【技术实现步骤摘要】
一种反映肾病综合征损伤程度的细胞模型及其构建方法
本专利技术属于肾病综合征模型制备
，更具体地，涉及一种反映肾病综合征损伤程度的细胞模型及其构建方法。
技术介绍
肾病综合征是儿童和成人最常见的肾小球疾病，因其并发症多、治疗效果差、预后困难，给人们生活和健康带来巨大的压力。阿霉素肾病是用来模拟人体肾脏疾病所建立的一种药理学实验模型，其方法是通过使用阿霉素干预体外细胞，使其表现出与患者肾脏疾病相似的病理特征和临床表现。体外构建的能够体现肾病综合征中足细胞损伤的阿霉素肾病细胞模型是筛选肾病综合征相关药物和研究其发病机制的典型细胞模型。随着肾脏疾病的研究及临床发展，已证明足细胞结构和功能的改变与该疾病的发生有着密切的联系。足细胞在阿霉素损伤下可以发生一系列的改变，如：细胞凋亡，细胞特异蛋白分子（如：Nephrin、podocin等）的变化和细胞粘附改变，以上病理改变可导致足细胞从肾小球基底膜脱落，且由于足细胞在体内是高度分化成熟的多突状细胞，分裂增殖能力不足，因此足细胞的减少和丢失已成为反应肾小球损伤严重程度的重要观测值表和预...
【技术保护点】
1.一种反映肾病综合征损伤程度的细胞模型的构建方法，其特征在于：MPC5细胞贴壁培养，然后控制阿霉素给药次数与给药浓度：第一次给药：重度阿霉素肾病细胞模型：96孔板中，每孔一次性加0.1μg/m L的阿霉素，复制阿霉素重度模型；轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/m L的阿霉素，其次12h后加0.03μg/m L的阿霉素，复制阿霉素肾病轻度模型；第二次给药：在6个孔板中接种MPC5细胞；重度阿霉素肾病细胞模型：每孔一次性加0.1μg/m L的阿霉素，复制阿霉素重度模型；轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/m L的阿霉素，其次12h后加...
【技术特征摘要】
1.一种反映肾病综合征损伤程度的细胞模型的构建方法，其特征在于：MPC5细胞贴壁培养，然后控制阿霉素给药次数与给药浓度：第一次给药：重度阿霉素肾病细胞模型：96孔板中，每孔一次性加0.1μg/mL的阿霉素，复制阿霉素重度模型；轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/mL的阿霉素，其次12h后加0.03μg/mL的阿霉素，复制阿霉素肾病轻度模型；第二次给药：在6个孔板中接种MPC5细胞；重度阿霉素肾病细胞模型：每孔一次性加0.1μg/mL的阿霉素，复制阿霉素重度模型；轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/mL的阿霉素，其次12h后加0.03μg/mL的阿霉素，复制阿霉素肾病轻度模型，用2个浓度的阿霉素处理24小时，然后收集MPC5细胞；第三次和第四次给药：在10*10培养皿中接种MPC5细胞；重度阿霉素肾病细胞模型：在皿中一次性加0.1μg/mL的阿霉素，复制阿霉素重度模型；轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/mL的阿霉素，其次12h后加0.03μg/mL的阿霉素，复制阿霉素肾病轻度模型，用2个浓度的阿霉素处理24小时，然后收集MPC5细胞。
2.根据权利要求1所述的一种反映肾病综合征损伤程度的细胞模型的构建方法，其特征在于：具体步骤如下：
（1）MPC5细胞培养：MPC5细胞用加入1％青-链双抗、10％FBS的RPMI1640培养基置于37℃，5％CO2的温箱里培养，使之完全贴壁后备用；
（2）两种阿霉素诱导MPC5细胞模型建立：MPC5细胞以每孔1×105个的浓度接种到96孔板中，将96孔板置于37℃、5%CO2条件下培养，24h后弃培养液；
重度阿霉素肾病细胞模型：每孔一次性加0.1μg/mL的阿霉素，复制阿霉素重度模型M2；
轻度阿霉素肾病细胞模型：分两次造模首先给予0.07μg/mL的阿霉素，其次12h后加0.03μg/mL的阿霉素，复制阿霉素肾病轻度模型M1；
每个浓度设6个复孔，重复3次；置培养箱中孵育24h后，取出细胞，每孔加入5mg/mL的MTT溶液10μL，继续培养4h；
每孔加入150μL的DMSO，置微量振荡器震荡10min，结晶充分溶解；在酶标仪上检测各孔在4...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦雪梅，崔婷，李爱平，杨柳，贺升升，张丽增，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西;14
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