一种降脂多肽及其制药应用制造技术

本发明专利技术设计了一种新的降脂多肽P48，其能够增加半衰期，发挥其GLP‑1受体激动剂的作用，同时能够发挥GLP‑1类似物的作用调节个体脂肪含量。P48肽能够抑制高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝模型小鼠的进食，显著降低肥胖小鼠体重，降低肥胖小鼠血脂水平，保持肝脏正常形态，抑制肝细胞损伤，降低肝脏内脂质的累积及细胞的空泡变形，提高血液脂联素瘦素的水平，发挥其降糖调脂作用；同时显著改善胰岛素耐量和糖耐量。具有潜在制备治疗和预防肥胖或其并发症非酒精性脂肪肝药物的制药应用。

A lipid-lowering polypeptide and its pharmaceutical application

【技术实现步骤摘要】
一种降脂多肽及其制药应用
本专利技术属于药学及医学相关技术，特别是涉及一种新型降脂多肽，及其在制备治疗或预防肥胖及其并发症等药物中的应用。
技术介绍
截至2014年，全球共有19亿成人超重，其中超过6亿人为肥胖。当生活方式干预无效，即不能使体重减轻5％，BMI指数仍大于28时，推荐其进行药物治疗；超重且伴有一种并发症(心血管疾病、高血压、2型糖尿病等)的患者，经生活干预无效，也推荐其进行药物治疗。全球有超过10亿患者需要药物治疗。改变生活方式是肥胖治疗的主要方法，仅仅依赖于饮食控制的来维持长期减肥较为困难，虽然已经研究出了许多治疗肥胖的手段，但多存在毒副作用及不良反应。因此，研究和开发针对肥胖的药物具有重要的科学意义和社会价值。非酒精性脂肪肝(NAFLD)表现为一系列的肝脏疾病，从简单脂肪变性到其更严重的形式，称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，肝细胞损伤，肝脏炎症，常伴有纤维化。患者通常肥胖或患有2型糖尿病(T2DM)，并且发生肝硬化和肝细胞癌的风险增加。据研究表明，NAFLD将在2020年之前成为肝移植的主要原因，肥胖症流行的增加，约70％以上的肥胖个体(特别是T2DM)患有NAFLD，他们其中50％可能患有NASH。NASH的发展也与心血管疾病(CVD)的死亡风险相关，该疾病已成为欧美等国家和我国富裕地区慢性肝病的主要病因，改变生活方式是肥胖治疗的主要方法，仅仅依赖于饮食控制的来维持长期减肥是较为困难的，虽然已经研究出了许多治疗NASH的手段，但是没有一个经FDA批准。因此，研究和开发针对非酒精性脂肪肝的药物具有重要的科学意义和社会价值。胰高血糖素样肽-1(glucagon-likepeptide-1，GLP-1)是由胰高血糖素原基因编码，后经加工修饰得到的30个氨基酸的肠降血糖素(incretin)。主要由小肠黏膜的L细胞合成并分泌，在胰岛的α细胞也有表达。GLP-1具有两种生物活性形式，GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺，血液循环中主要以GLP-1(7-36)酰胺的活性形式存在，两者具有共同的生物学活性。天然人GLP-1的稳定性较差，易被二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)降解，并快速被肾脏清除,其半衰期t1/2≤2min。GLP-1经DPPⅣ切割掉N末端His-Ala，生成GLP-1(9-36)氨基多肽，最初研究认为，GLP-1(9-36)氨基多肽不具有生物学活性，而且对GLP-1受体(GLP-1R)还具有一定的拮抗作用，近些年发现GLP-1(9-36)氨基多肽具有类胰岛素的作用。GLP-1的生理作用主要包括三个部分，一是通过与GLP-1R结合，发挥生理学效应，包括：①葡萄糖依赖性促胰岛素分泌；②抑制胰高血糖素分泌；③延迟胃排空，降低食欲，减少饮食，控制体重；④抑制β细胞凋亡，促进β细胞增值和分化。二是，GLP-1经过DPPⅣ降解，生成GLP-1(9-36)氨基多肽，能够抑制肝脏糖异生酶和脂肪酸合酶的表达，抑制糖异生和肝脏脂肪合成，发挥类胰岛素作用。三是GLP-1(9-36)氨基多肽经过肽链内切酶(NEP24.11)切割成GLP-1(32-36)氨基5肽，在肥胖型小鼠上增加能量消耗，抑制体重增长。
技术实现思路
专利技术目的：针对上述现有技术，本申请设计了一条新的降脂多肽，并提供了所述降脂多肽在制备治疗和预防肥胖及其并发症(非酒精性脂肪肝)药物中的应用。技术方案：本专利技术所述的一种降脂多肽，代号P48，氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。SEQIDNO：1HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGSSGAPPPSEYVTLKKMREIIGWPGGSGD本专利技术还公开了所述降脂多肽在制备治疗或预防肥胖药物中的应用。本专利技术还进一步公开了所述降脂多肽在制备治疗或预防肥胖并发症非酒精性脂肪肝药物中的应用。本专利技术所述的一种药物组合物，包括上述的降脂多肽和/或其衍生物和类似物，以及药物载体。本专利技术还进一步公开了所述药物组合物在制备治疗或预防肥胖症药物或者肥胖并发症非酒精性脂肪肝药物中的应用。本专利技术利用计算机辅助分析的方法，将GLP-1和艾塞那肽(Exendin-4)以及谷氨酸脱羧酶(GAD，Glutamatedecarboxylase)中部分氨基酸顺序打乱后得到的一条59肽，即P48肽，其获得比上述三者更强的药效和新的作用机制，能有效改善NAFLD模型小鼠的病理状况。有益效果：本专利技术通过氨基酸替换和末尾添加小肽片段，构建了一种新型降脂P48肽。并且通过实验结果证明P48肽能够显著降低肥胖小鼠体重，并能够轻微抑制进食。生化指标检测及病理切片观察发现，P48能够降低肥胖个体血脂水平，抑制肝细胞损伤，降低肝脏内脂质的累积及细胞的空泡变形(优于正常饮食对照组，HE染色，油红O染色)，提高血清中肥胖抵抗因子(瘦素，脂联素)的水平。对比市面上已有类似物(利拉鲁肽)和临床常用肝脏保护药物(熊去氧胆酸)具有有效性更好，作用更明显，具有潜在的制药应用前景。胰岛功能的研究发现，P48能够显著改善NAFLD模型小鼠葡萄糖耐量，同时显著提高小鼠胰岛素敏感性。附图说明图1P48对NAFLD模型小鼠累计进食的影响；图2P48对NAFLD模型小鼠体重的影响；图3P48对NAFLD模型小鼠血脂的影响(Cholesterol,HDL-C,LDL-C)；图4P48对NAFLD模型小鼠肝细胞损伤的影响；图5P48对NAFLD模型小鼠肝脏脂肪变性(HE染色)的影响；图6P48对NAFLD模型小鼠肝脏脂肪累积(油红O染色)的影响；图7P48对NAFLD模型小鼠的瘦素(Leptin)水平的影响；图8P48对NAFLD模型小鼠的脂联素(Adiponectin)水平的影响；图9P48对NAFLD模型小鼠胰岛素耐量的影响(IPITT)；图10P48的糖依赖性的促胰岛素分泌作用(IPGTT)。具体实施方式下面结合实施例对专利技术做进一步详细说明。本专利技术降脂肽P48根据GLP-1的野生型进行改造，第2位的氨基酸由Ala替换成Gly，在GLP-1的末尾添加Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Glu-Tyr-Val-Thr-Leu-Lys-Lys-Met-Arg-Glu-Ile-Ile-Gly-Trp-Pro-Gly-Gly-Ser-Gly-Asp，延长其半衰期。序列如下：GLP-1：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRGExendin-4:HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPP48：实施例1：P48的药效学评价1、NAFLD模型小鼠造模，及分组50只8周龄的雄性c57小鼠(购自南京大学-南京生物医药研究院，许可证号：SCXK(苏)2016-0011)，适应性饲养1周，后持续28周的高脂肪饲料(HFD，D12492,购本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降脂多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种降脂多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。


2.权利要求1所述降脂多肽在制备治疗或预防肥胖药物中的应用。


3.权利要求1所述降脂多肽在制备治疗或预防非酒精性脂肪肝药物中的应用。


4....

【专利技术属性】
技术研发人员：金亮，李凯莹，张艳峰，潘怡，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32