检测平菇中吲哚乙酸含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，利用预冻的80%冰甲醇提取平菇样品中的吲哚乙酸，利用三氯化铁的无机酸溶液作为显色液，采用分光光度计测定样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量。本发明专利技术利用在‑20℃预冻12h以上的80%冰甲醇（甲醇:水=4:1）作为提取溶剂，能够有效提取平菇中的吲哚乙酸。本发明专利技术利用吲哚乙酸在高氯酸环境中与三价铁离子生成红色络合物的原理，采用分光光度计法测定平菇中吲哚乙酸在530nm处的吸光值，该方法不仅操作简单、成本低，还具有较高的灵敏度和检测精度，还能够同批次检测多个平菇样品中的吲哚乙酸含量，分析速度快，为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术基础。

Determination of indoleacetic acid in Pleurotus ostreatus

【技术实现步骤摘要】
检测平菇中吲哚乙酸含量的方法
本专利技术涉及平菇中吲哚乙酸的检测，尤其是涉及一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法。
技术介绍
生长素（化学本质为吲哚乙酸，即IAA）作为一种重要的植物激素，其影响细胞分裂、伸长和分化，也影响营养器官和生殖器官的生长、成熟和衰老。研究发现，植物体内快速分裂和生长的部位，如茎叶分生组织、幼嫩的叶片等组织、幼嫩的果实和种子等部位中生长素含量都比较高，促进植物及果实的生长发育。平菇（Pleurotusostreatus）学名侧耳，又名北风菌、冻菌、蚝菌、鲍鱼菇等，其味道鲜美、营养丰富、具有很高的食用价值，目前已经在我国很多地区得到了大面积栽培。平菇的生长发育周期包括菌丝生长阶段和子实体生长阶段，平菇发育周期的长短是影响平菇栽培成本高低的重要因素。目前，平菇生长发育相关的研究主要集中在外界环境因子（如光照、温度和氧气等），尚未出现平菇中吲哚乙酸含量的检测方法的报道，使得有关生产素对平菇生长发育影响的报道很少。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，该检测方法简单、灵敏度高、分析速度快且成本低，为吲哚乙酸对平菇生长发育机制的相关研究提供技术参考。为实现上述目的，本专利技术采取下述技术方案：本专利技术所述的检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量，平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V1）÷（W×V2）；其中，A为第四步中参加显色反应的菌丝提取液中吲哚乙酸的浓度，μg/mL；V1为平菇样品提取液的总体积，mL；W为平菇样品的重量，g；V2为第四步中参加显色反应的样品提取液体积，mL。优选地，所述第二步中吲哚乙酸贮备液的浓度为100μg/mL，所述吲哚乙酸标准液的浓度梯度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL。优选地，所述第三步和第四步中的显色液均由浓度为0.5M的FeCl3和35%高氯酸按照1:50的体积比配制而成。优选地，本专利技术所述第一步中的具体离心方法如下：将定容后的平菇浆液于4℃、5000r/min条件下离心10min，弃沉淀，再将上清液再于4℃、5000r/min条件离心10min，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液。优选地，本专利技术所述第一步中80%冰甲醇的预冻温度为-20℃。本专利技术利用在-20℃预冻12h以上的80%冰甲醇（甲醇:水=4:1）作为提取溶剂，在低温条件下有效提取平菇中的吲哚乙酸。本专利技术充分利用吲哚乙酸在高氯酸环境中与三价铁离子生成红色络合物的原理，采用分光光度计法测定平菇中吲哚乙酸在530nm处的吸光值，该方法不仅操作简单、成本低，还具有较高的灵敏度和检测精度。同时专利技术需要的样品量少，能够同批次检测多个平菇样品中的吲哚乙酸含量，分析速度快。本专利技术为研究吲哚乙酸对平菇生长发育机制的影响提供技术基础，同时也为吲哚乙酸对其它食用菌（如香菇、草菇、金针菇等）生长发育机制的研究提供技术参考。附图说明图1是本专利技术吲哚乙酸的标准曲线。具体实施方式本专利技术所用的试剂为现有市售产品；本专利技术所用的平菇菌株P99为现有市售的常规平菇菌株，购于河南省农业科学院；本专利技术所用的风光光度计型号为LabTechBlueStarA。本专利技术所用显色液的配制方法如下：称取1.351gFeCl3·6H2O于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后转移至10mL容量瓶内，定容，得到浓度为0.5M的FeCl3溶液；移取2mLFeCl3溶液和100mL的高氯酸混合后得到显色液，将显色液置于棕色玻璃瓶中避光保存，使用前摇匀。实施例1采用本专利技术的检测方法分别用于检测平菇样品（包括P99菌丝、P99桑葚期子实体、P99珊瑚状菇蕾和P99扇贝状子实体）中的吲哚乙酸含量，具体包括以下内容：第一步，称取1g新鲜样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入4mL预冻的80%冰甲醇（80%冰甲醇于-20℃预冻），研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇冲洗研钵，直至将研钵冲洗干净，并将冲洗液倒入离心管内，最后用80%冰甲醇将平菇浆液定容到10mL，将其置于离心机内于4℃、5000r/min下离心10min，弃沉淀，将上清液于4℃、5000r/min下离心10min，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；第二步，将10mg吲哚乙酸置于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，混匀，得到浓度为100μg/mL的吲哚乙酸贮备液；依次移取不同体积的吲哚乙酸贮备液于八个容量瓶内，分别用蒸馏水稀释，得到浓度依次为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL和25μg/mL的吲哚乙酸标准溶液，备用；第三步，分别移取2mL第二步中的吲哚乙酸标准溶液于反应管内，移取2mL蒸馏水于反应管内作为空白（即CK），向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入4mL的显色液，混匀，于40℃恒温显色反应30min，用分光光度计测定每个吲哚乙酸标准液在530nm处的吸光值，测定时将空白清零，读取吲哚乙酸标准液的吸光值，具体见表1；表1吲哚乙酸标准液的吸光值然后以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线如图1所示，其标准曲线具体为：y=0.0413χ-0.0028（相关性系数R2=0.999），其中y为吸光值，χ为吲哚乙酸的浓度；第四步，分别移取2mL第一步中的样品提取液于反应管内，以2mL蒸馏水为空白样，向样品提取液和空白样中分别加入4mL的显色液，于40℃恒温反应30min，使样品提取液中的吲哚乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：/n第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；/n第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；/n第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；/n第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量：/n平菇样品中吲哚乙酸的含量（μg/g）=（A×V...

【技术特征摘要】
1.一种检测平菇中吲哚乙酸含量的方法，其特征在于：采用分光光度计测定平菇样品中吲哚乙酸的吸光值，通过该吸光值计算得到平菇样品中吲哚乙酸的含量，具体包括以下步骤：
第一步，称取平菇样品于无菌研钵中，向无菌研钵中快速加入3～10mL预冻的80%冰甲醇，研磨，将研磨后的平菇浆液移取至离心管内，用80%冰甲醇将平菇浆液定容，离心分离，弃沉淀，得到含有吲哚乙酸的样品提取液，备用；
第二步，称取吲哚乙酸于烧杯中，用无水乙醇溶解后转移至容量瓶中，然后用蒸馏水定容，混匀，得到吲哚乙酸贮备液；将吲哚乙酸贮备液稀释得到不同浓度的吲哚乙酸标准溶液；
第三步，移取第二步稀释得到的各吲哚乙酸标准溶液于不同的反应管内，以等体积的蒸馏水作为空白，然后向吲哚乙酸标准液和空白中分别加入显色液，混匀，恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定吲哚乙酸标准液的吸光值，以吲哚乙酸的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制吲哚乙酸标准曲线；
第四步，移取第一步中的样品提取液于反应管内，以与样品提取液等体积的蒸馏水为空白，向样品提取液和空白中分别加入显色液，遮光恒温显色反应20～40min后，用分光光度计测定平菇样品的吸光值，根据第三步中绘制的吲哚乙酸标准曲线计算得到样品提取液中吲哚乙酸的浓度，再利用下述公式计算平菇样品中吲哚乙酸的含量：
平菇样品中吲哚乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔维丽，崔筱，刘芹，张玉亭，康源春，袁瑞奇，孔维威，胡素娟，段亚魁，宋志波，韩玉娥，
申请(专利权)人：河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所，河南信念现代农业产业研究院，
类型：发明
国别省市：河南;41