【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】柄蛋白-4结合蛋白及其使用方法1.
本文提供了涉及特异性结合人柄蛋白-4(Nectin-4)并检测柄蛋白-4表达水平的抗体的组合物、方法和用途。2.相关申请的交叉引用本申请要求2017年6月5日提交的美国临时申请号62/515,454的优先权和权益，通过引用将该申请的全部内容纳入本文。3.对提交的序列表的引用该申请通过引用纳入与本申请一同提交，名为14369-208-228_SEQ_LISTING.txt，创建于2018年5月31日，大小为37,280字节，ASCII文本格式的计算机可读形式(CRF)序列表。4.背景柄蛋白-4也称之为脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白4(PVRL4)，其是属于细胞粘附分子柄蛋白家族的大小约为52kDa的单次通过I型跨膜蛋白。柄蛋白经由同嗜性(homophilic)相互作用和异嗜性(heterophilic)相互作用在粘附连接处介导Ca2+非依赖性细胞间粘附，所述同嗜性相互作用中柄蛋白-4与另一柄蛋白-4相互作用，所述异嗜性相互作用中柄蛋白-4与另一柄蛋白家族蛋白如柄蛋白-1、柄蛋白-2或柄蛋白-3相互作用。(MiyoshiJ等,2007,AmJNephrol27:590–604；Takai等,2003,CancerSci94:655–667；ReymondN.等,2001,JournalofBiologicalChemistry,276:43205-15)。柄蛋白-4的胞外域具有称之为V、C1和C2的3个Ig样亚结构域。已经证明柄蛋白-2中的C1结构域负责同嗜性相...
【技术保护点】
1.一种抗体或其抗原结合片段，其/n(a)结合轻链可变区(VL)具有氨基酸序列SEQ ID NO:3且重链可变区(VH)具有氨基酸序列SEQ ID NO:4的抗体识别的人柄蛋白-4的表位；/n或/n(b)与VL具有氨基酸序列SEQ ID NO:3且VH具有氨基酸序列SEQ ID NO:4的抗体竞争结合人柄蛋白-4。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170605 US 62/515,4541.一种抗体或其抗原结合片段，其
(a)结合轻链可变区(VL)具有氨基酸序列SEQIDNO:3且重链可变区(VH)具有氨基酸序列SEQIDNO:4的抗体识别的人柄蛋白-4的表位；
或
(b)与VL具有氨基酸序列SEQIDNO:3且VH具有氨基酸序列SEQIDNO:4的抗体竞争结合人柄蛋白-4。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其结合柄蛋白-4，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包含表1所示的VL互补决定区1(CDR1)、VLCDR2和VLCDR3；和/或
(b)重链可变区(VH)，其包含表1所示的VH互补决定区1(CDR1)、VHCDR2和VHCDR3。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其还包含表2所示的VL框架1(FR1)、VLFR2、VLFR3和VLFR4；和/或
(b)重链可变区(VH)，其还包含表2所示的VH框架1(FR1)、VHFR2、VHFR3和VHFR4。
4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包含：
(1)具有选自SEQIDNO:7和8的氨基酸序列的VLCDR1；
(2)具有选自SEQIDNO:9、10和11的氨基酸序列的VLCDR2；和
(3)具有选自SEQIDNO:12和13的氨基酸序列的VLCDR3；和
(b)轻链可变区(VH)，其包含：
(1)具有选自SEQIDNO:14、15、16和17的氨基酸序列的VHCDR1；
(2)具有选自SEQIDNO:18、19、20和21的氨基酸序列的VHCDR2；和
(3)具有选自SEQIDNO:22、23和24的氨基酸序列的VHCDR3。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含氨基酸序列SEQIDNO:7、10和12，而所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含氨基酸序列SEQIDNO:15、19和23，其中所述VL和VHCDR序列根据KabatCDR定义确定。
6.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有含氨基酸序列SEQIDNO:3的VL。
7.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有含氨基酸序列SEQIDNO:4的VH。
8.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有：
(a)含氨基酸序列SEQIDNO:3的VL；和
(b)含氨基酸序列SEQIDNO:4的VH。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含小鼠IgG2Fc、人IgG1Fc区或其突变体。
10.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有含氨基酸序列SEQIDNO:35的重链Fc区。
11.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还具有含氨基酸序列SEQIDNO:33的轻链恒定区。
12.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有：
(a)含氨基酸序列SEQIDNO:33的轻链恒定区；和
(b)含氨基酸序列SEQIDNO:35的重链Fc区。
13.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有含氨基酸序列SEQIDNO:5的轻链。
14.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有含氨基酸序列SEQIDNO:6的重链重链含有。
15.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具有：
(a)含氨基酸序列SEQIDNO:5的轻链；和
(b)含氨基酸序列SEQIDNO:6的重链。
16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，当与柄蛋白-4结合时，所述抗体或其抗原结合片段结合氨基酸序列SEQIDNO:1内残基31-346中的至少一个，氨基酸序列SEQIDNO:1内残基1-150中的至少一个，或氨基酸序列SEQIDNO:1内残基31-150中的至少一个。
17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合表达柄蛋白-4的细胞。
18.如权利要求17所述的抗体或其抗原结合片段，其中，结合阴性对照的所述抗体或其抗原结合片段的相对量是结合阳性对照的所述抗体或其抗原结合片段的量的约10％、5％、1％、0.5％或更少。
19.如权利要求18所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述阴性或阳性对照中的柄蛋白-4表达独立地通过qPCR试验、使用二抗的免疫组织化学试验、使用二抗的免疫印迹试验、使用二抗的荧光激活的细胞分选(FACS)试验或使用二抗的酶联免疫吸附试验(ELISA)确定。
20.如权利要求18所述的抗体或其抗原结合片段，其中，结合细胞的所述抗体或其抗原结合片段的量通过免疫组织化学试验、免疫印迹试验、荧光激活的细胞分选(FACS)试验或酶联免疫吸附试验(ELISA)确定。
21.如权利要求17-20中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述细胞包含来自组织的癌细胞。
22.如权利要求21所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段结合所述癌细胞的水平高于结合参照细胞。
23.如权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述参照细胞包含来自同一组织的非癌细胞。
24.如权利要求17-23中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述组织包含来自膀胱，输尿管，乳房，肺，结肠，直肠，卵巢，输卵管，食道，子宫颈，子宫内膜，皮肤，喉，骨髓，唾液腺，肾脏，前列腺，脑，脊髓，胎盘，肾上腺，胰腺，甲状旁腺，垂体，睾丸，甲状腺，脾脏，扁桃体，胸腺，心脏，胃，小肠，肝脏，骨骼肌，周围神经，间皮或眼睛的组织。
25.如权利要求17-24中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段的结合特异性在免疫组织化学试验中确定。
26.如权利要求1-25中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段并不特异性地结合柄蛋白-4阴性对照。
27.如权利要求1-26中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述抗体是单克隆抗体。
28.如权利要求1-27中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述抗体是人源化、人或嵌合抗体。
29.如权利要求28所述的抗体或抗原结合片段，其中，所述人源化抗体是去免疫化抗体或复合人抗体。
30.如权利要求1-29中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、双抗体、三抗体、四抗体或由抗体片段形成的多特异性抗体。
31.如权利要求1-30中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中，位于第一残基的谷氨酰胺被焦谷氨酸取代。
32.一种含有核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列编码权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的VH、VL或VH和VL两者。
33.一种含有核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列编码权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的重链、轻链或重链和轻链两者。
34.如权利要求32或33所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸操作性地连接启动子。
35.一种包含权利要求32或33所述的多核苷酸的载体。
36.一种包含权利要求32-34中任一项所述的多核苷酸的细胞。
37.一种包含权利要求35所述的载体的细胞。
38.一种产生权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的分离细胞。
39.一种制备特异性结合人柄蛋白-4表位的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括培养权利要求36-38中任一项所述的细胞以表达所述抗体或其抗原结合片段。
40.一种制备特异性结合人柄蛋白-4表位的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括表达权利要求32-34中任一项所述的多核苷酸。
41.一种包含权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的试剂盒。
42.一种用于预测癌症患者对包含权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的抗癌治疗的响应性的试剂盒，其中，如果来自所述患者的癌细胞对柄蛋白-4表达呈阳性，预测所述癌症患者对所述抗癌治疗具有响应性。
43.一种用于预测癌症患者对包含权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的抗癌治疗的响应性的试剂盒，用于确定来自所述癌症患者的组织样品中柄蛋白-4的表达，其中，如果所述组织样品中的柄蛋白-4的表达水平高于柄蛋白-4的参照表达水平，预测所述癌症患者对所述抗癌治疗具有响应性。
44.如权利要求41-43中任一项所述的试剂盒，其还包括信号扩增系统。
45.如权利要求41-44中任一项所述的试剂盒，其还包括参照样品集合。
46.如权利要求41-45中任一项所述的试剂盒，其还包括对照抗体。
47.一种用于评估来自疑似患有癌症的患者的组织样品中柄蛋白-4表达的方法，其包括：
(a)将所述组织样品与权利要求1-31中任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触；
(b)检测所述抗体或其抗原结合片段与所述组织样品的结合；
(c)确定所述组织样品中柄蛋白-4的表达，其中，所述组织样品中的柄蛋白-4的表达水平与柄蛋白-4的参照表达水平进行比较。
48.如权利要求47所述的方法，其中，所述癌症是选自下组的癌症：子宫内膜癌，尿路上皮癌，膀胱癌，输尿管癌，尿道癌，肺癌，卵巢癌，乳腺癌，食道癌，胰腺癌，头颈癌，前列腺癌，阴茎癌，肛门癌，外阴癌，脐尿管癌症和表达柄蛋白-4的其他上皮源性癌症。
49.如权利要求47或48所述的方法，其中，所述柄蛋白-4的参照表达水平是所述对象的非癌性细胞或来自第二对象的非癌性细胞中的柄蛋白-4表达水平。
50.如权利要求47-49所述的方法，其中，所述柄蛋白-4的参照表达水平是阴性对照中的柄蛋白-4表达水平，其中，所述阴性对照中的柄蛋白-4表达独立地通过qPCR试验、使用二抗的免疫组织化学试验、使用二抗的免疫印迹试验、使用二抗的荧光激活的细胞分选(FACS)试验或使用二抗的酶联免疫吸附试验(ELISA)确定。
51.如权利要求50所述的方法，其中，结合阴性对照的所述抗体或其抗原结合片段的相对量是结合表达柄蛋白-4的样品细胞的所述抗体或其抗原结合片段的量的约10％、5％、1％或更少。
52.如权利要求47-49所述的方法，其中，所述柄蛋白-4的参照表达水平是阳性对照中的柄蛋白-4表达水平，其中，所述阳性对照中的柄蛋白-4表达独立地通过qPCR试验、使用二抗的免疫组织化学试验、使用二抗的免疫印迹试验、使用二抗的荧光激活的细胞分选(FACS)试验或使用二抗的酶联免疫吸附试验(ELISA)确定。
53.如权利要求47-52中任一项所述的方法，其中，所述组...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·J·M·莫里森，F·多纳特，P·杨，
申请(专利权)人：艾更斯司股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。