【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有稳定的功能DNA序列的拷贝数的微生物及相关方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年6月30日提交的美国临时专利申请第62/527,442号和2017年11月10日提交的美国临时专利申请第62/584,270号的优先权。关于联邦政府赞助的研究或开发的声明不适用。联合研究协议不适用。参考序列表与本申请相关的序列表通过引用以其整体并入本文。含有序列表的文本文件通过USPTO电子归档系统(EFS-Web)电子提交。
本专利技术涉及通过微生物的发酵产生化学品的领域。更具体地，本专利技术涉及通过增加期望的化学品(也称为“发酵产物”)的滴度来改善通过发酵产生化学品的方法的经济性。甚至更具体地，可以通过创建、发现和遗传稳定化增加期望的化学品的滴度的染色体DNA序列重复来增加滴度。一旦鉴定，有益的复制可与其他有益的遗传性状结合。可对微生物(比如真细菌、酵母、丝状真菌和古细菌)进行基因工程改造，使其进化以产生有用的化学品，例如有机酸、醇、聚合物、氨基酸、胺、类胡萝卜素、脂肪酸、酯和蛋白质...
【技术保护点】
1.一种具有稳定的功能DNA序列的拷贝数的非天然存在的微生物，所述非天然存在的微生物包括功能DNA序列的n个拷贝和在所述功能DNA序列的所述n个拷贝的至少一个相邻的对之间的至少一个可选择的标记，其中所述非天然存在的微生物是祖先微生物的后代，其中所述祖先微生物包括不多于所述功能DNA序列的n-1个拷贝，并且其中n为至少2。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170630 US 62/527,442;20171110 US 62/584,2701.一种具有稳定的功能DNA序列的拷贝数的非天然存在的微生物，所述非天然存在的微生物包括功能DNA序列的n个拷贝和在所述功能DNA序列的所述n个拷贝的至少一个相邻的对之间的至少一个可选择的标记，其中所述非天然存在的微生物是祖先微生物的后代，其中所述祖先微生物包括不多于所述功能DNA序列的n-1个拷贝，并且其中n为至少2。
2.如权利要求1所述的非天然存在的微生物，其中所述微生物是细菌、酵母、丝状真菌或古细菌。
3.如权利要求1所述的非天然存在的微生物，其中所述微生物选自由下述组成的组中：埃希杆菌属、克雷伯杆菌属、酵母菌属、青霉属、芽孢杆菌属、伊萨酵母属、毕赤酵母属、假丝酵母属、棒状杆菌属、链霉菌属、放线菌属、梭菌属、曲霉属、木霉属、根霉菌属、毛霉菌属、乳酸杆菌属、连接酵母属和克鲁维酵母菌属。
4.如权利要求1所述的非天然存在的微生物，其中所述微生物是大肠埃希杆菌或马克斯克鲁维酵母菌。
5.如权利要求4所述的非天然存在的微生物，其中所述功能DNA序列是在B重复中重复的序列，PDR12基因或PDR12基因的同源物。
6.如权利要求1所述的非天然存在的微生物，其中所述可选择的标记是编码磷酸丙糖异构酶的基因或用于代谢蔗糖的盒。
7.如权利要求1所述的非天然存在的微生物，其中在相似的培养条件下，所述微生物产生的期望的发酵产物的滴度比所述祖先微生物产生的所述期望的发酵产物的所述滴度大至少10％。
8.一种用于创建具有稳定的功能DNA序列的拷贝数的非天然存在的微生物的方法，所述方法包括下述步骤：
(a)提供包括功能DNA序列的n个拷贝的非天然存在的微生物，其中所述非天然存在的微生物是祖先微生物的后代，其中所述祖先微生物包括不多于所述功能DNA序列的n-1个拷贝，其中n为至少2；和
(b)在所述功能DNA序列的所述n个拷贝中的至少一个相邻的对之间，将至少一个可选择的标记插入到所述非天然存在的微生物中，以使所述功能DNA序列的所述拷贝数稳定化。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述微生物是细菌、酵母、丝状真菌或古细菌。
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗杰·R·约卡姆，T·格拉巴，泰龙·赫尔曼，克里斯托弗·约瑟夫·马丁，莱恩·西勒斯，余晓辉，周小美，
申请(专利权)人：PTT全球化学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：泰国;TH
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