一种人纤维蛋白原的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种人纤维蛋白原的制备方法，以冷沉淀为起始原料，包括如下步骤：(1)冷沉淀溶解；(2)甘氨酸沉淀；(3)甘氨酸沉淀的溶解及过滤；(4)S/D病毒灭活处理；(5)乙醇沉淀；(6)乙醇沉淀的溶解；(7)Q Sepharose fastflow凝胶层析处理；(8)超滤；(9)原液配制、除菌分装、冻干、轧盖、干热灭活后得到产品。本发明专利技术所述的人纤维蛋白原的制备方法，采用甘氨酸和乙醇沉淀结合色谱凝胶纯化生产工艺，生产步骤简便，易操作且成本较低，便于规模化生产；按本方法制备的人纤维蛋白原成品，纯度达到90％以上；冻干制剂的复溶时间小于5min。

【技术实现步骤摘要】
一种人纤维蛋白原的制备方法
本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种人纤维蛋白原的制备方法。
技术介绍
人纤维蛋白原为凝血因子，在临床应用上主要是治疗获得性纤维蛋白原减少症：严重肝脏损伤；肝硬化；弥散性血管内凝血；产后大出血和因大手术、外伤或内出血等引起的纤维蛋白原缺乏而造成的凝血障碍。人纤维蛋白原为人源性血液制剂，临床副作用少，其制备过程含专门的病毒灭活工艺，安全性具有可靠的保障，作为治疗出血性外科用必备制剂，目前国内属紧缺药物。目前国内已上市销售的冻干人纤维蛋白原制品，一是复溶溶解时间较长，平均需要20分钟以上；二是纯度较低，一般在70～80％左右。这些低纯度的人纤维蛋白原制品在临床应用中普遍存在外观不佳、使用不方便以及存在致血栓风险。随着我国人口老龄化趋势加剧，以及肝病患者人数居高不下，国内临床上对人纤维蛋白原制剂的需求也逐年加大，现阶段如何研发出高纯度、高活性、安全性高，能速溶的人纤维蛋白原制剂具有积极意义。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术的目的是要提供一种使用简易层析法提取人纤维蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人纤维蛋白原的制备方法，以冷沉淀为起始原料，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)冷沉淀溶解，包括如下步骤：/n(a)将切碎的冷沉淀倒入6～10倍冷沉淀重量的溶解液Ⅰ中溶解，搅拌溶解2～3h，溶解后制品的最终温度控制在24～26℃；/n(b)将步骤(a)中溶解后制品离心收集上清液Ⅰ；澄清过滤，用溶解液Ⅰ顶洗至冷沉淀重量的8～10倍，得到滤液；/n(2)甘氨酸沉淀：计量步骤(b)中所述滤液的重量，在搅拌状态下缓慢加入甘氨酸，加完后继续搅拌1～2h，并降温至5～9℃后离心，收集甘氨酸沉淀；/n(3)甘氨酸沉淀的溶解及过滤：准确称量步骤(2)中所述甘氨酸沉淀的重量，加入到4～6倍甘氨酸沉淀重量...

【技术特征摘要】
1.一种人纤维蛋白原的制备方法，以冷沉淀为起始原料，其特征在于：包括如下步骤：
(1)冷沉淀溶解，包括如下步骤：
(a)将切碎的冷沉淀倒入6～10倍冷沉淀重量的溶解液Ⅰ中溶解，搅拌溶解2～3h，溶解后制品的最终温度控制在24～26℃；
(b)将步骤(a)中溶解后制品离心收集上清液Ⅰ；澄清过滤，用溶解液Ⅰ顶洗至冷沉淀重量的8～10倍，得到滤液；
(2)甘氨酸沉淀：计量步骤(b)中所述滤液的重量，在搅拌状态下缓慢加入甘氨酸，加完后继续搅拌1～2h，并降温至5～9℃后离心，收集甘氨酸沉淀；
(3)甘氨酸沉淀的溶解及过滤：准确称量步骤(2)中所述甘氨酸沉淀的重量，加入到4～6倍甘氨酸沉淀重量的溶解液Ⅱ中溶解，搅拌溶解不少于1h，溶解液温度最终控制在24～26℃；离心，收集上清液Ⅱ；澄清过滤，并用溶解液Ⅱ顶洗至甘氨酸沉淀重量的5～8倍，得到蛋白液；
(4)S/D病毒灭活处理：准确计量步骤(3)中所述蛋白液的重量，在搅拌下缓慢加入配制好的S/D溶液进行病毒灭活处理；
(5)乙醇沉淀：将步骤(4)中灭活后制品加入到稀释液中，并降温至6～9℃；加入0℃以下的50wt％乙醇，反应最终温度控制在5～8℃，乙醇加毕，继续搅拌，离心收集乙醇沉淀；
(6)乙醇沉淀的溶解：准确计量步骤(5)中所述乙醇沉淀的重量，加入到8倍乙醇沉淀重量的溶解液Ⅲ中溶解，溶解温度控制在24～28℃，搅拌溶解不少于1h；离心收集上清液Ⅲ，澄清过滤，并用溶解液Ⅲ顶洗制品；
(7)QSepharosefastflow凝胶层析处理：将步骤(6)中澄清过滤后的溶液经QSepharosefastflow凝胶吸附层析处理，得到收集液；
(8)超滤：对步骤(7)中所述收集液进行超滤浓缩，得到原液；
(9)原液配制、除菌分装、冻干、轧盖、干热灭活后得到产品。


2.根据权利要求1所述的人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述冷沉淀为新鲜制备的冷沉淀或解冻后的冻存冷沉淀；冻存冷沉淀解冻时，将冻存冷沉淀置于离心间自然解冻，自然解冻时间不小于5h，离心间的温度为6～10℃。


3.根据权利要求1所述的人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于：步骤(2)中甘氨酸的加入量为130～170g/kg滤液。


4.根据权利要求1所述的人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于：步骤(4)具体步骤为：准确计量步骤(3)中所述蛋白液的重量，在搅拌下缓慢加入配制好的S/D溶液，使吐温-80最终浓度为0.80～1.20％，磷酸三丁酯最终浓度为0.24～0.36％，将制品温度控制在24～26℃，保温6h进行病毒灭活处理，所述蛋白液与S/D溶液的重量比为10:1。


5.根据权利要求1所述的人纤维蛋白原的制备方法，其特征在于：步骤(5)具体步骤为：将步骤(4)中灭活后制品加入到1.2倍重量的稀释液中，并降温至6～9℃；加入0℃以下的50wt％乙醇，乙醇的终浓度为8wt％，反应最终温度控制在...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢长福，胡辉恒，汪模正，邓坤，
申请(专利权)人：同路生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34