广东紫珠提取物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及广东紫珠提取物，其公开了广东紫珠总提物及广东紫珠总提取物通过大孔树脂柱富集的苯乙醇苷类化合物具有抗心肌缺血功效，该部位总能够通过降低血清中LDH，CK，MDA的含量，增加心肌组织中GSH含量，增加心肌组织中Na

Guangdong purple pearl extract and its application

【技术实现步骤摘要】
广东紫珠提取物及其应用
本专利技术公开了一种心肌保护的中药提取物，属于中药领域。
技术介绍
心肌缺血是指心脏的血液灌注减少的一种疾病，它会导致心脏的供氧减少，使心肌能量代谢不正常。严重影响人们的生活和工作，严重者可导致心肌梗塞和猝死。其特征在于缺氧、心肌炎症和心肌细胞凋亡，导致心肌供氧和需求之间严重失衡使得心肌坏死快速发展。心肌缺血主要的症状有心绞痛，心肌梗死，缺血性心肌病，和猝死。心血管疾病(CVDs)是一类影响心脏和/或血管的疾病，在心血管患者中大部分都有高血压和动脉粥样硬化。高血压和/或动脉粥样硬化可发展成心律失常，缺血性心脏病，心肌梗塞，最终导致心力衰竭。广东紫珠(Callicarpakwangtungensis)为马鞭草科紫珠属多年生落叶小灌木,以地上部位入药，其干燥茎枝、叶均可入药，性苦、涩，味凉，归胃、肝、肺经，具有清热解毒、止血收敛的功效，主治吐血、咽喉肿痛、外伤出血、热毒疮疡等症。临床用于治疗宫颈炎、盆腔炎与阴道炎等妇科疾病。广东紫珠提取物对实验性炎症早期的渗出有明显的抑制炎症反应中药因其副作用小，价格低廉来源广泛，目前没有文献报道广东紫珠提取物具有心肌保护作用，因此开发具有心肌保护活性的中药来预防一些心血管疾病的发生很有必要。本研究意义在于开发具有心肌保护活性的中药广东紫珠并进而阐明其发挥心肌保护作用的机制。
技术实现思路
本专利技术目的提供广东紫珠提取物的新用途，即具有心肌保护作用。技术方案一种广东紫珠提取物，其特征在于所述的提取物按如下步骤获得：取广东紫珠干燥的茎叶,80％的乙醇加热回流提取，滤液浓缩得浸膏即得广东紫珠总提物；将广东紫珠总提物过大孔树脂柱，用30％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩后得浸膏，即广东紫珠提取物。具体来说：一种广东紫珠提取物，其特征在于按如下步骤获得：取广东紫珠干燥的茎叶,80％的乙醇加热回流提取3次，每次1h,合并滤液浓缩得浸膏，即广东紫珠总提取物；将广东紫珠总提物干法上样过D101大孔树脂柱，依次用10％，30％，50％，70％，90％乙醇洗脱，收集30％乙醇洗脱液，减压浓缩后得浸膏，即广东紫珠提取物-广东紫珠总苯乙醇苷。所述广东紫珠提取物及广东紫珠总苯乙醇苷在制备作为心肌保护药物中的应用。本专利技术进一步具体发现广东紫珠提取物及广东紫珠总苯乙醇苷对心肌缺血损伤有保护作用并且发现广东紫珠总苯乙醇苷是通过改变Na+/K+-ATPase活性发挥心肌保护的作用，具体是通过激活Na+/K+-ATPasw/Src/ERK1/2信号通路。进一步说明本专利技术药物从市场获得，提取方法为将广东紫珠生药材5.4kg，用80％乙醇加热回流提取3次，每次1h，合并后进行减压浓缩得到总浸膏，即得广东紫珠提取物。将总提物通过D101大孔树脂柱，用30％的乙醇洗脱，搜集洗脱液浓缩得浸膏，即广东紫珠总苯乙醇苷。广东紫珠提取物体外活性筛选：将上述得到的广东紫珠总提物即广东紫珠总苯乙醇苷进行抗心肌氧化损伤活性筛选实验，实验发现他们对于H2O2诱导氧化损伤的H9c2细胞有保护作用。广东紫珠总苯乙醇苷体内活性筛选：将广东紫珠总苯乙醇苷配成低中高(100mg/kg,150mg/kg,200mg/kg)三个浓度进行灌胃给药,给药20天后，开始造模，造模方法为：盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导SD大鼠产生心肌缺血，给予ISO两天后进行心脏彩超检查，发现空白组大鼠心脏功能常数正常，模型组心肌射血分数短轴缩短率降低，肥厚指数较空白组增加，给药后心脏功能有所恢复，具体图表见附图4。广东紫珠提取物提高心肌组织Na+/K+-ATPase活性：各组大鼠处死后取一定量心肌组织测组织中Na+/K+-ATPase酶活力，发现广东紫珠总苯乙醇苷能够提高心肌组织中Na+/K+-ATPase活性。有益效果1.首次发现广东紫珠总提取物及广东紫珠总苯乙醇苷有心肌保护活性。2.首次发现广东紫珠总苯乙醇苷能够增加大鼠心肌表面Na+/K+-ATPase活性。3.首次发现广东紫珠总苯乙醇苷能够调节心肌组织中Na+/K+-ATPase表达，能够通过激活Na+/K+-ATPase/Src/ERK1/2，及Bax/Bcl2信号通路发挥心肌保护作用。附图说明图1：广东紫珠及广东紫珠总苯乙醇苷液相图，其中A为广东紫珠总提物，B为广东紫珠总苯乙醇苷，C为连翘酯苷B+金石蚕苷的混合标准品对照图，D,E分别为连翘酯苷B及金石蚕苷的标准曲线。图2：广东紫珠提取物(A)及广东紫珠总苯乙醇苷(B)的TOF-MS图图3：广东紫珠提取物及广东紫珠总苯乙醇苷心肌保护活性筛选图。图4：广东紫珠总苯乙醇苷及连翘酯苷B抑制Na+/K+-ATPase活性筛选结果图；图5：大鼠心脏彩超A及心功能常数图，肥厚指数(B),短轴缩短率(C),收缩期室间隔厚度(D)舒张期室间隔厚度(E)，左心室收缩末期内径(F),舒张末期左室后壁厚度(G)图6：大鼠血清中心肌损伤标记物水平图,血清中乳酸脱氢酶含量(A)，血清中肌酸激酶含量(B)。图7：大鼠血清及心肌组织中氧化应激水平，血清中丙二醛(MDA)含量(B)及心肌组织中谷胱甘肽(GSH)含量(A)；图8：大鼠血清及心肌组织中炎症因子水平,心肌组织中caspase3活性水平(A)血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)水平(B),血清中白细胞介素水平(C),(D)；图9：大鼠心肌组织病理切片；图10：大鼠心肌组织中Na+/K+-ATPase活性；图11：免疫组织化学方法测定心肌组织中Na+/K+-ATPase表达，免疫组化染色(A),定量测定Na+/K+-ATPase表达(B)；图12：免疫印迹测定心肌组织中Src,p-Src蛋白表达，并以Src总蛋白为内参定量p-Src(A)。Erk1/2,p-Erk1/2蛋白表达，并以Erk1/2总蛋白为参照进行定量(B),Bcl2,Bax蛋白表达，并以β-actin为参照进行定量(C)。具体实施方式：实施例1广东紫珠的提取及粗分离将广东紫珠生药材5.4kg，粉碎成粉末，用80％乙醇加热回流提取3次，每次1h，抽滤取滤液合并后在50℃条件下进行减压浓缩得到总浸膏,即广东紫珠总提物，将总浸膏通过D101大孔树脂柱，具体方法为，取400g大孔树酯与400克总浸膏混合均匀，干法上柱，柱体积为8000ml,用30％的乙醇洗脱，搜集洗脱液浓缩得浸膏，即得广东紫珠总苯乙醇苷。以连翘酯苷B和金石蚕苷的含量来衡量提取物中总苯乙醇苷的量，液相分析得广东紫珠总苯乙醇苷中苯乙醇苷含量为33.7％，见图1。表1以连翘酯苷B和金石蚕苷含量定量广东紫珠及广东紫珠总苯乙醇苷中苯乙醇的含量广东紫珠及广东紫珠总苯乙醇苷的质谱分析条件：流动相A：0.1％的甲酸-水溶液，B：甲醇溶液，洗脱条件：0-5min:5％(B)-15％(B),5-8min:15％(B)-16％(B),8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种广东紫珠提取物，其特征在于所述的提取物按如下步骤获得：取广东紫珠干燥的茎叶,80%的乙醇加热回流提取，滤液浓缩得浸膏即得广东紫珠总提物；将广东紫珠总提物过大孔树脂柱，用30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩后得浸膏，即广东紫珠提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种广东紫珠提取物，其特征在于所述的提取物按如下步骤获得：取广东紫珠干燥的茎叶,80%的乙醇加热回流提取，滤液浓缩得浸膏即得广东紫珠总提物；将广东紫珠总提物过大孔树脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯锋，柳文媛，孙晶，曲玮，段冰静，王如意，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32