一种均相化学发光检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及均相化学发光技术领域的一种均相化学发光检测试剂盒。该试剂盒包括：抗干扰剂，其包括载体和活性分子；所述载体为多孔介质；所述活性分子填充于所述载体之中，并能够与生物素分子特异性结合；受体，其能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；供体，其能够在激发状态下生成活性氧。本发明专利技术所述试剂盒包括一种抗干扰剂，使得本发明专利技术所述试剂盒避免了因游离生物素造成的假阳性或假阴性结果。

A homogeneous chemiluminescence detection kit

【技术实现步骤摘要】
一种均相化学发光检测试剂盒
本专利技术属于化学发光
，具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒。
技术介绍
化学发光分析法根据分离与否分为均相化学发光分析法和非均相化学发光分析法。非均相化学发光分析法需要包埋、洗脱、分离等多步操作，分析过程繁琐，分析时间长，不能满足快速检测和诊断的要求。而均相化学发光分析法则有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了分析效率和性价比，得到日益广泛的应用。生物素－亲和素系统(Biotin-Avidin—System，BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。BAS系统具有高亲和力，灵敏度高，稳定性高等优点的信号放大标记技术。结合二者即可偶联抗原抗体等大分子生物活性物质。它们的结合迅速、专一、稳定，并具有多级放大效应。目前BAS系统主要应用于免疫学，分子生物学等领域。在体外诊断的实际应用中更是具有巨大的优越性，该法最大的缺点是有生物素的干扰，造成检测的误差。生物素干扰可能产生假阳性，也可能产生假阴性。一般来说，夹心法产生假阴性，竞争法产生假阳性。目前常见解决方法：1.更换非使用亲和素-生物素系统的平台；2.停用相关药物/食物后隔日或一周后重测；3.样本预处理：链霉抗生物素蛋白包被的微粒去除样品中的生物素。但是，目前还没有一种方法在亲和素-生物素系统中能够很好地解决生物素干扰的问题。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足提供一种均相化学发光检测试剂盒，该试剂盒能够很好地解决生物素干扰的问题。为此，本专利技术第一方面提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：抗干扰剂，其包括载体和活性分子；所述载体为多孔介质；所述活性分子填充于所述载体之中，并能够与生物素分子特异性结合；受体，其能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；供体，其能够在激发状态下生成活性氧。在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂能够识别游离生物素分子和生物素标记物。在本专利技术的另一些实施方式中，所述抗干扰剂能够选择性吸附游离生物素分子。在本专利技术的一些实施方式中，所述游离生物素分子能够扩散到所述载体中，并与其中的所述活性分子特异性结合。在本专利技术的另一些实施方式中，所述抗干扰剂能够限制比所述活性分子尺寸更大的生物大分子进入其载体之中。在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂能够在液相反应体系中均匀分布。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述载体的内表面积大于其外表面积；优选地，所述载体的内表面积为其外表面积的5倍以上，优选为10倍以上，更优选为20倍以上。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述载体的粒径为15-300nm，优选为30-250nm，更优选为50-200nm。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述载体的比表面积为200m2/g以上，优选为400m2/g以上，更优选为600m2/g以上，最优选为1000m2/g以上。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述载体的最小孔隙率大于40％，优选大于50％，更优选大于60％。在本专利技术的一些实施方式中，所述多孔介质选自多孔金属材料、多孔非金属材料和多孔高分子材料中的一种或多种。在本专利技术的另一些实施方式中，所述载体为介孔微球，优选为有序介孔微球。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述介孔微球的孔径为2-50nm，优选为4-30nm，更优选为5-15nm。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述介孔微球为笼状中空介孔微球。在本专利技术的一些具体实施方式中，所述介孔微球选自Al2O3介孔材料、WO3介孔材料、TiO2介孔材料、ZrO2介孔材料、硅基介孔材料和/或介孔碳材料中的至少一种，优选选自硅基介孔材料。在本专利技术的一些实施方式中，所述活性分子选自亲和素和/或链霉亲和素。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述活性分子通过物理吸附方式填充于所述载体中。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述活性分子通过在含有缓冲液的体系中与载体接触而填充于所述载体之中。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述含有缓冲液的体系的pH值为7至9，优选7.1至8.0，更优选7.2至7.8，进一步优选7.3-7.6。在本专利技术的一些实施方式中，所述活性分子通过直接或间接化学交联的方式填充于所述载体之中。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述载体内表面修饰有化学基团，所述活性分子通过与所述化学基团的共价偶联而填充于所述载体之中；其中，所述化学基团选自羧基、醛基、氨基、巯基和羟基中的一种或多种。在本专利技术的一些实施方式中，所述载体内表面连接有生物素分子，所述活性分子通过与生物素分子的特异结合作用而填充于所述载体之中。在本专利技术的另一些实施方式中，所述抗干扰剂还包括缓冲溶液，优选PBS缓冲溶液。在本专利技术的一些实施方式中，所述载体以及填充在所述载体中的活性分子在抗干扰剂中的总浓度为5-50ug/mL，优选8-30ug/mL，更优选10-20ug/mL。在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法包括：步骤S1，使载体与活性分子进行接触；优选地，所述接触在第一缓冲液体系中进行。在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法还包括步骤S0：用第二缓冲液体系将载体进行清洗，步骤S0在步骤S1之前进行。在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法还包括步骤S2：除去未填充到载体中的活性分子，步骤S2在步骤S1之后进行；优选地，通过向步骤S1处理后的载体中加入第三缓冲液体系，然后进行固液分离，以除去未填充到载体中的活性分子。在本专利技术的一些实施方式中，所述受体的表面直接地或间接地与生物活性物质连接，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合。在本专利技术的另一些实施方式中，所述生物活性物质为抗原和/或抗体；所述抗原是指具有免疫原性的物质；所述抗体是指机体产生的能识别特定外来物的免疫球蛋白。在本专利技术的一些实施方式中，所述受体包含化学发光化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶。在本专利技术的另一些实施方式中，所述受体包含发光组合物和基质，所述发光组合物填充于基质中和/或包被于基质表面。在本专利技术的一些实施方式中，所述发光组合物能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，其包含化学发光化合物和金属螯合物。在本专利技术的另一些实施方式中，所述化学发光化合物选自烯烃化合物，优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9-亚烷基苍耳烷、9-亚烷基-N-9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物，更优选选自二甲基噻吩及其衍生物。在本专利技术的一些实施方式中，所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属，优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌，更优选选自铕。在本专利技术的另一些实施方式中，所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂：NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：/n抗干扰剂，其包括载体和活性分子；所述载体为多孔介质；所述活性分子填充于所述载体之中，并能够与生物素分子特异性结合；/n受体，其能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；/n供体，其能够在激发状态下生成活性氧。/n

【技术特征摘要】
20181031 CN 20181128661111.一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：
抗干扰剂，其包括载体和活性分子；所述载体为多孔介质；所述活性分子填充于所述载体之中，并能够与生物素分子特异性结合；
受体，其能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；
供体，其能够在激发状态下生成活性氧。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂能够识别游离生物素分子和生物素标记物。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂能够选择性吸附游离生物素分子。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述游离生物素分子能够扩散到所述载体中，并与其中的所述活性分子特异性结合。


5.根据权利要求1-4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂能够限制比所述活性分子尺寸更大的生物大分子进入其载体之中。


6.根据权利要求1-5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂能够在液相反应体系中均匀分布。


7.根据权利要求1-6中任意一项所述的抗试剂盒，其特征在于，所述载体的内表面积大于其外表面积；优选地，所述载体的内表面积为其外表面积的5倍以上，优选为10倍以上，更优选为20倍以上；和/或，
所述载体的粒径为15-300nm，优选为30-250nm，更优选为50-200nm；和/或，
所述载体的比表面积为200m2/g以上，优选为400m2/g以上，更优选为600m2/g以上，最优选为1000m2/g以上；和/或，
所述载体的最小孔隙率大于40％，优选大于50％，更优选大于60％。


8.根据权利要求1-7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述多孔介质选自多孔金属材料、多孔非金属材料和多孔高分子材料中的一种或多种。


9.根据权利要求1-8中任意一项所述的抗试剂盒，其特征在于，所述载体为介孔微球，优选为有序介孔微球。


10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述介孔微球的孔径为2-50nm，优选为4-30nm，更优选为5-15nm。


11.根据权利要求9或10所述的试剂盒，其特征在于，所述介孔微球为笼状中空介孔微球。


12.根据权利要求9-11中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述介孔微球选自Al2O3介孔材料、WO3介孔材料、TiO2介孔材料、ZrO2介孔材料、硅基介孔材料和/或介孔碳材料中的至少一种，优选选自硅基介孔材料。


13.根据权利要求1-12中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述活性分子选自亲和素和/或链霉亲和素。


14.根据权利要求1-13中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述活性分子通过物理吸附方式填充于所述载体中。


15.根据权利要求1-14中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述活性分子通过在含有缓冲液的体系中与载体接触而填充于所述载体之中。


16.根据权利要求1-13中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述活性分子通过直接或间接化学交联的方式填充于所述载体之中。


17.根据权利要求1-16中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述载体内表面修饰有化学基团，所述活性分子通过与所述化学基团的共价偶联而填充于所述载体之中；其中，所述化学基团选自羧基、醛基、氨基、巯基和羟基中的一种或多种。


18.根据权利要求1-17中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述载体内表面连接有生物素分子，所述活性分子通过与生物素分子的特异结合作用而填充于所述载体之中。


19.根据权利要求1-18中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂还包括缓冲溶液，优选PBS缓冲溶液。


20.根据权利要求1-19中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂的制备方法包括：步骤S1，使载体与活性分子进行接触；...

【专利技术属性】
技术研发人员：章春奇，金鑫，赵卫国，刘宇卉，李临，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：博阳生物科技上海有限公司，科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31