一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，步骤如下：(1)将诺丽果烘干打粉，乙醇脱脂脱色后烘干得到诺丽果粉。(2)对诺丽果粉采用间断式脉冲电场‑超声波‑连续式脉冲电场处理方式制备多糖提取液。(3)将提取液纯化、低温浓缩、醇沉分离、冷冻干燥得诺丽多糖。本发明专利技术方法多糖得率高、能耗低，无需添加酸和酶，且所制备的诺丽多糖具有较小的分子量，较高的糖醛酸含量和较好的抗癌抗氧化活性。同时该诺丽多糖与金属锌元素具有较高的螯合能力，对形成的诺丽多糖‑锌螯合物抗癌活性增幅较大。

A method for the preparation of nori polysaccharide with high anticancer and antioxidant activity in cascade physical field

【技术实现步骤摘要】
一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法
本专利技术涉及诺丽多糖，具体涉及一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法。
技术介绍
诺丽果学名海天戟天(MorindacitrifoliaL.)，原产于东南亚，大洋洲和澳大利亚，这种植物主要生长在亚热带和热带地区，在我国主要种植于海南地区。诺丽果被誉为“上帝的礼物”，其果实拥有丰富的多糖、矿物质、维生素、多酚黄酮类等物质，在波利尼西亚等地区作为传统医用药物已经有两千多年的历史。近年来，诺丽果被证实有抗氧化、抗炎症、抗癌症等保健功效，而这些功效与其多糖成分显著相关。多糖的抗氧化和抗癌活性与分子量大小和糖醛酸含量显著相关，一般来说分子量越小，糖醛酸含量越高的多糖其抗癌和抗氧化活性越高。除此之外多糖还能与金属元素螯合形成多糖-金属元素螯合物增强其抗癌作用。例如，公开号为CN104277134A专利技术专利中公开的竹荪多糖-锌螯合物和公开号为CN104031156A专利技术专利中公开的夏枯草多糖-锌螯合物相较于原料多糖都具有更强的抗癌作用。其中，多糖与金属元素的螯合能力对其抗癌能力有显著影响。所以能得到更小分子量，更高糖醛酸含量和更强的金属元素螯合能力多糖对于其在抗癌方面的应用上有重要意义。现有关于低分子量多糖的制备方法主要有高温水解法，酸性水解法和酶解法。采用高温水解法制备低分子量多糖，能耗高耗时长且得率低。采用酸性水解法时会产生酸性废液，对环境有一定的污染。采用酶解法成本昂贵，反应条件要求高，无法大规模生产。所以，市场急需一种能高效、绿色安全制备低分子量多糖的方法。此外，目前也没有关于梯级物理场制备低分子量多糖的相关研究被报道。目前关于诺丽多糖的提取主要还是采用传统水热提取法，该方法能耗高、时间长且诺丽多糖得率低、纯度低、活性差。所以本领域急需一种高效且能最大限度保护诺丽多糖活性的提取技术。
技术实现思路
为了克服现有技术上的不足及缺陷，本专利技术的目的在于提供一种利用多物理场协同制备诺丽多糖的方法，实现了低能耗，高效率、高得率且所制备产品分子量小，抗癌活性强，为诺丽多糖的提取及应用提供了指导。该技术专利技术原理：本专利技术先用间断式脉冲电场处理原料随后马上转入超声场中进行处理，待超声处理后提取液转入连续式脉冲电场中进行处理。诺丽果粉在高压脉冲电场低频放电下，细胞壁和细胞膜被击穿形成孔洞裂缝，更利于超声波的空化作用在细胞内和细胞表面发挥，实现了多糖的高效提取。提取后的大分子多糖在连续高频脉冲电场作用下，分解为小分子多糖。本专利技术的目的通过以下步骤实现：一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，包括如下步骤：1)诺丽果原料处理：将诺丽果烘干，打粉，过筛，加入乙醇溶液，回流处理脱脂脱色后烘干，得诺丽果粉；2)梯级物理场制备诺丽多糖：诺丽果粉加入蒸馏水，室温下放入间断式脉冲电场提取设备中处理30-40次，脉冲频率为1-5Hz，处理场强为3-6kV/cm；随后转入超声设备进行处理，超声功率为300-600W，频率为20-40kHz，温度维持在50-60℃，超声时间为20-30min；随后将提取液转入连续式脉冲电场处理，处理场强10-25kV/cm，频率为500-1300Hz，脉宽为60-80us，处理时间为40-50min；3)诺丽多糖纯化：处理完后，将提取液离心分离，得多糖粗提液，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀，重复离心分离，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀4-6次直至完全去除蛋白质无沉淀析出，醇沉，离心分离，沉淀冻干，得到诺丽多糖。为进一步实现本专利技术目的，优选地，步骤1)中，所述的诺丽果烘干是将将诺丽果在45-50℃烘干处理48-60h。优选地，步骤1)中，所述的过筛为过80-100目筛。优选地，步骤1)中，所述的乙醇溶液为按体积百分比计75％-85％的乙醇水溶液。优选地，步骤1)中，所述的回流处理是指70-80℃回流处理4h。优选地，步骤1)中，所述的诺丽果为白熟阶段的成熟诺丽果实。优选地，步骤2)中，所述的诺丽果粉加入蒸馏水的料液比为1:25-1:35，所述的料液比的诺丽果粉质量与蒸馏水的单位分别为克和毫升。优选地，步骤3)中，所述的离心分离的转速为4800-5000rpm，离心分离的时间为15-20min。优选地，步骤3)中，所述的Sevage试剂的配制方法为将氯仿、正丁醇体积比为3.5：1-4.5：1混合，所述的多糖粗提液与Sevage试剂的体积比为1：1-1：5，涡旋振荡的时间为10-20min。优选地，步骤3)中，所述的醇沉是往粗提液中加入3.5-4.5倍体积无水乙醇在1-4℃下醇沉12-20h。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果。1)本专利技术利用梯级物理场提取诺丽多糖，该方法相较于传统水提法，能耗低，提取时间短，且多糖得率、糖醛酸含量和总糖含量相较于传统水热法提取的诺丽多糖都显著增加，分别增加98％，20％，150％以上。2)本专利技术利用梯级物理场技术能够快速高效制备小分子诺丽多糖，相较于传统水热法提取的诺丽多糖，分子量减小40％以上。并且在提取制备过程中不需要添加酸和酶，不需要长时间加热，是一种绿色节能低成本的制备工艺。3)本专利技术利用梯级物理场提取的诺丽多糖相较于传统水热法提取的诺丽多糖抗氧化性能和抗癌能力都显著提升。4)本专利技术利用梯级物理场提取出来的诺丽多糖相较于传统水热法提取的诺丽多糖对金属元素锌的螯合能力更强，螯合后形成的诺丽多糖-锌螯合物的抗癌活性也更好，且增幅更大。附图说明图1是本专利技术一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法的工艺流程图。图2实施例1中水提法和梯级物理场法所得诺丽多糖HPGPC检测分子量的结果。图3实施例2中水提法和梯级物理场法所得诺丽多糖HPGPC检测分子量的结果。图4实施例3中水提法和梯级物理场法所得诺丽多糖HPGPC检测分子量的结果。具体实施方式为更好地理解本专利技术，下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的实施方式不限如此。实施例中，间断式脉冲电场设备为广州市心安食品科技有限公司的PEF-EX-500型脉冲电场提取仪。所用连续式脉冲电场设备为广州市心安食品科技有限公司的SY-Z-500型脉冲电场灭菌设备。实施例1如图1所示，一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，包括如下步骤：诺丽果原料处理：将诺丽果(诺丽果为白熟阶段的成熟诺丽果实)50℃烘干、打粉、过筛(过80目筛)，按体积加入4倍体积百分比80％乙醇溶液回流处理4h脱脂脱色后烘干即得诺丽果粉。梯级物理场辅助提取诺丽多糖：取35g诺丽果粉按料液比1:35(料液比的诺丽果粉质量与蒸馏水的单位分别为克和毫升)加入蒸馏水放入间断式脉冲电场提取设备中处理30次，脉冲频率为1Hz，处理场强为3kV/cm，随后采用超声设备超声处理20min，超声功本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，其特征在于包括如下步骤：/n1)诺丽果原料处理：将诺丽果烘干，打粉，过筛，加入乙醇溶液，回流处理脱脂脱色后烘干，得诺丽果粉；/n2)梯级物理场制备诺丽多糖：诺丽果粉加入蒸馏水，室温下放入间断式脉冲电场提取设备中处理30-40次，脉冲频率为1-5Hz，处理场强为3-6kV/cm；随后转入超声设备进行处理，超声功率为300-600W，频率为20-40kHz，温度维持在50-60℃，超声时间为20-30min；随后将提取液转入连续式脉冲电场处理，处理场强10-25kV/cm，频率为500-1300Hz，脉宽为60-80us，处理时间为40-50min；/n3)诺丽多糖纯化：处理完后，将提取液离心分离，得多糖粗提液，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀，重复离心分离，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀4-6次直至完全去除蛋白质无沉淀析出，醇沉，离心分离，沉淀冻干，得到诺丽多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)诺丽果原料处理：将诺丽果烘干，打粉，过筛，加入乙醇溶液，回流处理脱脂脱色后烘干，得诺丽果粉；
2)梯级物理场制备诺丽多糖：诺丽果粉加入蒸馏水，室温下放入间断式脉冲电场提取设备中处理30-40次，脉冲频率为1-5Hz，处理场强为3-6kV/cm；随后转入超声设备进行处理，超声功率为300-600W，频率为20-40kHz，温度维持在50-60℃，超声时间为20-30min；随后将提取液转入连续式脉冲电场处理，处理场强10-25kV/cm，频率为500-1300Hz，脉宽为60-80us，处理时间为40-50min；
3)诺丽多糖纯化：处理完后，将提取液离心分离，得多糖粗提液，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀，重复离心分离，加入Sevage试剂，涡旋振荡，去除沉淀4-6次直至完全去除蛋白质无沉淀析出，醇沉，离心分离，沉淀冻干，得到诺丽多糖。


2.根据权利要求1所述的梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的诺丽果烘干是将将诺丽果在45-50℃烘干处理48-60h。


3.根据权利要求1所述的梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的过筛为过80-100目筛。


4.根据权利要求1所述的梯级物理场制备高抗癌抗氧化活性诺丽多糖的方法，其特征在于，步骤1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾新安，李坚，蔡锦林，郑志超，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44