一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测领域，公开了一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合释放垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述结合释放垫包被含胶体金标记的抗人IgG，所述硝酸纤维素膜上设有由羊抗鼠IgG抗体包被的质控线和胰岛素抗原包被的检测线。本发明专利技术还提供了所述试纸条的制备方法。本发明专利技术所述试纸条特异性强，不与其他自身抗体发生交叉反应；灵敏度检测结果显示性质稳定，重现性好。方法简单，操作方便，具有良好的应用前景。

A test strip for the detection of anti insulin autoantibody and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条及其制备方法
本专利技术涉及一种免疫检测领域，特别是涉及一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条及其制备方法。
技术介绍
糖尿病是由遗传和环境因素相互作用而引起的常见病，临床以高血糖为主要标志，常见症状有多饮、多尿、多食以及消瘦等，分为1型和2型糖尿病两种类型。1型糖尿病有一定的家族聚集性。有研究报告双亲有糖尿病史，其子女1型糖尿病发病率为4％～11％；兄弟姐妹间1型糖尿病的家族聚集的发病率为6％～11％；同卵双生子1型糖尿病发生的一致性不到50％。人类白细胞抗原(HLA)基因位于第6对染色体短臂上，为一组密切连锁的基因群，HLA由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3类基因编码。Ⅰ类基因区域包括HLA-A、HLA-B、HLA-C和其他一些功能未明的基因及假基因，其编码的抗原分子存在于全部有核细胞的表面，负责递呈外来抗原给CD8的T淋巴细胞；Ⅱ类基因区域主要包括HLA-DR、HLA-DQ和HLA-DP3个亚区，分别编码DR、DQ和DP抗原，存在于成熟B淋巴细胞及抗原递呈细胞表面，负责递呈抗原给CD4细胞；Ⅲ类基因区域编码包括某些补体成分在内的一些可溶性蛋白，如C2C4A、C4B、肿瘤坏死因子(TNF)和热休克蛋白(HSP)等。HLA通过主要组织相溶性复合体(MHC)限制，参与T淋巴细胞识别抗原和其他免疫细胞的相互作用，以及自身耐受的形成和维持，在识别自身和异己、诱导和调节免疫反应等多个方面均具有重要作用。可见，HLA在许多自身免疫性疾病包括1型糖尿病的发生有相关性。1型糖尿病发生常与某些感染有关或感染后随之发生。常见的感染原有腮腺炎病毒、风疹病毒、巨细胞病毒、麻疹病毒、流感病毒、脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒及Epstein-Barr病毒等。已明确1型糖尿病由免疫介导的胰岛β细胞破坏所致，现已证实在1型糖尿病的发生发展过程中，可检测到多种针对胰岛β细胞的自身抗体(IAA)。在已确诊的1型糖尿病患者中，胰岛素自身抗体IAA的阳性率约为50％。胰岛素自身抗体对糖尿病的诊断、鉴别诊断及治疗具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合释放垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述结合释放垫包被含胶体金标记的抗人IgG，所述硝酸纤维素膜上设有由所述抗人IgG的第二抗体包被的质控线和胰岛素抗原包被的检测线。作为优选，所述抗人IgG为鼠源。更优选的，所述抗人IgG的二抗为羊抗鼠二抗。本专利技术应用抗原抗体反应及免疫层析一步法原理，即血清中抗胰岛素自身抗体(Humaninsulinautoantibodies，简称IAA)与检测试剂中胶体金标记的抗人IgG结合，再与硝酸纤维素膜上固定的胰岛素抗原结合，从而沉积下来形成检测色带，根据试纸中段检测线(Test-line简称T线)及其上方表示试纸有效的质控线(Control-line，简称C线)处有无色带显示，作为胰岛素依赖型糖尿病(1型糖尿病)辅助诊断的快速检测试纸。本专利技术还提供了包含所述试纸条的检测抗胰岛素自身抗体的试剂盒。本专利技术还提供所述试纸条的制备方法，包括以下步骤：(1)制备胶体金溶液；(2)抗人IgG抗体进行胶体金标记；将胶体金与抗人IgG抗体混合，离心，用PBS溶液重悬沉淀，获得抗人IgG-胶体金复合物；(3)制备金标结合释放垫：将抗人IgG-胶体金复合物均匀喷在结合释放垫上；(4)制备硝酸纤维素膜：将所述抗人IgG的二抗和胰岛素抗原分别包被在硝酸纤维素膜上的质控线和检测线上；(5)试纸条的组装：在干燥环境下，将样品垫、结合释放垫、包被好的硝酸纤维素膜和吸收垫粘贴在PVC板上，裁切，获得试纸条。作为优选，所述抗人IgG为鼠源。更优选的，所述抗人IgG的二抗为羊抗鼠二抗。本专利技术的抗胰岛素自身抗体试纸条检测方法简单，操作简便；特异性强，不与其他自身抗体发生交叉反应；灵敏度及批间批内精密度检测，结果显示性质稳定，重现性好，具有良好的应用前景。附图说明：图1本专利技术所述试纸条的结构示意图。1-样品垫2-含胶体金标记的抗人IgG的结合释放垫3-包被胰岛素抗原和羊抗鼠IgG抗体的硝酸纤维素膜4-吸收垫5-PVC底板。具体实施方式：本专利技术公开了一种抗胰岛素自身抗体检测试纸条，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。实施例1：1)中间品溶液配制1、0.2M碳酸钾溶液的配制2、1％柠檬酸钠溶液的配制3、1％氯金酸溶液的配制4、10％牛血清白蛋白溶液的配制5、0.1Mtris-HCLPH8.0-8.5溶液配制方法6、0.1M磷酸盐缓冲液配制方法1、胶体金溶液的制备1.1制备器具：电子控温磁力搅拌电热套移液枪量筒1.2配方：100ml水中加入1％氯金酸溶液1ml,煮沸后加入1.0-1.8ml1％柠檬酸钠溶液。1.3操作步骤：1.3.1量取制备数量体积的实验室三级水；1.3.2把1％氯金酸溶液按一定比例完全溶解于实验室三级水中混匀加热至沸；1.3.3加入1％柠檬酸溶液，搅拌，溶液颜色发生变化，至颜色不再发生变化，停止搅拌加热，自然冷却到室温。2、鼠抗人IgG抗体标记、离心2.1制备器具：移液枪、烧瓶、电子控温磁力搅拌电热套、离心机2.2配方：1毫升胶体金溶液中加入2-6微升0.2M碳酸钾溶液，震荡混匀后加入10-15微升1.0mg/ml的鼠抗人IgG抗体混匀，1ml的标记蛋白的胶体金溶液中加入10％BSA100ul为稳定剂，离心后复溶用之前溶液十分之一体积溶解。2.3操作步骤：2.3.1取检验合格的胶体金溶液。2.3.2搅拌状态下加入计算确定量的0.2M的碳酸钾溶液，然后加入1.0mg/ml的鼠抗人IgG抗体混匀；静止20分钟。2.3.3按计算数量加入10％牛血清白蛋白溶液混匀静止20分钟；2.3.4然后放入离心管内，10000rpm，离心10min，弃上清。2.3.5沉淀用计算的量的tris-HCLPH8.0-8.5复溶液溶解。3、IAA喷金3.1所需器具：三维平面划膜仪试剂瓶移液枪3.2工艺条件：干燥需在35～40℃，相对湿度≤40％的干燥箱内干燥。3.3操作步骤：3.3.1将三维平面划膜仪的喷金吸液管放入标记蛋白的胶体金溶液中。3.3.2取玻纤平铺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合释放垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其特征在于，所述结合释放垫包被含胶体金标记的抗人IgG，所述硝酸纤维素膜上设有由所述抗人IgG的第二抗体包被的质控线和胰岛素抗原包被的检测线。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测抗胰岛素自身抗体的试纸条，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合释放垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其特征在于，所述结合释放垫包被含胶体金标记的抗人IgG，所述硝酸纤维素膜上设有由所述抗人IgG的第二抗体包被的质控线和胰岛素抗原包被的检测线。


2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述抗人IgG为鼠源。


3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述第二抗体为羊抗鼠二抗。


4.一种检测抗胰岛素自身抗体的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-3任一项所述的试纸条。


5.根据权利要求1-3任一项所述试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，
申请(专利权)人：河北博海生物工程开发有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13