用于治疗癌症的干扰素前药制造技术

本公开内容涉及干扰素前药及其在治疗癌症中的用途。这样的构建体的一个特别优点是其在体内发挥强大的抗肿瘤活性降低与干扰素治疗相关的许多显著毒性的能力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症的干扰素前药优先权要求本申请要求2017年6月20日提交的美国临时申请序列号62/522,564的优先权权益，其全部内容在此通过引用并入。
技术介绍
1.
本公开内容一般地涉及医学、肿瘤学和免疫治疗剂领域。更特别地，其涉及免疫试剂在癌症治疗中的开发和用途。2.
技术介绍
I型干扰素(interferon，IFN)被认为直接抑制肿瘤细胞增殖。其已成功用于治疗多种类型的癌症，包括血液肿瘤(慢性髓性白血病、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma))和实体瘤(黑素瘤、肾癌和卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma))(Ferrantinietal.，2007；Moschos&Kirkwood，2007；Zitvogeletal.，2015和Antonellietal.，2015)。事实上，不断增加的证据表明，内源性I型IFN在教育DC以提高针对肿瘤抗原的交叉致敏从而增强化学治疗、放射治疗、靶向治疗和免疫治疗的抗肿瘤活性方面发挥关键作用(Schiavonietal.，2011；Bumetteetal.，2011；Staggetal.，2011和Wooetal.，2014)。I型IFN治疗的一个特别优势是由于其能够在抗肿瘤免疫应答的产生中的多个点进行干预，包括刺激固有和适应性细胞毒性淋巴细胞群，负调节抑制性细胞类型，因此其通过抑制增殖以及通过调节凋亡、分化、迁移和细胞表面抗原表达而对肿瘤细胞产生影响(Parkeretal.，2016)。重要的是，这些作用中的一些可代表使用I型IFN来克服癌症对免疫治疗的抗性的潜在策略。癌症患者中复发的机制之一是由于用于肿瘤抗原呈递的MHCI类分子和肽转运蛋白基因的表达的下调而引起的T细胞识别缺乏(Sharmaetal.，2017)。I型IFN可用于诱导肿瘤细胞中的MHCI类表达以及LMP2/7和TAP-1/2的表达，一起成为对抗针对免疫治疗的治疗抗性的理想组合策略(Khanna，1998)。另外，I型IFN可通过负调节Treg的增殖(Paceetal.，2010和Srivastavaetal.，2014)以及降低MDSC的积聚和抑制功能(Zoglmeieretal.，2011)(这二者均直接抑制细胞毒性T淋巴细胞活性)来抑制Treg和MDSC(Schmidtetal.，2012和Gabrilovichetal.，2009)。这些多重抗肿瘤作用使得I型IFN在单一治疗中和与其他治疗组合二者中均成为吸引人的抗癌药物。然而，在临床中使用I型IFN的最大障碍之一是与这样的治疗相关的严重副作用。最频繁遇到的副作用是流感样症状、血液毒性、转氨酶升高、恶心、疲劳和精神后遗症。这些副作用妨碍达到并维持最大治疗作用所需的剂量，并且其发生可完全超过I型IFN治疗的临床益处(Kreutzeretal.，2004；Sleijferetal.，2005和Lotrich，2009)。因此，将I型IFN特异性地递送至肿瘤微环境的能力对于继续临床使用I型IFN至关重要。需要修饰I型IFN以获得仅在肿瘤中和肿瘤处发挥其活性的新的药物形式并且还实现避免在肿瘤外的严重不良作用的策略。
技术实现思路
因此，根据本公开内容，提供了干扰素前药，其包含：(a)干扰素α和β受体(interferonalphaandbetareceptor，IFNAR)结构域，其保留IFN结合活性；(b)1型干扰素(IFN)结构域，其在未被所述IFNAR结构域接合时保留1型干扰素活性；(c)免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)Fc结构域；(d)第一接头，其在一端与所述IFN的N端融合并且在另一端与所述IFNAR融合，其中所述第一接头可被蛋白酶切割；以及(e)第二接头，其在一端与所述IFN的C端融合并且在另一端与所述IgFc结构域的N端融合。Ig可以是IgG，例如IgG1或IgG2。干扰素前药可包含两个拷贝的所述1型IFN结构域。干扰素前药可包含多于两个拷贝的所述1型IFN结构域。第一接头可被一种或更多种基质金属蛋白酶例如MMP1、MMP3、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13或MMP14切割。第一接头可被UPA、FAPa和/或组织蛋白酶B切割。接头可以是G4S-SUBl-G4S-SUB2-G4S-SUB3-G4S，其中SUB1至3是不同的酶切割位点。IFNAR可以是IFNAR1或IFNAR2。IFN可以是IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω或IFN-ζ。在另一个实施方案中，提供了编码干扰素前药的核酸构建体，其包含：(a)干扰素α和β受体(IFNAR)结构域，其保留IFN结合活性；(b)1型干扰素(IFN)结构域，其在未被所述IFNAR结构域接合时保留1型干扰素活性；(c)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域；(d)第一接头，其在一端与所述IFN的N端融合并且在另一端与所述IFNAR融合，其中所述第一接头可被蛋白酶切割；(e)第二接头，其在一端与所述IFN的C端融合并且在另一端与所述IgFc结构域的N端融合；以及(f)启动子，其位于所述IFNα结构域5’端的5’方向。Ig可以是IgG，例如IgG1或IgG2。干扰素前药包含两个拷贝的所述1型IFN结构域。干扰素前药可包含多于两个拷贝的所述1型IFN结构域。第一接头可被基质金属蛋白酶例如MMP1、MMP3、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13和/或MMP14切割。第一接头可被UPA、FAPa和/或组织蛋白酶B切割。接头可以是G4S-SUB1-G4S-SUB2-G4S-SUB3-G4S，其中SUB1至3是不同的酶切割位点。IFNAR可以是IFNAR1或IFNAR2。IFN可以是IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω或IFN-ζ。还提供了：重组细胞，其表达如以上限定的干扰素前药；重组细胞，其包含如以上限定的核酸构建体；表达干扰素前药的方法，其包括培养以上限定的细胞；表达干扰素前药的方法，其包括培养以上限定的细胞；以及如以上限定的干扰素前药的以下用途：(a)制备用于治疗癌症的药物，或者(b)用于治疗癌症。在另一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用如以上限定的干扰素前药。所述方法还可包括评估在获自所述对象的癌细胞中的蛋白酶表达的步骤。癌细胞可从活检获得，或者可以是循环肿瘤细胞。癌症可以是肺癌、乳腺癌、脑癌、口腔癌、食管癌、头颈癌、皮肤癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、睾丸癌、子宫癌、宫颈癌、淋巴瘤或白血病。癌症可以是原发性的、复发性的、转移性的或多重抗药性的。患者可先前已接受手术治疗、化学治疗、放射治疗、激素治疗或免疫治疗。所述方法还可包括用第二癌症治疗例如手术治疗、化学治疗、放射治疗、激素治疗或免疫治疗对所述对象进行治疗。对象可以是人或非人哺乳动物。所述方法还可包括将所述干扰素前药多于一次例如每天、每隔一天本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.干扰素前药，其包含：/n(a)干扰素α和β受体(IFNAR)结构域，其保留IFN结合活性；/n(b)1型干扰素(IFN)结构域，其在未被所述IFNAR结构域接合时保留1型干扰素活性；/n(c)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域；/n(d)第一接头，其在一端与所述IFN的N端融合并且在另一端与所述IFNAR融合，其中所述第一接头能够被蛋白酶切割；以及/n(e)第二接头，其在一端与所述IFN的C端融合并且在另一端与所述Ig Fc结构域的N端融合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170620 US 62/522,5641.干扰素前药，其包含：
(a)干扰素α和β受体(IFNAR)结构域，其保留IFN结合活性；
(b)1型干扰素(IFN)结构域，其在未被所述IFNAR结构域接合时保留1型干扰素活性；
(c)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域；
(d)第一接头，其在一端与所述IFN的N端融合并且在另一端与所述IFNAR融合，其中所述第一接头能够被蛋白酶切割；以及
(e)第二接头，其在一端与所述IFN的C端融合并且在另一端与所述IgFc结构域的N端融合。


2.权利要求1所述的融合蛋白，其中所述Ig是IgG，例如IgG1或IgG2。


3.权利要求1至2所述的融合蛋白，其中所述干扰素前药包含两个拷贝的所述1型IFN结构域。


4.权利要求1至3所述的融合蛋白，其中所述干扰素前药包含多于两个拷贝的所述1型IFN结构域。


5.权利要求1至4所述的融合蛋白，其中所述第一接头能够被一种或更多种基质金属蛋白酶例如MMP1、MMP3、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13或MMP14切割。


6.权利要求1至5所述的融合蛋白，其中所述第一接头能够被UPA、FAPa和/或组织蛋白酶B切割。


7.权利要求1至4所述的融合蛋白，其中所述接头是G4S-SUB1-G4S-SUB2-G4S-SUB3-G4S，其中SUB1至3是不同的酶切割位点。


8.权利要求1至7所述的融合蛋白，其中所述IFNAR是IFNAR1。


9.权利要求1至7所述的融合蛋白，其中所述IFNAR是IFNAR2。


10.权利要求1至9所述的融合蛋白，其中所述IFN是IFN-α、IFN-β、IFN-κ、IFN-δ、IFN-ε、IFN-τ、IFN-ω或IFN-ζ。


11.编码干扰素前药的核酸构建体，其包含：
(a)干扰素α和β受体(IFNAR)结构域，其保留IFN结合活性；
(b)1型干扰素(IFN)结构域，其在未被所述IFNAR结构域接合时保留1型干扰素活性；
(c)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域；
(d)第一接头，其在一端与所述IFN的N端融合并且在另一端与所述IFNAR融合，其中所述第一接头能够被蛋白酶切割；
(e)第二接头，其在一端与所述IFN的C端融合并且在另一端与所述IgFc结构域的N端融合；以及
(f)启动子，其位于所述IFNα结构域5’端的5’方向。


12.权利要求11所述的核酸构建体，其中所述Ig是IgG，例如IgG1或IgG2。


13.权利要求11至12所述的核酸构建体，其中所述干扰素前药包含两个拷贝的所述1型IFN结构域。


14.权利要求11至13所述的核酸构建体，其中所述干扰素前药包含多于两个拷贝的所述1型IFN结构域。


15.权利要求11至14所述的核酸构建体，其中所述第一接头能够被基质金属蛋白酶例如MMP1、MMP3、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13和/或MMP14切割。


16.权利要求11至15所述的核酸构建体，其中所述第...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅阳新，曹学智，
申请(专利权)人：德克萨斯大学系统董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US