一种针对EGFR L858R基因突变的特异性T细胞受体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种针对EGFR L858R基因突变的特异性TCR及其应用，所述TCR具有结合衍生自EGFR L858R基因突变的新抗原肽KITDFGRAK‑HLA‑A*1101复合物的特性，所述TCR包含α链和β链的可变区和恒定区。经过该类TCR修饰的T细胞具有对EGFR L858R基因突变的HLA‑A*1101肿瘤细胞的特异性杀伤作用。另外，本发明专利技术还提供了用于治疗涉及表达所述基因突变的肿瘤的药物组合，具有特异性强，个体化治疗效果好的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体及其应用
本专利技术涉及基因工程及肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体及其应用。
技术介绍
肿瘤免疫治疗是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。TCR（Tcellreceptor）疗法即T细胞受体疗法，在该疗法中，分离出内源的T细胞，加以工程化改造，并输注回人体。这样一来，带有靶向癌细胞能力的T细胞数量将大增。这种方法除了能像细胞毒性化疗和靶向治疗快速杀灭肿瘤外，还避免了疫苗和免疫检查点抑制剂疗法的延迟效应。TCR-T是继肿瘤手术、放疗、化疗、靶向治疗之后的最有发展前景的肿瘤治疗技术之一，TCR-T无论是国际还是国内都是目前肿瘤免疫治疗的研究热点之一。T细胞受体（简称TCR）是所有T细胞表面的特征性标志，具有识别抗原呈递细胞（APC）上人类主要组织相容性复合体（MHC）分子-抗原肽复合体的能力。TCR是由α、β两条肽链构成的异二聚体，每条肽链分为可变区（V区）、恒定区（C区）、跨膜区和胞质区等几部分；其胞质区很短，信号传递主要通过与其以非共价键结合的CD3分子进行。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于V区；V区又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3变异最大，直接决定了TCR的抗原结合特异性。在TCR识别MHC-抗原肽复合体时，CDR3可直接与抗原肽相结合。TCR在识别APC或者靶细胞上的MHC分子所提呈的抗原肽时，既要识别抗原肽，同时也要识别自身MHC分子的多态性部分，此现象即MHC限制性。T细胞通过特异性T细胞受体识别肿瘤细胞表面抗原肽-MHC复合体而被激活，活化后的T细胞可以直接溶解肿瘤细胞，或通过分泌细胞因子如干扰素、肿瘤坏死因子等抑制肿瘤生长。CD8+T细胞介导的特异性MHC-I类分子限制细胞免疫功能，在抗肿瘤免疫中尤其重要。HLA（humanlymphocyteantigen，人类淋巴细胞抗原），受控于MHC的基因簇，是具有高度多态性的同种异体抗原，是目前所知人体最复杂的遗传多态性系统，有几十个基因座位，每个基因座位又有几十个等位基因，且呈共显性表达。HLA有A、B、C、D和DR5个位点，分别称为HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-D和HLA-DR。EGFR（epidermalgrowthfactorreceptorfamily）人类表皮生长因子受体家族属于酪氨酸激酶受体家族，也被称作HER家族或erbB家族。EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。EGFR诱导癌症至少通过3种机制：EGFR配体的过表达、EGFR的扩增或EGFR的突变活化，其中以EGFR的突变活化为主要机制。EGFR基因是由28个外显子组成，其中外显子18-21是常见的基因突变位点，也是与易瑞沙等EGFR-TKI结合的位点。通常来说，EGFR的外显子19缺失和外显子21的L858R两个突变对于易瑞沙靶点是敏感的。因此EGFR的外显子19缺失和外显子21的L858R突变可以作为肿瘤患者是否适用EGFR-TKI的一个重要的判断标准，其中L858R基因突变，也就是EGFR蛋白的第858个氨基酸从L(亮氨酸)突变成了R(精氨酸)。肿瘤细胞会发生大量基因突变，有些突变会改变氨基酸编码序列，导致肿瘤细胞表达正常细胞所没有的异常蛋白。这些异常蛋白在细胞内（肿瘤细胞或抗原呈递细胞）被蛋白酶酶解成肽段（抗原表位），与MHC-I类或MHC-II类分子高亲和力结合，并以复合物形式呈递到细胞表面，与T细胞受体结合，T细胞被激活；激活后的T细胞扩增，浸润肿瘤微环境，识别并杀伤肿瘤细胞。这种肿瘤细胞特异性的异常蛋白称为的新抗原（neoantigen）。TCR-T细胞治疗包括肿瘤特异性TCR的选取、TCR表达载体构建、TCR-T改造后细胞回输、免疫进程监测等关键技术和治疗手段。与同类型的CAR-T细胞治疗技术相比，TCR-T具有更广泛抗原选择空间，因此，不仅能扩充其适用肿瘤范围，还有望减少脱靶效应。但由于TCR-T的研发仍在初级阶段，针对特定突变和相应分型患者人群的有效TCR仍然非常匮乏。同时，TCR-T的有效患者人群以及新型构造的TCR-T的治疗效果还有待验证。
技术实现思路
本专利技术旨在一定程度上解决上述相关技术中的技术问题之一。因此，本专利技术的目的在于提供一种针对EGFRL858R基因突变的特异性TCR及其应用。本专利技术提供一种针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体，所述T细胞受体能够与KITDFGRAK-HLA-A*1101复合物结合。其中，所述T细胞受体包含α链和β链，所述α链CDR3区为与SEQIDNO:02序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的氨基酸序列。进一步，所述α链CDR3区的氨基酸序列为SEQIDNO:02所示的序列。进一步，所述α链CDR3区的核苷酸序列为SEQIDNO:01所示的序列。其中，所述α链的可变区序列包含CDR3，所述α链的可变区序列的氨基酸序列为SEQIDNO:06所示的序列。进一步，所述α链的可变区序列的核苷酸序列为SEQIDNO:05所示的序列。其中，所述T细胞受体β链CDR3区为与SEQIDNO:04序列具有至少70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的氨基酸序列。进一步，β链CDR3区的氨基酸序列为SEQIDNO:04所示的序列。进一步，β链CDR3区的核苷酸序列为SEQIDNO:03所示的序列。所述β链的可变区序列包含CDR1、CDR2和CDR3，其中所述β链的CDR3区的核苷酸中，所述β链的可变区序列包含CDR3，所述可变区序列的氨基酸序列为SEQIDNO:08所示的序列。进一步，所述β链的可变区序列的核苷酸序列为SEQIDNO:07所示的序列。其中，所述T细胞受体为α链和β链异源二聚体结构，所述α链和β链的恒定区序列，可以为人源或鼠源恒定区序列。本专利技术提供一种载体，所述载体含有上述TCR序列的核酸分子或其氨基酸序列对应的密码子优化的核酸分子。优选的，所述载体为病毒载体。更优选的，所述载体为慢病毒载体。本专利技术还提供一种细胞，所述细胞在细胞膜表达所述的T细胞受体。优选的，所述细胞为T细胞。更优选的，所述细胞为CD8阳性T细胞。其中，所述T细胞对EGFRL858R突变的HLA-A*1101肿瘤细胞有特异性杀伤作用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对EGFR L858R基因突变的特异性T细胞受体，其特征在于，所述T细胞受体能够与KITDFGRAK-HLA-A*1101复合物结合。/n

【技术特征摘要】
1.一种针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体，其特征在于，所述T细胞受体能够与KITDFGRAK-HLA-A*1101复合物结合。


2.根据权利要求1所述的针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体，其特征在于，包含α链和β链，所述α链CDR3区为与SEQIDNO:02所示序列具有至少70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的氨基酸序列；或者所述α链CDR3区的氨基酸序列为SEQIDNO:02所示的序列。


3.根据权利要求书2所述的针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体，其特征在于，所述α链的可变区序列包含CDR3，所述可变区序列的氨基酸序列为SEQIDNO:06所示的序列。


4.根据权利要求1或2或3所述的针对EGFRL858R基因突变的特异性T细胞受体，其特征在于，β链CDR3区为与SEQIDNO:04所示序列具有至少70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且具有相同功能的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜学明，李凤娥，霍冲，邓丽刚，邹庆薇，王亚玲，
申请(专利权)人：天津亨佳生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12