一种针对EGFR L858R基因突变的特异性TCR及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种针对EGFR L858R基因突变的特异性TCR及其应用，所述TCR具有结合衍生自EGFR L858R基因突变的新抗原肽KITDFGRAK‑HLA‑A1101复合物的特性，所述TCR包含α链和β链的可变区和恒定区。经过该类TCR修饰的T细胞具有对EGFR L858R基因突变的HLA‑A1101肿瘤细胞的特异性杀伤作用。另外，本发明专利技术还提供了用于治疗涉及表达所述基因突变的肿瘤的药物组合，具有特异性强，个体化治疗效果好的特点。

A specific TCR for EGFR L858R gene mutation and its application

【技术实现步骤摘要】
一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR及其应用
本专利技术涉及基因工程及肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR及其应用。
技术介绍
肿瘤免疫治疗是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。TCR(Tcellreceptor)疗法即T细胞受体疗法，在该疗法中，分离出内源的T细胞，加以工程化改造，并输注回人体。这样一来，带有靶向癌细胞能力的T细胞数量将大增。这种方法除了能像细胞毒性化疗和靶向治疗快速杀灭肿瘤外，还避免了疫苗和免疫检查点抑制剂疗法的延迟效应。TCR-T是继肿瘤手术、放疗、化疗、靶向治疗之后的最有发展前景的肿瘤治疗技术之一，无论是国际还是国内都是目前肿瘤免疫治疗的研究热点。TCR是所有T细胞表面的特征性标志，具有识别抗原呈递细胞(APC)上人类主要组织相容性复合体(MHC)分子-抗原肽复合体的能力。TCR是由α、β两条肽链构成的异二聚体，每条肽链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区和胞质区等几部分；其胞质区很短，信号传递主要通过与其以非共价键结合的CD3分子进行。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于V区；V区又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3变异最大，直接决定了TCR的抗原结合特异性。在TCR识别MHC-抗原肽复合体时，CDR3可直接与抗原肽相结合。TCR在识别APC或者靶细胞上的MHC分子所提呈的抗原肽时，既要识别抗原肽，同时也要识别自身MHC分子的多态性部分，此现象即MHC限制性。T细胞通过特异性T细胞受体识别肿瘤细胞表面抗原肽-MHC复合体而被激活，活化后的T细胞可以直接溶解肿瘤细胞，或通过分泌细胞因子如干扰素、肿瘤坏死因子等抑制肿瘤生长。CD8+T细胞介导的特异性MHC-I类分子限制细胞免疫功能，在抗肿瘤免疫中尤其重要。HLA(humanlymphocyteantigen，人类淋巴细胞抗原)，受控于MHC的基因簇，是具有高度多态性的同种异体抗原，是目前所知人体最复杂的遗传多态性系统，有几十个基因座位，每个基因座位又有几十个等位基因，且呈共显性表达。HLA有A、B、C、D和DR5个位点，分别称为HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-D和HLA-DR。EGFR(epidermalgrowthfactorreceptorfamily)人类表皮生长因子受体家族属于酪氨酸激酶受体家族，也被称作HER家族或erbB家族。EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。EGFR诱导癌症至少通过3种机制：EGFR配体的过表达、EGFR的扩增或EGFR的突变活化，其中以EGFR的突变活化为主要机制。EGFR基因是由28个外显子组成，其中外显子18-21是最见的基因突变位点，也是与易瑞沙等EGFR-TKI最敏感的位点。通常来说，EGFR的外显子19缺失和21的L858R两个突变对于易瑞沙靶点是敏感的。因此EGFR的外显子19缺失的检测和21的L858R突变可以作为肿瘤患者是否适用EGFR-TKI的一个重要的判断标准。肿瘤细胞会发生大量基因突变，有些突变会改变氨基酸编码序列，导致肿瘤细胞表达正常细胞所没有的异常蛋白。这些异常蛋白在细胞内(肿瘤细胞或抗原呈递细胞)被蛋白酶酶解成肽段(抗原表位)，与MHC-I类或MHC-II类分子高亲和力结合，并以复合物形式呈递到细胞表面，与T细胞受体结合，T细胞被激活；激活后的T细胞扩增，浸润肿瘤微环境，识别并杀伤肿瘤细胞。这种肿瘤细胞特异性的异常蛋白称为的新抗原(neoantigen)。TCR-T细胞治疗包括肿瘤特异性TCR的选取、TCR表达载体构建、TCR-T改造后细胞回输、免疫进程监测等关键技术和治疗手段。与同类型的CAR-T细胞治疗技术相比，TCR-T具有更广泛抗原选择空间，因此，不仅能扩充其适用肿瘤范围，还有望减少脱靶效应。尽管TCR-T在临床前测试和小范围病人治疗中取得一定成功，但TCR-T的临床试验数据仍然匮乏。同时，由于TCR-T的研发仍在初级阶段，临床治疗品质的TCR-T和T细胞还有待改进，更重要的是，TCR-T的有效患者人群以及新型构造的TCR-T的临床治疗效果还有待验证。
技术实现思路
本专利技术旨在一定程度上解决上述相关技术中的技术问题之一。因此，本专利技术的目的在于提供一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR及其应用。一方面，本专利技术提供一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR，所述TCR能够与KITDFGRAK-HLA-A1101复合物结合，所述TCR包含α链和β链，TCRα链包含：可变区序列(SEQIDNO:05)和TRAC类型的恒定区序列；TCRβ链包含：可变区序列(SEQIDNO:07)和TRBC1类型的恒定区序列；所述TCRα链可变区序列(SEQIDNO:05)包含α链CDR3区，所述TCRβ链可变区序列(SEQIDNO:07)包含β链CDR3区。所述TCRα链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:05)的编码核苷酸序列为SEQID：06。所述TCRβ链可变区的氨基酸序列(SEQIDNO:07)的编码核苷酸序列为SEQIDNO:08。所述TCR为α链，β链异源二聚体结构。所述TCRα链CDR3区为与CASPAGNTDKLIF(SEQIDNO:01)序列具有至少70％相同序列的氨基酸序列。所述TCRβ链CDR3区为与CASSYSDRNQPQHF(SEQIDNO:03)序列具有至少70％相同序列的氨基酸序列。所述SEQIDNO:01的氨基酸序列的编码核苷酸序列为SEQIDNO:02。所述SEQIDNO:03的氨基酸序列的编码核苷酸序列为SEQIDNO:04。另一方面，本专利技术提供一种T细胞，为细胞膜表达所述TCR的T细胞。所述T细胞，为CD8阳性T细胞。所述T细胞，对EGFRL858R突变的HLA-A1101肿瘤细胞有特异性杀伤作用。所述的T细胞，用于制备抗肿瘤药物或药物组合。再一方面，本专利技术提供一种抗肿瘤药物或药物组合。所述抗肿瘤药物或药物组合，包含TCR、T细胞或TCR-T的一种或几种。所述药物或药物组合用于治疗HLA-A1101患者。优选地，所述抗肿瘤药物及药物组合，用于治疗涉及表达EGFRL858R突变的恶性肿瘤。优选地，所述肿瘤包括肺癌、中枢神经肿瘤、结直肠癌、胃癌、子宫内膜癌等。本专利技术的有益效果是：通过输注能够识别特异靶标的基因修饰T细胞，赋予免疫系统以新的非自然免疫活性。应用本专利技术提供的TCR或T细胞制备的抗肿瘤药物及药物组合，具有特异性强，个体化治疗效果好的特点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对EGFR L858R基因突变的特异性TCR，其特征在于，所述TCR能够与KITDFGRAK-HLA-A1101复合物结合，所述TCR包含α链和β链，TCRα链包含：可变区序列（SEQID NO:05）和TRAC类型的恒定区序列；TCRβ链包含：可变区序列（SEQ ID NO:07）和TRBC1类型的恒定区序列；所述TCRα链可变区序列（SEQ ID NO:05）包含α链CDR3区，所述TCRβ链可变区序列（SEQ ID NO:07）包含β链CDR3区。/n

【技术特征摘要】
1.一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR，其特征在于，所述TCR能够与KITDFGRAK-HLA-A1101复合物结合，所述TCR包含α链和β链，TCRα链包含：可变区序列（SEQIDNO:05）和TRAC类型的恒定区序列；TCRβ链包含：可变区序列（SEQIDNO:07）和TRBC1类型的恒定区序列；所述TCRα链可变区序列（SEQIDNO:05）包含α链CDR3区，所述TCRβ链可变区序列（SEQIDNO:07）包含β链CDR3区。


2.一种T细胞，其特征在于，为细胞膜表达所述TCR的T细胞。


3.根据权利要求书1所述的TCR，其特征在于，所述TCR为α链，β链异源二聚体结构。


4.根据权利要求书1所述的TCR，其特征在于，所述TCRα链CDR3区为与C...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜学明，霍冲，邓丽刚，邹庆薇，
申请(专利权)人：天津亨佳生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12