一种植物提取物抗糖化效果的评估方法技术

本发明专利技术公开了一种植物提取物抗糖化效果的评估方法，其包括蛋白糖化交联预防效果的评估方法和蛋白糖化交联抑制效果的评估方法。本发明专利技术能科学有效地评估植物提取物的抗糖化特性；其中，蛋白糖化交联预防效果的评估方法中，通过将蛋白与还原糖进行孵化来准确模拟人体环境中蛋白质的糖化过程，可通过对比样品和空白对照品的相对分子质量大小来评估植物提取物对蛋白糖化交联的预防效果；蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中，通过将蛋白与活性醛进行孵化来模拟衰老僵硬状态皮肤组织蛋白糖化的结构特性，将加入植物提取物的样品与含抗糖化标准物质的空白对照品的糖化交联程度比对，能够较好评估植物提取物对蛋白糖化的抑制效果。

An evaluation method of anti saccharification effect of plant extracts

【技术实现步骤摘要】
一种植物提取物抗糖化效果的评估方法
本专利技术涉及生物化工
，尤其涉及一种植物提取物抗糖化效果的评估方法。
技术介绍
糖化反应是蛋白质中游离的氨基与还原性糖的非酶促反应，也称为美拉德反应。在皮肤中，糖化反应会在真皮的细胞外基质中生成新的残基或发生交联作用，生成晚期糖化终末产物(AdvancedGlycationEndProducts,AGEs)。AGEs是一种糖化蛋白质，随着年龄的增长，它在人体组织中的生成和积聚是不可避免的。衰老皮肤组织分子间的糖化交联会促使皮肤老化加速而逐渐丧失弹性，皮肤变得僵硬和暗哑。真皮层内的胶原蛋白被糖化后，胶原蛋白纤维的弹性下降，使得肌肤的张度缺失，便产生了皮肤松弛，进而形成皱纹。目前，化妆品行业使用的抗糖化功能成分很多，但是其抗糖化效果的评估方法仍不明确，往往难以区分这些功能成分的抗氧化功能和抗糖化功能。为此，针对市场对美容产品的多元化需求，本专利技术探索一种植物提取物抗糖化效果的评估方法，以为抗糖化化妆品的开发提供技术支持。
技术实现思路
为解决上述现有技术中存在的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种植物提取物抗糖化效果的评估方法。为实现其目的，本专利技术采取的技术方案为：一种植物提取物抗糖化效果的评估方法，其包括蛋白糖化交联预防效果的评估方法和蛋白糖化交联抑制效果的评估方法。所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法包括如下步骤：a1：将蛋白和还原糖溶于溶剂中，加入植物提取物，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得样品；a2：以步骤a1的方法制备未加入所述植物提取物的空白对照品；a3：分别取等量的样品和空白对照品进行SDS-PAGE电泳分析(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析)，测定样品中蛋白的相对分子质量χ1和空白对照品中蛋白的相对分子质量χ2；若χ1小于χ2，说明所述植物提取物具有预防蛋白糖化交联的效果，否则不具有预防蛋白糖化交联的效果。优选地，所述步骤a1中，还原糖与蛋白的质量比值(还原糖:蛋白)为:大于0且≤5。通过实验发现，蛋白与还原糖为上述配比时，能较真实地模拟人体的糖化过程，从而更能准确地评估植物提取物对蛋白糖化交联的预防效果，否则可靠性较低。所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法包括如下步骤：b1：将蛋白与活性醛溶于溶剂中，加入植物提取物，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得样品；b2：将蛋白与活性醛溶于溶剂中，加入与所述植物提取物等质量的抗糖化标准物质，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得空白对照品；b3：分别取等量的样品和空白对照品进行SDS-PAGE电泳分析，测定样品中蛋白的相对分子质量у1和空白对照品中蛋白的相对分子质量у2；y1越趋近于y2，说明所述植物提取物抑制蛋白糖化交联的效果越好，否则抑制蛋白糖化交联的效果越差。优选地，所述步骤b1中，活性醛与蛋白的质量比值(活性醛:蛋白)为:大于0且≤10。通过实验发现，蛋白与活性醛为上述配比时，能较真实地模拟人体衰老僵硬状态皮肤组织蛋白糖化的过程，从而更能准确地评估植物提取物对蛋白糖化的抑制效果，否则可靠性较低。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法还包括：通过计算蛋白糖化交联预防指数来进行蛋白糖化交联预防效果强弱的评估，蛋白糖化交联预防指数越大，蛋白糖化交联预防效果越强，所述蛋白糖化交联预防指数的计算公式包括：式中，χ1为样品中蛋白的相对分子质量，χ2为空白对照品中蛋白的相对分子质量。优选地，所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法还包括：通过计算蛋白糖化交联抑制指数来进行蛋白糖化交联抑制效果强弱的评估，蛋白糖化交联抑制指数越大，蛋白糖化交联抑制效果越强，所述蛋白糖化交联抑制指数的计算公式包括：式中，у1为样品中蛋白的相对分子质量，у2为空白对照品中蛋白的相对分子质量。本专利技术采用的蛋白与还原糖混合孵化，能够准确模拟人体环境中蛋白质的糖化过程。由于蛋白发生糖化交联聚合反应后，蛋白的相对分子质量会变大，从而导致SDS可萃取的蛋白含量减少，不可萃取的蛋白含量增多，因此，可通过比较χ1和χ2来评估植物提取物是否具有预防蛋白糖化交联的效果。活性醛可加速蛋白的糖化，本专利技术采用的蛋白与活性醛混合孵化，能够模拟人体衰老僵硬状态的皮肤组织蛋白糖化的结构特性。同是由于蛋白发生糖化交联聚合反应后，蛋白的相对分子质量会变大，从而导致SDS可萃取的蛋白含量减少，不可萃取的蛋白含量增多，因此，可通过比较у1和у2来评估植物提取物对蛋白糖化的抑制效果。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法中，所述植物提取物的质量百分浓度为≥5％。优选地，所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中，所述植物提取物的质量百分浓度为≥5％，所述抗糖化标准物质的质量百分浓度为≥0.1％。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法和所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中，制备样品时，按溶剂的体积计，所述植物提取物的添加量为：≤1g/mL或≤1mL/mL；否则评估方法的可靠性较低。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法和所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中采用的溶剂为pH＝6.8且浓度为0.01mol/L的Tris-HCl缓冲液。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法和所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中采用的蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、胶原蛋白、乳白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白中的至少一种。以上蛋白能够较好模拟人体血液及皮肤组织中的各类蛋白质，更接近实际使用条件。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法中采用的还原糖为葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖中的至少一种。以上还原糖为人体膳食或环境中暴露率较高的还原糖。优选地，所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中采用的活性醛为乙二醛、丙酮醛、甘油醛、脱氧葡萄糖醛酮中的至少一种。以上活性醛是膳食或人体中广泛存在的活性醛，也是造成糖化的根本原因。优选地，所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中采用的抗糖化标准物质为氨基胍、与氨基胍有关的化合物(包括二甲双胍)、吡哆胺、2-异亚丙基肼基-4-氧噻唑烷-5-基乙酰苯胺(英文名:(±)-2-Isopropylidenehydrazono-4-oxo-thiazolidin-5-ylacetanilide,商品名:OPB-9195，CAS号:163107-50-4)、苯并噻唑鎓衍生物(英文名:PhenacylthiazoliumDerivatives)、替尼西坦、类黄酮、乙二醛酶(英文名:Glyoxalase)、阿马道莱酶(英文名:Amadoriases)、果糖胺-3-激酶(英文名:Fructosamine-3-kinase，英文缩写：FN3K)及赤藓糖醇中的至少一种。优选地，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法和所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法中的SDS-PAGE电泳分析的方法为：将样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物提取物抗糖化效果的评估方法，其特征在于，包括蛋白糖化交联预防效果的评估方法和蛋白糖化交联抑制效果的评估方法；/n所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法包括如下步骤a1～a3：/na1：将蛋白和还原糖溶于溶剂中，加入植物提取物，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得样品；/na2：以步骤a1的方法制备未加入所述植物提取物的空白对照品；/na3：分别取等量的样品和空白对照品进行SDS-PAGE电泳分析，测定样品中蛋白的相对分子质量χ

【技术特征摘要】
1.一种植物提取物抗糖化效果的评估方法，其特征在于，包括蛋白糖化交联预防效果的评估方法和蛋白糖化交联抑制效果的评估方法；
所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法包括如下步骤a1～a3：
a1：将蛋白和还原糖溶于溶剂中，加入植物提取物，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得样品；
a2：以步骤a1的方法制备未加入所述植物提取物的空白对照品；
a3：分别取等量的样品和空白对照品进行SDS-PAGE电泳分析，测定样品中蛋白的相对分子质量χ1和空白对照品中蛋白的相对分子质量χ2；若χ1小于χ2，说明所述植物提取物具有预防蛋白糖化交联的效果，否则不具有预防蛋白糖化交联的效果；
所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法包括如下步骤b1～b3：
b1：将蛋白与活性醛溶于溶剂中，加入植物提取物，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得样品；
b2：将蛋白与活性醛溶于溶剂中，加入与所述植物提取物等量的抗糖化标准物质，混合均匀后，在无菌无氧条件下以36～40℃振荡孵化15～30天，制得空白对照品；
b3：分别取等量的样品和空白对照品进行SDS-PAGE电泳分析，测定样品中蛋白的相对分子质量у1和空白对照品中蛋白的相对分子质量у2；y1越趋近于y2，说明所述植物提取物抑制蛋白糖化交联的效果越好，否则抑制蛋白糖化交联的效果越差。


2.如权利要求1所述的植物提取物抗糖化效果的评估方法，其特征在于，所述蛋白糖化交联预防效果的评估方法还包括：通过计算蛋白糖化交联预防指数来进行蛋白糖化交联预防效果强弱的评估，蛋白糖化交联预防指数越大，蛋白糖化交联预防效果越强，所述蛋白糖化交联预防指数的计算公式包括：



式中，χ1为样品中蛋白的相对分子质量，χ2为空白对照品中蛋白的相对分子质量。


3.如权利要求1所述的植物提取物抗糖化效果的评估方法，其特征在于，所述蛋白糖化交联抑制效果的评估方法还包括：通过计算蛋白糖化交联抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁志理，杨昭，苏杭，林建行，
申请(专利权)人：广东食品药品职业学院，
类型：发明
国别省市：广东;44