本发明专利技术公开了一种抗人IL‑6Ra单克隆抗体及其应用，抗人IL‑6Ra单克隆抗体，其包含：可变重链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；可变轻链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。本发明专利技术所获得的单抗不仅提示靶向IL‑6/IL‑6R轴可作为干预炎性疾病的有效靶点，为探索全身炎症反应综合症治疗提供了重要基础，同时对该抗体进行改构和表达多种小分子基因工程抗体，如单链抗体、嵌合抗体、Fab抗体等，可达到用于治疗、诊断或预防全身炎症反应综合征(SIRS)、肝癌和/胶质瘤药物的应用。
【技术实现步骤摘要】
一种抗人IL-6Ra单克隆抗体及其应用
本专利技术属于基因药物领域，涉及一种抗人IL-6Ra单克隆抗体及其应用。
技术介绍
全身炎症反应综合症(Systemicinflammatoryresponsesyndrome，SIRS)是因感染或非感染病因作用于机体而引起的机体失控的自我持续放大和自我破坏的全身性炎症反应。当机体受到外源性损伤或感染毒性物质的打击时，可促发初期炎症反应，同时机体产生的内源性免疫炎性因子而形成“瀑布效应”。危重病人因机体代偿性抗炎反应能力降低以及代谢功能紊乱，最易引发SIRS，即症介质溢出到血浆并在远隔部位引起全身性炎症，严重者可导致多器官功能障碍综合征(MODS)，是一个影响到整个身体的炎症反应，也是细胞因子风暴的一种。如何能发现理想、高效、特异，不但能迅速抑制全身的炎症反应(身体对多种细胞因子\炎症介质)，而且能有效的针对其致病机制，选择性地阻断其病理过程的全新型药物，成为全身炎症反应综合症治疗研究中亟待解决的关键问题。白介素6受体(IL-6R)是一种I型跨膜蛋白，在1988年被克隆和描述(Yamasakietal。1988)是造血细胞因子受体超家族成员，其基因位于人染色体1q21.3，在单核细胞、巨噬细胞等淋巴细胞均有表达，充当多功能细胞因子IL-6的受体。研究显示，IL-6R除了在多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、卡波西肉瘤、肝癌细胞异常高表达外,而且还在某些白血病细胞中高表达。该通路的受阻可导致急、慢性炎症，自身免疫性疾病或肿瘤的发展。靶向IL-6/IL-6R轴可作为干预许多炎性或肿瘤疾病的有效靶点。2017年，美国食品药品监督管理局FDA宣布靶向人白细胞介素6受体(IL-6R)的托珠单克隆抗体(mAb)用于治疗嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法引起的细胞因子释放综合症(CRS)，这是继该单抗成功用于类风湿关节炎(RA)、幼年特发性关节炎(JIA)等自身免疫性疾病后的又一重要适应症，针对该通路的IL-6/IL-6R及其靶向抑制剂通过对该信号的阻断控制或降低全身炎症反应，由此也启迪我们开展靶向IL-6/IL-6R系统用于治疗炎症性疾病或肿瘤的新策略探索。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种抗人IL-6Ra的单克隆抗体。该抗体的重链和轻链可变区基因是从能够分泌较高活性的鼠源性杂交瘤细胞株IL-6Ra-C5中克隆和制备(保藏编号：CCTCCNO：C2019126)。一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其包含：可变重链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：1、SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；可变轻链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6。一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其包含：重链可变区基因，重链可变区基因具有SEQIDNO：7所示的基因序列；轻链可变区基因，轻链可变区基因具有SEQIDNO：8所示的基因序列。一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其包含：由SEQIDNO：9编码的可变重链和SEQIDNO：10编码的可变轻链。可选的，所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：1、SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6。一种多肽产物，所述的多肽产物由所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体编码得到。可选的，该重链可变区基因编码的多肽产物，具有SEQIDNO：9的序列；该轻链可变区基因编码的多肽产物，具有SEQIDNO：10的序列。一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCC2019126。一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述的杂交瘤产生。所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体，其中所述单克隆抗体是鼠抗体、人抗体或人源化抗体；或者所述单克隆抗体是嵌合抗体、小分子抗体、多价微型抗体、双特异性抗体、重组抗体融合蛋白、重组免疫毒素或噬菌体抗体。所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体在制备用于治疗、诊断或预防全身炎症反应综合征(SIRS)、肝癌和/胶质瘤药物的应用。一种组合物，所述组合物包含所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体。可选的，所述的组合物为抗体-核素偶联物、抗体-化疗药物偶联物、抗体-毒素偶联物、抗体-生物反应调节剂(BRM)偶联物、抗体导向酶解前药或免疫脂质体。抗人IL-6Ra单克隆抗体，其包含：a)SEQIDNO：4的氨基酸序列所示的轻链可变区的CDR1；b)SEQIDNO：5的氨基酸序列所示的轻链可变区的CDR2；c)SEQIDNO：6的氨基酸序列所示的轻链可变区的CDR3；d)SEQIDNO：1的氨基酸序列所示的重链可变区的CDR1；e)SEQIDNO：2的氨基酸序列所示的重链可变区的CDR2；和f)SEQIDNO：3的氨基酸序列所示的重链可变区的CDR3。试剂盒，其包含所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体。一种试剂盒，所述试剂盒包含：a)所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体，和b)包含与信号产生化合物连接的抗体的缀合物，其中所述缀合物中的抗体与所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体不同。一种试剂盒，所述试剂盒包含：a)所述的抗人IL-6Ra单克隆抗体，和b)包含与信号产生化合物连接的抗原的缀合物。本专利技术的另一目的在于所述抗体在制备用于诊断和治疗IL-6Ra相关的炎症性疾病药物中的应用，如在抑制炎性细胞因子释放中的开发和应用。本研究采用人源化IL-6Ra定点敲入转基因小鼠制备全身炎症反应综合征SIRS模型，用抗人IL-6Ra的单克隆抗体IL6RA-C5Ab进行评估，结果显示该抗体可显著缓解LPS诱导的IL-6Ra转基因小鼠SIRS症状，抗体的处理可显着降低LPS注射小鼠血清中TNF-α、IL-1β、INF-γ及IL-6这四种促炎细胞因子的表达水平。本专利技术人应用一套设计的引物成功地从培养的抗肿瘤特异性单抗IL6RA-C5Ab杂交瘤细胞中克隆了抗体轻、重链可变区基因。序列分析表明,抗体重链可变区基因VH的胚系基因来源为MusmusIGHV3-2*02F；而抗体轻链可变区基因VL的胚系基因来源为MusmusIGKV6-15*01F，它们的V(D)J的连接氨基酸分别为CVRSGRYDKTYW和CHQYNRYPITF。所得VH与VL基因可编码正确的小鼠抗体可变区。基于上述已克隆到的抗人肝癌单抗IL6RA-C5Ab轻、重链可变区基因，可以采用基因工程方法，构建和表达多种小分子基因工程抗体，如单链抗体、嵌合抗体、Fab抗体等，以便用于炎症性疾病的诊断和治疗。附图说明附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：图1杂交瘤细胞融合株上清的ELIS本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其特征在于，其包含：/n可变重链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；/n可变轻链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。/n
【技术特征摘要】
1.一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其特征在于，其包含：
可变重链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：1、SEQIDNO：2和SEQIDNO：3；
可变轻链，其中所述可变重链的3个互补决定区(CDR)是SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6。
2.一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其特征在于，其包含：
重链可变区基因，重链可变区基因具有SEQIDNO：7所示的基因序列；
轻链可变区基因，轻链可变区基因具有SEQIDNO：8所示的基因序列。
3.一种抗人IL-6Ra单克隆抗体，其特征在于，其包含：由SEQIDNO：9编码的可变重链和SEQIDNO：10编码的可变轻链。
4.一种多肽产物，其特征在于，该重链可变区基因编码的多肽产物，具有SEQIDNO：9的序列；该轻链可变区基因编码的多肽产物，具有SEQIDNO：10的序列。
5.一种表达权利要求1-3任一所述抗人IL-6Ra单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，所述杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCC2019126。
6.权...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈志南，边惠洁，杨向民，朱平，张雪芹，王彬，张征，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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