本发明专利技术公开了一种基于AgNPs/CQDs‑PEI‑GO材料，构建一种稳定性好，灵敏度高的电化学发光免疫传感器，以及用于检测FSH抗体的方法。AgNPs/CQDs‑PEI‑GO电化学发光免疫传感器解决了市面上销售的抗体检测试剂盒无法用于FSH抗体检测的缺陷，为辅助生殖提供了技术支持，提高了检测方法的特异性。本发所用材料CQDs具有毒性低和生物兼容性好的优点，其次，PEI‑GO和AgNPs由于其具有高的导电性，大的比表面积和好的生物兼容性等优点，因此该传感器应用于样品的的检测中，具有良好的稳定性、重现性和特异性。
Preparation of an immunosensor and its application in detection of FSH antibody
【技术实现步骤摘要】
一种免疫传感器的制备及用于FSH抗体检测的方法
本专利技术属于生物传感检测
，具体涉及一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器的制备方法及用于检测FSH抗体的方法。
技术介绍
卵泡刺激素又称促卵泡激素(FolicleStimulatingHormone，FSH)，是一种糖蛋白激素，分子量约为30KD，属于糖蛋白激素家族。它能促进颗粒细胞增生，刺激类固醇生成，调节配子细胞的发育和成熟，是下丘脑-垂体-性腺轴中的主要激素之一。利用FSH激素诱导卵泡细胞发育成熟和体外受精，进行完全体外化培养技术生产的胚胎，移植给受体，用于完成试管婴儿等辅助生育。生殖辅助药物用于诱导重组促卵泡生长激素，能够维持窦前卵泡的存活,并且促进原始卵泡的发展。但药物长期使用可能产生抗体，影响效果，目前市场上销售的用于检测抗体的试剂盒无法有效检测到FSH抗体，为了高效地使用生殖药物，需要及时检测是否产生FSH抗体。
技术实现思路
本专利技术公开了一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO材料，构建一种稳定性好，灵敏度高的电化学发光免疫传感器，以及用于检测FSH抗体的方法。为实现专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：(1)将直径为5mm的玻碳电极(GCE)在铺有0.5μm的氧化铝粉末的抛光布上机械打磨抛光，先用二次水洗去表面残留粉末，再用乙醇清洗，再移入超声水浴中清洗，氮气吹干；(2)在玻碳电极上滴涂10μL浓度为1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室温下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极；(3)用PBS冲洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极，滴涂20μLFSH抗体(anti-FSH)在修饰的玻碳电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去离子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极；(4)在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极上滴涂30μL浓度为1.0wt.％的BSA，以封闭电极表面上非特异性活性位点，并保存在4℃冰箱中；(5)取20μL浓度为10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH标准溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器。其中AgNPs/CQDs-PEI-GO材料由以下方法制备：(1)CQDs的制备称取100～200g橘子经榨汁机搅拌后得到悬浮液，取30mL橘子汁和40mL乙醇于200mL水热反应釜中，置于烘箱中200℃加热6h，反应完全后冷却至室温，过滤残渣，将滤液离心后再用微孔滤膜过滤，再用冷冻干燥机对溶液进行冷冻干燥约72h，得到微黄色粉末，储存于4℃冰箱中保存备用；(2)PEI-GO的制备称量0.2gGO溶于300mL二次水中，超声30min；加入0.1gPEI，50℃加热回流10h，冷却至室温，所得产物离心、洗涤，最终溶于水中备用；(3)AgNPs/CQDs-PEI-GO的制备取20mLCQDs加入到PEI-GO溶液中，100℃加热回流2h，所得溶液离心洗涤后，然后加入0.1mL和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺和N-羟基丁二酰亚胺(5:1)的混合溶液，搅拌5min；加入5mLAgNPs后继续搅拌10h；得到的产物为AgNPs/CQDs-PEI-GO，离心、洗涤后溶于PBS中。基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器，其特征在于，使用方法如下：使用电化学工作站用三电极体系，Ag/AgCl做参比电极，铂丝做对电极，AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH做工作电极，检测工作在5mL含有0.1mol/LK2S2O8和0.1mol/LKCl的PBS溶液中进行,光电倍增管设置800V，扫描电压-1.8V～-0.2V，扫速200mVs。一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器，用于FSH抗体的检测方法如下：FSH抗体的检测由三部分分析组成：筛选实验、确证实验和滴定实验；(1)筛选实验是检测样本中是否为FSH抗体潜在阳性，用AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器得到FSH抗体的最低检出限，如浓度大于最低检出限，需要进一步通过确证实验验证；(2)对不同浓度的anti-FSH标准溶液进行检测，通过所得的电致化学发光强度与anti-FSH标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；(3)待测样品溶液代替anti-FSH标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。本专利技术的有益效果为：(1)CQDs具有毒性低和生物兼容性好的优点，其次，PEI-GO和AgNPs由于其具有高的导电性，大的比表面积和好的生物兼容性等优点，因此该传感器应用于样品的的检测中，具有良好的稳定性、重现性和特异性。(2)AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器解决了市面上销售的抗体检测试剂盒无法用于FSH抗体检测的缺陷，为辅助生殖提供了技术支持，提高了检测方法的特异性。(3)本专利技术用橘子作为原料制备CQDs，具有原料来源简单，绿色无毒的优点。具体实施方式实施例1一种基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，(1)将直径为5mm的玻碳电极(GCE)在铺有0.5μm的氧化铝粉末的抛光布上机械打磨抛光，先用30ml二次水洗去表面残留粉末，再用乙醇清洗2次，再移入超声水浴中清洗2分钟，氮气吹干；(2)在玻碳电极上滴涂10μL浓度为1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室温放置5小时后晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极；(3)用30mlPBS溶液(pH7.4)冲洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极，滴涂20μLFSH抗体(anti-FSH)在修饰的玻碳电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去离子水冲洗3次，除去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极；(4)在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极上滴涂30μL浓度为1.0wt.％的BSA，以封闭电极表面上非特异性活性位点，并保存在4℃冰箱中；(5)取20μL浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL、40ng/mL、50ng/mL、60ng/mL、70ng/mL、80ng/mL、90ng/mL、100ng/mL的anti-FSH标准溶液分别滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n将直径为5mm的玻碳电极(GCE)在铺有0.5μm的氧化铝粉末的抛光布上机械打磨抛光，先用二次水洗去表面残留粉末，再用乙醇清洗，再移入超声水浴中清洗，氮气吹干；/n在玻碳电极上滴涂10μL浓度为1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室温下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极；/n用PBS冲洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极，滴涂20μLFSH抗体(anti-FSH)在修饰的玻碳电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去离子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极；/n在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极上滴涂30μL浓度为1.0wt.％的BSA，以封闭电极表面上非特异性活性位点，并保存在4℃冰箱中；/n取20μL浓度为10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH标准溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器。/n...
【技术特征摘要】
1.一种基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将直径为5mm的玻碳电极(GCE)在铺有0.5μm的氧化铝粉末的抛光布上机械打磨抛光，先用二次水洗去表面残留粉末，再用乙醇清洗，再移入超声水浴中清洗，氮气吹干；
在玻碳电极上滴涂10μL浓度为1.5mg/mL的AgNPs/CQDs-PEI-GO的溶液，室温下晾干，得到AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极；
用PBS冲洗AgNPs/CQDs-PEI-GO修饰的玻碳电极，滴涂20μLFSH抗体(anti-FSH)在修饰的玻碳电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用去离子水洗去物理吸附的anti-FSH，制得AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极；
在AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰的玻碳电极上滴涂30μL浓度为1.0wt.％的BSA，以封闭电极表面上非特异性活性位点，并保存在4℃冰箱中；
取20μL浓度为10ng/mL～100ng/mL的anti-FSH标准溶液滴于AgNPs/CQDs-PEI-GO/anti-FSH修饰电极表面并在4℃冰箱中孵育10h，用PBS缓冲溶液冲洗电极表面，制得一种基于AgNPs/CQDs-PEI-GO电化学发光免疫传感器。
2.根据权利要求1所述的基于碳量子点的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述AgNPs/CQDs-PEI-GO材料由以下方法制备：
(1)CQDs的制备
称取100～200g橘子经榨汁机搅拌后得到悬浮液，取30mL橘子汁和40mL乙醇于200mL水热反应釜中，置于烘箱中200℃加热6h，反应完全后冷却至室温，过滤残渣，将滤液离心后再用微孔滤膜过滤，再用冷冻干燥机对溶液进行冷冻干燥约72h，得到微黄色粉末，储存于4℃冰箱中保存备用；
(2)PEI-GO的制备
称量0.2gG...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈应龙，
申请(专利权)人：杭州育源生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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