肺癌特异性分子靶标02及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种新颖的肺癌特异性分子靶标02及其用途。将特异性分子靶标与受试者自体免疫细胞共培养，回输受试者体内后针对性杀伤肿瘤细胞，可以实现治疗肿瘤的目的。经本发明专利技术的分子靶标活化的DC细胞经分子靶标单抗检测，其负载阳性率大于90％。进一步地，且被活化的DC细胞上高表达CD80、CD86，并呈递至T淋巴细胞，成为特异性的识别肺癌细胞的CTL或MCTL细胞。临床治疗效果表明，MCTL单用、MCTL与化疗药物联用治疗肺癌的PR、CR及客观缓解率均优于单用化疗药物，其差异具有统计学意义。其差异具有统计学意义。其差异具有统计学意义。

【技术实现步骤摘要】
肺癌特异性分子靶标02及其用途


[0001]本专利技术涉及免疫学领域，特别涉及一种新颖肺癌特异性分子靶标及其用途。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤是严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。其早期诊断、及时治疗非常重要。近20年医学诊断技术发展非常迅速，新的诊断方法不断涌现，不仅可以发现小到0.5
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1.0厘米的肿瘤，而且可以对肿瘤的范围做出正确的判断，尽管如此，医生也仅能对中晚期癌症做出临床诊断。
[0003]目前肿瘤的诊断主要依靠查体、影像学、病理学以及相关实验室检测。查体是肿瘤诊断的重要部分，在全面、系统检查基础上，结合病史进行重点器官的局部检查。随着医疗诊断技术的发展和诊断仪器的更新，各种影像学检查对肿瘤的诊断也起着重要作用。包括X线透视、摄片、造影、断层扫描，超声波检查，放射性核素扫描以及选择性血管造影等等，主要可为肿瘤提供确切的定位诊断。实验室检查对肿瘤有重要的辅助诊断的作用，包括酶学检查和免疫学检查。免疫学检查是基于癌细胞的新陈代谢与化学组成都和正常细胞不同，可以出现新的抗原物质，如原发性肝癌病人血清中出现的甲种胎儿球蛋白(AFP)、结肠癌的血清癌胚抗原(CEA)、胃癌的胃液硫糖蛋白(FSA)、胃癌相关抗原(GCAA)、а2糖蛋白(а2GP)等。
[0004]手术治疗、放疗、化疗是肿瘤常规治疗手段，但肿瘤的转移和复发问题很难突破。对于手术而言，局部治疗彻底，但创伤性较大，对微小病灶和转移病灶无效，术后复发或转移率很高。大约70％的肿瘤患者发现肿瘤时失去手术机会；60％以上患者会在术后2
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5年内复发。对于放化疗而言，术后应用放化疗可以减少患者复发率，但由于其毒副反应无法耐受限制了其临床应用；过度的放化疗，损伤并摧毁了患者的免疫系统，加速了肿瘤患者死亡。
[0005]目前，细胞免疫治疗成为新兴肿瘤治疗方案，其是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外分选、诱导、培养和扩增后再回输到病人体内，直接作用于肿瘤细胞或通过激发、增强机体自身免疫功能达到治疗肿瘤的目的。然而，尽管肿瘤细胞免疫治疗已经被公认是继三大传统肿瘤治疗之后的第四种疗法，但其仍存在肿瘤特异性抗原少这一不容忽视的问题。
[0006]DC
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CIK细胞技术中对树突状细胞(DC细胞)进行抗原负载，所使用的抗原绝大部分是肿瘤组织裂解物、肿瘤细胞系或国内外报道的抗原。这些抗原存在的最大的问题就是没有进行特异性的筛选，即没有在正常组织库和肿瘤组织库上进行特异性筛选。另一方面，这些抗原之间存在交叉反应，特异性差，很难使DC细胞在体外高效扩增并成熟，进而很难诱导出特异性的CTL。
[0007]另外，细胞免疫治疗也存在准备周期长这一缺陷。这是因为，前期需要对个体肿瘤细胞中全基因进行测序分析、找到突变位点后，合成相应抗原，再进行DC细胞的培养及回输。该治疗方案具有很高的特异性，但基因测序、由基因翻译合成蛋白需要经历很长时间，从检测开始到培养出合格的DC细胞大约要经过1
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2个月，临床应用中患者等待时间较长。
[0008]随着分子生物学和免疫学的不断深入研究，研究者已经认识到肿瘤的检测与治疗已上升到了抗原表位肽水平，安全有效的多靶点、高特异性、个体化肿瘤靶向治疗技术正在成为肿瘤治疗的主要方向。

技术实现思路

[0009]为了解决现有技术的问题，本专利技术提供了一种肺癌特异性肺癌多肽或寡肽，该多肽或寡肽能够刺激并活化抗原呈递细胞(APC)，使得APC细胞呈递针对肺癌的特异性抗原，进而有机体能够产生特异性靶向肺癌细胞的免疫细胞，实现特异性细胞免疫治疗。
[0010]为了提供肺癌特异性寡肽或多肽，本专利技术的专利技术人进行了坚持不懈地筛选、鉴定和功效验证。具体地，本专利技术的专利技术人进行了如下操作。将肺癌患者的血清进行富集和纯化。然后，对富集和纯化的血清进行质谱检测并筛选、鉴定出针对肺癌的特异性寡肽或多肽。进一步地，本专利技术的专利技术人将肿瘤患者血清水解获得肽段，经超高效液相和质谱获知所述肽段的氨基酸序列；将所述氨基酸序列与肽库进行比对，挑选出与肽库中阴性组织不表达、仅该肺癌组织表达的肽段即为分子靶标，其中所述的阴性组织为非肺癌组织，例如为正常组织及其他种类的肿瘤组织，例如肺癌组织、胃癌组织、结直肠癌组织。
[0011]因此，本专利技术提供了一种多肽，其包含如下的氨基酸序列：LESLAVIL(SEQ ID NO：2)。示例性地，所述多肽由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成。
[0012]优选地，本专利技术的多肽能够与MHC(主要组织相容性复合物)结合并形成复合物多肽
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MHC。示例性地，本专利技术的多肽能够与HLA分子结合并形成复合物多肽
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HLA。进一步地，所述复合物能够被T细胞识别。优选地，所述MHC或者HLA是存在于抗原呈递细胞(APC)上的。
[0013]LESLAVIL(SEQ ID NO：2)具有8个氨基酸残基。因此，应当理解的是，本专利技术的多肽应当允许具有其结合MHCI或MHCII分子的长度，例如8至45、8至40、8至35、8至30、或8至25个氨基酸的长度。例如，所述多肽可以由8至18、8至19、8至20、8至18、8至17、8至16、8至15、8至14、8至13、8至12、8至11、8至10个氨基酸残基组成。理论上，与MHC分子结合的抗原肽可以更长，因为更长的多肽中含有与MHC结合的基序部分，基序之外的其他氨基酸片段位于结合区域的两侧或一侧。
[0014]本专利技术还提供了一种融合蛋白，其包含本专利技术的多肽。由于本专利技术的目的之一在于将本专利技术的多肽在APC上呈递，并进一步刺激或诱导产生CTL。因此，融合蛋白的长度不宜过长，因为过长的融合蛋白仍将被酶切后才能被呈递至APC。因此，示例性地，所述融合蛋白的长度不超过100Aa，例如45
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100，45
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80，45
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60，45
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55Aa等等。
[0015]本专利技术还提供了一种复合物，其包含MHC或HLA，以及本专利技术的多肽或融合蛋白。
[0016]本专利技术还提供了一种刺激和活化APC细胞的方法，其包括将本专利技术的多肽和待活化的APC细胞接触的步骤，进而使得所述APC细胞负载作为分子靶标的多肽。
[0017]本专利技术还提供了一种分离的活化的APC细胞，所述细胞表面呈递本专利技术的多肽或其复合物，多肽
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HLA复合物或多肽
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MHC复合物。示例性地，所述分离的APC是通过将本专利技术中作为分子靶标的多肽和待活化的APC细胞接触并培养而得。
[0018]由于本专利技术的多肽是肿瘤(肺癌)特异性抗原，因此，本专利技术还涉及能特异性结合本专利技术多肽的分子(例如抗体)，以用于检测受试者血液中的肿瘤(肺癌)特异性抗原，用于诊断目的，或用于治疗目的。
[0019]因此，本专利技术还提供了一种检测受试者患有肺癌风险的方法，其中所述方法包括受试者的血液或血清本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽及其活性变体，其中所述多肽含有如下的氨基酸序列：LESLAVIL(SEQ ID NO：2)，优选地，所述多肽或其活性变体的长度为9
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45个氨基酸残基。2.多肽组合，其包含含有如下氨基酸序列的多肽：LESLAVIL(SEQ ID NO：2)，以及选自如下组的肺癌特异性分子靶标中的一个或多个(例如任1种、任2种、任3种、任4种、任5种、任6种、任7种、任8种或任9种)，其中所述的组由如下多肽组成：含有AETTGLIKL(SEQ ID NO：1)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有EVLSIMGVY(SEQ ID NO：3)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有FLLSGLGGL(SEQ ID NO：4)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有GEFLAFQTVHL(SEQ ID NO：5)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有IANITTVW(SEQ ID NO：6)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有LLDAGFAV(SEQ ID NO：7)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有RSSSLPSW(SEQ ID NO：8)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有SLSEVVVPM(SEQ ID NO：9)氨基酸序列或其活性变体的多肽；含有YLCSGSSYFVL(SEQ ID NO：10)氨基酸序列或其活性变体的多肽。3.融合蛋白，其包含权利要求1所述的多肽及其活性变体。4.串联多肽，其包含至少两个SEQ ID NO：2的重复单元，或包含SEQ ID NO：2以及SEQ ID NOs：1、3
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10中任1种、任2种、任3种、任4种、任5种、任6种、任7种、任8种或任9种。5.复合物，其包含MHC或HLA，以及权利要求1多肽、权利要求3的融合蛋白或权利要求4的串联蛋白。6.一种刺激和活化APC细胞的方法，其包括将权利要求1的多肽、权利要求2的多肽组合、权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，
申请(专利权)人：河北博海生物工程开发有限公司，
类型：发明
国别省市：