一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，属于人细胞分离及培养技术领域。该方法，包括以下步骤：取脱落的子宫内膜组织加入清洗液清洗，清洗完成后剪碎备用。向剪碎的子宫内膜组织中加入含I型胶原酶的消化液I，消化结束后用子宫内膜细胞培养液终止消化，然后经400目滤网过滤，将滤液及滤渣分离，滤液离心后，其沉淀用子宫内膜细胞培养液重悬得混悬液；在滤渣中加入含胰酶的消化液II消化，用子宫内膜细胞培养液终止消化，离心取沉淀并用子宫内膜细胞培养液重悬获得混悬液，最后将其与上一步骤获得的混悬液混合培养。上述子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，针对常规方法提取的不足，更高效地获得更多的子宫内膜细胞。

Isolation, culture and purification of endometrial cells

【技术实现步骤摘要】
一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法
本专利技术涉及人细胞分离及培养
，特别是涉及一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法。
技术介绍
子宫内膜是指构成哺乳类子宫的内壁，分为功能层和基底层。子宫内膜覆盖着粘膜，由粘膜上皮与其下方的固有层所组成，雌性激素分泌时，各上皮细胞将长大、分裂，使数目增多。固有层中粘膜上皮下方的部分称为机能层，上皮细胞进入子宫形成子宫腺，并对雌性激素起反应。子宫内膜异位症是指有活性的内膜细胞种植在子宫内膜以外的位置而形成的一种女性常见妇科疾病。内膜细胞正常应该生长在子宫腔内，但由于子宫腔通过输卵管与盆腔相通，因此使得内膜细胞可经由输卵管进入盆腔异位生长。子宫内膜异位症伴有痛经、月经异常或不孕等临床表现，但是引发机制尚不明确。为了对子宫内膜异位症的病因病机进行研究，需要稳定有效的子宫内膜细胞系，但目前缺乏稳定可靠的细胞系，原代子宫内膜细胞分离困难。因此，需要一套分离纯化子宫内膜细胞的方法，实现体外扩增获得大量的子宫内膜细胞。现有对子宫内膜细胞的分离技术通常为使用0.25％胰酶消化30min，过筛网获得单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、取子宫内膜组织加入清洗液清洗，所述清洗液中添加40-50％的红细胞裂解液除去血液，清洗后剪碎备用；/nS2、向剪碎的子宫内膜组织中加入含2-4mg/mL的I型胶原酶的消化液I，消化结束后用子宫内膜细胞培养液终止消化，用400目滤网过滤，分离且保留滤液和滤渣，滤液离心保留沉淀，沉淀用子宫内膜细胞培养液重悬获得子宫内膜细胞混悬液；/nS3、向上述滤渣中，加入含0.05％-0.1％胰酶的消化液II消化，用子宫内膜细胞培养液终止消化，离心取沉淀，然后用子宫内膜细胞培养液重悬获得子宫内膜细胞混悬液；/nS4、将S2、S3得到...

【技术特征摘要】
1.一种子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取子宫内膜组织加入清洗液清洗，所述清洗液中添加40-50％的红细胞裂解液除去血液，清洗后剪碎备用；
S2、向剪碎的子宫内膜组织中加入含2-4mg/mL的I型胶原酶的消化液I，消化结束后用子宫内膜细胞培养液终止消化，用400目滤网过滤，分离且保留滤液和滤渣，滤液离心保留沉淀，沉淀用子宫内膜细胞培养液重悬获得子宫内膜细胞混悬液；
S3、向上述滤渣中，加入含0.05％-0.1％胰酶的消化液II消化，用子宫内膜细胞培养液终止消化，离心取沉淀，然后用子宫内膜细胞培养液重悬获得子宫内膜细胞混悬液；
S4、将S2、S3得到的子宫内膜细胞混悬液共同接种于培养瓶中培养。


2.根据权利要求1所述的子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，其特征在于，消化液I包括DMEM，终浓度为2-4mg/mL的I型胶原酶和0.2-0.4mg/mL的DNA酶。


3.根据权利要求1所述的子宫内膜细胞的分离、培养及纯化方法，其特征在于，消化液II包括DMEM，终浓度为0.05％-0.1％的胰酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王刚，陈扬平，赵蓝，李静静，孙灿兴，
申请(专利权)人：广东唯泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44