的炎症反应。

The application of TRPA1 inhibitor in the preparation of inflammatory drugs

【技术实现步骤摘要】
TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用
本专利技术属于生物
，涉及TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。
技术介绍
腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)是动植物细胞线粒体内产生的重要能量物质，其能直接被细胞利用并为细胞提供代谢能量。当机体能量代谢发生紊乱或组织遭受损伤时，细胞膜发生破损，ATP从细胞内释放并进入血液。这些游离的ATP可作为信号分子，诱导免疫反应发生，促进巨噬细胞产生炎症发炎。有文献报道，当动脉粥样硬化或高血压发生时，机体血液中的ATP含量明显升高，当向疾病模型小鼠注射ATP时，会增加它们的疾病程度，这说明ATP可作为诱发动脉粥样硬化及高血压的重要刺激因素。ATP在细胞膜上的受体通常认为是嘌呤类受体家族(P2receptorfamily)包括P2X及P2Y两大类，其中P2X是离子通道类受体，而P2Y则是G蛋白偶联受体(GPCR)。在炎症反应中，P2X7离子通道受体被发现广泛参与炎症反应，包括炎症因子IL-1β，IL-18的分泌以及细胞焦亡。同时，P2X7还促进单核细胞的迁移，从而促使动脉粥样硬化的发生。巨噬细胞是一类介导天然免疫反应的免疫细胞，其由单核细胞分化而来。当机体遭受病原微生物等外源物质刺激时，巨噬细胞会大量增殖，吞噬病原菌并呈递抗原并激活细胞免疫反应。同时，巨噬细胞还会分泌大量炎症因子，以引起更为广泛的炎症反应。ATP是P2X7的重要刺激物，当ATP与P2X7结合后，P2X7介导钙离子内流，促使线粒体损伤以及线粒体活性氧的生成。同时，经脂多糖(LPS)诱导NLRP3炎症小体以及caspase-1和IL-1β前体转录翻译后，当巨噬细胞接受来自P2X7的信号时，NLRP3被激活并切割caspase-1和IL-1β前体，生成有活性的caspase-1和IL-1β。瞬时受体电位锚蛋白离子通道1(TRPA1)是瞬时受体电位超家族(TRP)的成员之一，其是一种非选择性阳离子通道，可以介导钙离子及钠离子内流。作为外源信号受体，TRPA1可以感受外界多种刺激物的刺激，包括活性氧，硫化氢等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。本专利技术通过免疫荧光检测P2X7及TRPA1在THP-1来源的巨噬细胞以及瞬时转染大鼠P2X7以及TRPA1质粒的HEK293T细胞株上的共定位；活细胞钙成像检测TRPA1参与介导P2X7激动剂BzATP诱导下的钙离子变化；进一步抑制TRPA1后发现，TRPA1的抑制剂对细胞质及线粒体的钙离子内流具有显著抑制作用，能显著抑制线粒体活性氧的生成，明显抑制线粒体膜电位降低的趋势，明显抑制线粒体损伤发生，显著抑制caspase-1的活化和IL-1β的分泌，能明显抑制巨噬细胞活性降低。推测ATP刺激P2X7，胞外钾离子水平升高，促进TRPA1通道开放，介导钙离子内流，从而引起线粒体活性氧产生，线粒体损伤增加，从而引起巨噬细胞产生炎症反应并促使其凋亡，从而造成相应的疾病产生。这些结果表明TRPA1在ATP诱导的炎症反应及相关疾病中具有重要作用，可作为治疗ATP引起的相关疾病的潜在靶标。因此，本专利技术的第一个目的是提供TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。本专利技术的第二个目的是提供一种治疗炎症药物，其包含TRPA1的抑制剂作为活性成分。所述的治疗炎症药物是治疗ATP引起的炎症的药物。所述的TRPA1的抑制剂为A967079、HC030031或AP-18。本专利技术通过建立基于THP-1来源巨噬细胞的细胞炎症模型，探究TRPA1与P2X7间的相互作用以及TRPA1参与ATP诱导的炎症反应。研究结果表明，TRPA1能够与P2X7间相互作用，TRPA1参与ATP或BzATP引起的THP-1来源巨噬细胞钙离子内流，线粒体活性氧产生，线粒体膜电位降低，线粒体损伤，caspase-1活化，IL-1β的分泌，细胞活性降低以及细胞毒性增加。TRPA1的抑制剂对细胞质及线粒体的钙离子内流具有显著抑制作用，能显著抑制线粒体活性氧的生成，明显抑制线粒体膜电位降低的趋势，明显抑制线粒体损伤发生，显著抑制caspase-1的活化和IL-1β的分泌，能明显抑制巨噬细胞活性降低。因此可以使用TRPA1的抑制剂来治疗ATP诱导的炎症反应。附图说明图1A为TRPA1和P2X7在THP-1来源巨噬细胞上的共定位；图1B为对灰度图进行分析，TRPA1和P2X7在THP-1来源巨噬细胞上具有很好的共定位结果；图1C为TRPA1和P2X7在瞬时转染HEK293T细胞株上的共定位；图1D为TRPA1和P2X7在THP-1来源巨噬细胞上的三位共定位图；图2A为TRPA1参与调控ATP诱导的胞质及线粒体钙离子内流；图2B为BzATP可显著促进胞质钙离子内流，阻断TRPA1能抑制胞质钙离子的增加；图2C为BzATP可显著促进线粒体钙离子内流，阻断TRPA1能抑制线粒体钙离子的增加；图2D为BzATP促进胞质钙离子内流及TRPA1阻断胞质钙离子内流的结果具有显著性(****p<0.0001)；图2E为BzATP促进线粒体钙离子内流及TRPA1阻断线粒体钙离子内流的结果具有显著性(****p<0.0001)；图3A为TRPA1参与调控ATP诱导的THP-1来源巨噬细胞产生线粒体活性氧；图3B为ATP可显著促进THP-1来源的巨噬细胞产生线粒体活性氧，阻断TRPA1可显著抑制线粒体活性氧的产生(****p<0.0001)；图4A为TRPA1参与调控BzATP诱导的THP-1来源巨噬细胞线粒体膜电位降低；图4B为BzATP可显著促进THP-1来源的巨噬细胞线粒体膜电位降低，阻断TRPA1可显著抑制线粒体膜电位降低的产生(**p<0.01，***p<0.001)；图4C为ATP促进线粒体膜电位降低的过程随刺激时间的增加而增强，阻断TRPA1可抑制这一过程；图5为ATP可促进线粒体损伤并造成线粒体形态发生改变，阻断TRPA1可抑制ATP引起的线粒体损伤；图6A为TRPA1参与调控ATP诱导的IL-1β的分泌(*p<0.05)；图6B为TRPA1参与调控BzATP诱导的IL-1β的分泌(**p<0.01)；图6C为TRPA1参与调控ATP诱导的caspase-1的活化以及IL-1β的分泌；图7A为TRPA1参与调控ATP诱导的THP-1来源巨噬细胞活性的降低(*p<0.05，#p<0.05，##p<0.01；*versusATP，#versuscontrolgroup；NC表示nosignificance)；图7B为TRPA1参与调控BzATP诱导的THP-1来源巨噬细胞毒性增强(****p<0.0001)。具体实施方式下面结合具体实施方案对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1：TRPA1调控ATP诱导的THP-1来源巨噬细胞产生炎症反应目的：本研究将通过建立THP-1来源巨噬细胞体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.TRPA1的抑制剂在制备治疗炎症药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗炎症药物是治疗ATP诱导的炎症的药物。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的TRPA1的抑制剂为A967079、HC030031或AP-18。


4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志远，田超，刘雨杰，汤凤，徐浚杰，
申请(专利权)人：广州浚远康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44