基于液基细胞制片的单细胞制片方法技术

本发明专利技术公开了基于液基细胞制片的单细胞制片方法，包括以下步骤：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理。本发明专利技术通过设置液基样本处理、加入细胞保存处理液、沉淀、巴氏染色和离心制片的工艺流程，解决了目前的单细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题，该基于液基细胞制片的单细胞制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点。

Single cell production method based on liquid based cell production

【技术实现步骤摘要】
基于液基细胞制片的单细胞制片方法
本专利技术涉及细胞学检测
，具体为基于液基细胞制片的单细胞制片方法。
技术介绍
基细胞学检查，是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断。与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比，液基细胞学检查明显提高了样本的满意度及宫颈异常细胞检出率，液基细胞学检查是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术。单细胞制片方法是常用的一种制片方法，但是目前的单细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察。为此提出一种保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的制片方法来解决此问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供基于液基细胞制片的单细胞制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点，解决了目前的单细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：基于液基细胞制片的单细胞制片方法，包括以下步骤：步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。优选的，所述在步骤1中，预处理包括液基样本整理、摆放、扫码。优选的，所述在步骤1中，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系。优选的，所述在步骤1中，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min。优选的，所述在步骤2中，细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、N-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。优选的，所述在步骤2中，液基标本与细胞保存处理液加入的体积比为一比三。优选的，所述在步骤3中，静置时间为3小时。优选的，所述在步骤4中，置入无水乙醇或异丙醇10-12秒，置入PH7.8tris缓冲液5-8秒，置入苏木素染液3-6分钟，置入PH7.8tris缓冲液0.8-1.2分钟，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置入EA-OG混合染液2-4分钟，置入无水乙醇或异丙醇9-12秒，重复2遍，置于二甲苯8-12秒，重复2遍。优选的，所述在步骤5中，离心机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min。优选的，所述在步骤5中，封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过设置液基样本处理、加入细胞保存处理液、沉淀、巴氏染色和离心制片的工艺流程，解决了目前的单细胞制片方法制片质量差，容易丢失有效诊断细胞，涂片厚薄不一，易漏诊，而且样本中常常残有很多的白细胞和红细胞，影响观察的问题，该基于液基细胞制片的单细胞制片方法，具备保存细胞稳定性高、细胞固定良好和保留细胞形态更完整，也能清除多余细胞的优点。具体实施方式下面将通过实施例的方式对本专利技术作更详细的描述，这些实施例仅是举例说明性的而没有任何对本专利技术范围的限制。本专利技术提供一种技术方案：基于液基细胞制片的单细胞制片方法，包括以下步骤：步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。实施例一：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。实施例二：在实施例一中，再加上下述工序：在步骤1中，预处理包括液基样本整理、摆放、扫码，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min，去除红细胞并为后续的操作做好准备。液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。实施例三：在实施例二中，再加上下述工序：在步骤2中，细胞保存处理液由如下重量份本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；/n步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；/n步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；/n步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；/n步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。/n

【技术特征摘要】
1.基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；
步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；
步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；
步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；
步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。


2.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，预处理包括液基样本整理、摆放、扫码。


3.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系。


4.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，冲洗红细胞去除采用的冲洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：阎灼辉，
申请(专利权)人：苏州浚惠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31