【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】寡核苷酸制备技术相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月18日提交的美国临时申请号62/560,169的优先权，所述临时申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
寡核苷酸可包含多种修饰。某些修饰，如硫代磷酸酯核苷酸间键联，可能将新的手性中心引入寡核苷酸。
技术实现思路
寡核苷酸可用于许多目的。然而，已经发现天然寡核苷酸具有缺点，如低稳定性、低活性等，这些缺点可能降低或消除其作为治疗剂的有用性。已经开发了可以改善寡核苷酸特性和有用性的某些技术。例如，已经描述了可以改善寡核苷酸特性和有用性的例如对核碱基、糖和/或核苷酸间键联等的某些修饰。此外，已经证明允许控制立体化学和/或制备立体控制的寡核苷酸的技术提供了特别有用和有效的寡核苷酸组合物。例如，在以下项中的一项或多项中描述了某些示例性有用的技术：US20150211006、US20170037399、WO2017/015555、WO2017/015575、WO2017/062862等，其中的每一个通过引用并入本文。特别地，考虑到所证明的立体控制的寡核苷酸组合物的合意性和有用性，本申请人意识到可以改善或促进寡核苷酸组合物、特别是立体控制的寡核苷酸组合物的生产的技术的开发可以提供显著的益处。本披露描述了某些此类开发，并且提供了涉及寡核苷酸组合物、特别是立体控制的寡核苷酸组合物的技术。所提供的技术例如相对于治疗性寡核苷酸可能是特别有用的。除其他事项外，本披露涵盖以下认识：已经在寡核苷酸、特别是立体控制的(例如，立体纯的)寡核苷酸组合物的制备中利...
【技术保护点】
1.一种用于制备包含多种寡核苷酸的组合物的方法，所述方法包括：/na)偶联步骤，其包括：/n使包含多种解封的寡核苷酸(解封的寡核苷酸组合物)或核苷的解封的组合物-其是解封的因为各自独立地包含游离羟基-与包含配偶体化合物的偶联试剂体系接触，所述配偶体化合物包含核苷单元；以及/n使配偶体化合物与所述多种解封的寡核苷酸或核苷的游离羟基偶联；/n其中所述偶联步骤提供了包含多种偶联产物寡核苷酸的偶联产物组合物，所述偶联产物寡核苷酸各自独立地包含将解封的寡核苷酸的羟基与配偶体化合物的核苷单元连接的核苷酸间键联；/nb)修饰前加帽步骤，其包括：/n使偶联产物组合物与修饰前加帽试剂体系接触；以及/n将所述偶联产物组合物的一个或多个官能团加帽；/n其中所述修饰前加帽步骤提供了包含多种修饰前加帽产物寡核苷酸的修饰前加帽产物组合物；/nc)修饰步骤，其包括：/n使偶联产物组合物与包含修饰试剂的修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种偶联产物寡核苷酸的一个或多个核苷酸间键联；或/n使修饰前加帽产物组合物与修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种修饰前加帽产物寡核苷酸的一个或多个键联；/n其中所述修饰步骤提供了包含多种修饰...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170918 US 62/560,1691.一种用于制备包含多种寡核苷酸的组合物的方法，所述方法包括：
a)偶联步骤，其包括：
使包含多种解封的寡核苷酸(解封的寡核苷酸组合物)或核苷的解封的组合物-其是解封的因为各自独立地包含游离羟基-与包含配偶体化合物的偶联试剂体系接触，所述配偶体化合物包含核苷单元；以及
使配偶体化合物与所述多种解封的寡核苷酸或核苷的游离羟基偶联；
其中所述偶联步骤提供了包含多种偶联产物寡核苷酸的偶联产物组合物，所述偶联产物寡核苷酸各自独立地包含将解封的寡核苷酸的羟基与配偶体化合物的核苷单元连接的核苷酸间键联；
b)修饰前加帽步骤，其包括：
使偶联产物组合物与修饰前加帽试剂体系接触；以及
将所述偶联产物组合物的一个或多个官能团加帽；
其中所述修饰前加帽步骤提供了包含多种修饰前加帽产物寡核苷酸的修饰前加帽产物组合物；
c)修饰步骤，其包括：
使偶联产物组合物与包含修饰试剂的修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种偶联产物寡核苷酸的一个或多个核苷酸间键联；或
使修饰前加帽产物组合物与修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种修饰前加帽产物寡核苷酸的一个或多个键联；
其中所述修饰步骤提供了包含多种修饰产物寡核苷酸的修饰产物组合物；
d)修饰后加帽步骤，其包括：
使修饰产物组合物与修饰后加帽试剂体系接触；以及
将所述修饰产物组合物的多种寡核苷酸的一个或多个官能团加帽；
其中所述修饰后加帽步骤提供了包含多种修饰后加帽产物寡核苷酸的修饰后加帽产物组合物；
e)任选地，解封步骤，其包括：
使修饰产物组合物或修饰后加帽产物组合物与解封试剂体系接触；
其中所述解封步骤提供了包含多种解封产物寡核苷酸的解封产物组合物，所述解封产物寡核苷酸各自独立地包含游离羟基；以及
f)任选地，重复步骤b)至e)多次。
2.一种用于制备包含多种寡核苷酸的组合物的方法，所述方法包括一个或多个循环，每个循环独立地包括：
a)偶联步骤，其包括：
使包含多种解封的寡核苷酸(解封的寡核苷酸组合物)或核苷的解封的组合物-其是解封的因为各自独立地包含游离羟基-与包含配偶体化合物的偶联试剂体系接触，所述配偶体化合物包含核苷单元；以及
使配偶体化合物与所述多种解封的寡核苷酸或核苷的游离羟基偶联；
其中所述偶联步骤提供了包含多种偶联产物寡核苷酸的偶联产物组合物，所述偶联产物寡核苷酸各自独立地包含将解封的寡核苷酸的羟基与配偶体化合物的核苷单元连接的核苷酸间键联；
b)修饰前加帽步骤，其包括：
使偶联产物组合物与修饰前加帽试剂体系接触；以及
将所述偶联产物组合物的一个或多个官能团加帽；
其中所述修饰前加帽步骤提供了包含多种修饰前加帽产物寡核苷酸的修饰前加帽产物组合物；
c)修饰步骤，其包括：
使偶联产物组合物与包含修饰试剂的修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种偶联产物寡核苷酸的一个或多个核苷酸间键联；或
使修饰前加帽产物组合物与修饰试剂体系接触，并修饰一种或多种修饰前加帽产物寡核苷酸的一个或多个键联；
其中所述修饰步骤提供了包含多种修饰产物寡核苷酸的修饰产物组合物；
d)修饰后加帽步骤，其包括：
使修饰产物组合物与修饰后加帽试剂体系接触；以及
将所述修饰产物组合物的多种寡核苷酸的一个或多个官能团加帽；
其中所述修饰后加帽步骤提供了包含多种修饰后加帽产物寡核苷酸的修饰后加帽产物组合物；
e)任选地，解封步骤，其包括：
使修饰产物组合物或修饰后加帽产物组合物与解封试剂体系接触；
其中所述解封步骤提供了包含多种解封产物寡核苷酸的解封产物组合物，所述解封产物寡核苷酸各自独立地包含游离羟基。
3.如权利要求2所述的方法，其中在所述修饰前加帽步骤与修饰后加帽步骤之间除了修饰步骤之外没有其他步骤，其中修饰后加帽步骤包括接触修饰产物组合物，所述修饰产物组合物包含多种修饰产物寡核苷酸，所述修饰产物寡核苷酸各自独立地包含键合至非氧原子上的键联磷。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述修饰前加帽试剂体系将多种偶联产物寡核苷酸的多个非羟基基团加帽，并且修饰步骤包括硫化，所述硫化提供了包含多种修饰产物寡核苷酸的修饰产物组合物，所述修饰产物寡核苷酸各自独立地包含P＝S部分。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述方法包括修饰后加帽步骤，所述步骤包括接触包含多种修饰产物寡核苷酸的修饰产物组合物，所述修饰产物寡核苷酸各自独立地包含键联，所述键联包括至少一个手性控制的手性中心，因为在所述修饰产物组合物内包括所述手性中心并且具有相同组成的低聚化合物的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％在所述手性中心具有相同的立体化学构型。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述方法包括修饰后加帽步骤，和包含手性配偶体化合物的偶联试剂体系，所述手性配偶体化合物包含所述低聚化合物的单体单元，其中所述手性配偶体化合物包含不在所述单体单元内的手性原子。
7.如权利要求3所述的方法，其中所述方法包括偶联步骤、修饰步骤、以及在所述偶联步骤与所述修饰步骤之间的一个或多个修饰前加帽步骤，其中对于在所述偶联步骤与所述修饰步骤之间的每个修饰前加帽步骤，与羟基相比，所述修饰前加帽步骤选择性地将氨基加帽。
8.一种用于制备寡核苷酸的方法，所述方法包括：
提供包含手性原子的手性核苷亚磷酰胺，所述手性原子不是磷原子或糖碳原子；以及
在修饰步骤之后但在下一个解封步骤或下一个偶联步骤之前的修饰后加帽步骤。
9.一种用于制备寡核苷酸的方法，所述方法包括一个或多个循环，所述循环各自独立地包括：
紧接在包括硫化或氧化的修饰步骤之前的修饰前加帽步骤，以及紧接在修饰步骤之后的修饰后加帽步骤。
10.一种用于制备寡核苷酸的方法，所述方法包括：
提供包含手性键联磷原子的寡核苷酸中间体，所述手性键联磷原子与不在核苷单元内的手性中心键合；以及
在修饰步骤之后但在下一个解封步骤或下一个偶联步骤之前的修饰后加帽步骤。
11.如权利要求8-10中任一项所述的权利要求，包括偶联步骤。
12.如权利要求11所述的权利要求，包括修饰前加帽步骤。
13.如权利要求12所述的权利要求，包括修饰步骤。
14.如权利要求13所述的权利要求，包括解封步骤。
15.一种用于制备寡核苷酸的方法，所述方法包括一个或多个循环，所述循环各自独立地包括以下步骤：
(1)偶联；
(2)修饰前加帽；
(3)修饰步骤；
(4)修饰后加帽；以及
(5)解封。
16.一种用于寡核苷酸合成的方法，所述方法包括：
在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的一个或多个修饰前加帽步骤，
其中与酯化相比，在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的每个修饰前加帽步骤的加帽条件独立地对于酰胺化是选择性或特异性的。
17.一种用于寡核苷酸合成的方法，所述方法包括：
在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的一个或多个修饰前加帽步骤，
其中在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的每个修饰前加帽步骤独立地不包含强亲核试剂，或者如果其包含一种或多种强亲核试剂，则所述一种或多种强亲核试剂各自的水平相对于所述寡核苷酸的第一结合的核苷独立地不超过约0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、或1当量。
18.一种用于寡核苷酸合成的方法，所述方法包括：
在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的一个或多个修饰前加帽步骤，
其中在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的每个修饰前加帽步骤独立地不包含酯化催化剂，或者如果其包含一种或多种酯化催化剂，则所述一种或多种酯化催化剂各自的水平与适当的参考加帽条件相比独立地降低。
19.一种用于寡核苷酸合成的方法，所述方法包括：
在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的一个或多个修饰前加帽步骤，
其中在偶联步骤之后且在下一个修饰步骤之前的每个修饰前加帽步骤独立地不包含酯化催化剂，或者如果其包含一种或多种酯化催化剂，则所述一种或多种酯化催化剂各自的水平相对于所述寡核苷酸的第一结合的核苷独立地不超过约0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、或1当量。
20.如权利要求16-19中任一项所述的权利要求，包括修饰后加帽步骤。
21.如权利要求20所述的权利要求，包括解封步骤。
22.如权利要求21所述的方法，包括偶联步骤，其中将多种解封的寡核苷酸或核苷负载在载体上。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构。
24.如权利要求23所述的方法，其中对于每个偶联步骤，所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII的结构。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中每个PL不是P，或其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中每个PL独立地是P(＝W)，其中W是O或S，或其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中每个-X-Ls-R5独立地不含有游离氨基，或其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中每个-X-Ls-R5独立地是-L7-R1。
26.如权利要求25所述的方法，其中R5或R6中的至少一个是-C(O)CH3。
27.如权利要求24所述的方法，其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中每个X独立地是-O-或-S-；和/或其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个LP独立地具有式VII或其盐形式，其中Y和Z各自是-O-；和/或其中所述多种解封的寡核苷酸的每种寡核苷酸独立地具有式VIII或其盐的结构，其中每个-X-...
【专利技术属性】
技术研发人员：基思·安德鲁·鲍曼，钱德拉·瓦尔格赛，大卫·查尔斯·唐奈·巴特勒，帕查穆图·坎德萨米，穆罕默德·罗肖恩·阿拉姆，清水护，斯蒂芬妮·米歇尔·斯坦德利，文森特·阿杜达，戈帕尔·雷迪·博米涅尼，斯奈拉塔·特里帕蒂，伊利亚·科尔伯克，
申请(专利权)人：波涛生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。