用于确定微型猪样品中抗药物抗体的方法技术

本发明专利技术涉及用于确定微型猪样品中存在或不存在抗药物抗体(ADA)或药物/ADA免疫复合物的体外方法。本发明专利技术还涉及可应用于本发明专利技术方法中的与微型猪IgG特异性结合的抗体。

A method for the determination of anti drug antibodies in miniature pig samples

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于确定微型猪样品中抗药物抗体的方法
本专利技术涉及一种用于确定微型猪样品中抗药物抗体的体外方法和与微型猪IgG特异性结合的抗体。专利技术背景新治疗性抗体的临床开发需要通过适宜的测定法评估它们的潜在免疫原性(Kaliyaperumal,A.和Jing,S.,Curr.Pharm.Biotechnol.10(2009)352-358)。抗药物抗体(ADA)测试通常涉及一种两层方法：(1)检测ADA的测定法和(2)表征ADA的测定法。ADA检测测定法包括筛选和特异性验证(验证性)测定法。基于微量滴定板的酶联免疫吸附测定(ELISA)是使用最广泛的筛选ADA的样式，原因在于其高通量效率、简易性和高灵敏度(Geng,D.等人,J.Pharm.Biomed.Anal.39(2005)364-375)。ADAELISA最经常以提供高度选择性、检测全部同种型和泛物种ADA检测能力的桥样式设计(Mire-Sluis,A.R.等人,J.Immunol.Methods289(2004)1-16)。WO2008031532A1中公开了一种用于检测衍生自猴物种的样品中ADA的ADAELISA。专利技术概述本专利技术涉及一种确定微型猪样品中存在或不存在抗药物抗体(ADA)的体外方法，所述方法包括：使样品与过量的药物接触，其中ADA与所述药物结合以形成药物/ADA复合物，使药物/ADA复合物与特异性结合微型猪IgG的抗体接触，其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG特异性结合，确定与微型猪IgG特异性结合的抗体对药物/ADA复合物的结合以确定样品中是否存在ADA。在另一个方面，本专利技术涉及一种确定微型猪样品中存在或不存在包含药物和与药物特异性结合的抗体的免疫复合物(药物/ADA复合物)的体外方法，所述方法包括：使微型猪样品与固定化抗体接触，所述固定化抗体特异性结合药物以固定存在于微型猪样品中的药物/ADA复合物，使药物/ADA复合物与特异性结合微型猪IgG的抗体接触，其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG特异性结合，并且确定与微型猪IgG特异性结合的抗体对药物/ADA复合物的结合以确定样品中是否存在ADA。在本专利技术的一个实施方案中，与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG特异性结合。在本专利技术的一个实施方案中，与微型猪IgG特异性结合的抗体不与小鼠IgG特异性结合。在本专利技术的一个实施方案中，与微型猪IgG特异性结合的抗体与微型猪IgG的Fc结构域特异性结合。在一个实施方案中，与微型猪IgG的Fc结构域特异性结合的抗体包含SEQIDNO:3的重链的CDR1、SEQIDNO:4的重链的CDR2、和SEQIDNO:5的重链的CDR3、SEQIDNO:6的轻链的CDR1、SEQIDNO:7的轻链的CDR2、和SEQIDNO:8的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.8.14”的六个CDR)。在本专利技术的一个实施方案中，与微型猪IgG特异性结合的抗体与微型猪IgG的Fab结构域特异性结合。在一个实施方案中，与微型猪IgG的Fab结构域特异性结合的抗体包含SEQIDNO:11的重链的CDR1、SEQIDNO:12的重链的CDR2、和SEQIDNO:13的重链的CDR3、SEQIDNO:14的轻链的CDR1、SEQIDNO:15的轻链的CDR2、和SEQIDNO:16的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“1.2.6”的六个CDR)。在一个实施方案中，与微型猪IgG的Fab结构域特异性结合的抗体包含SEQIDNO:19的重链的CDR1、SEQIDNO:20的重链的CDR2、和SEQIDNO:21的重链的CDR3、SEQIDNO:22的轻链的CDR1、SEQIDNO:23的轻链的CDR2、和SEQIDNO:24的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.3.8”的六个CDR)。在一个实施方案中，与微型猪IgG的Fab结构域特异性结合的抗体包含SEQIDNO:27的重链的CDR1、SEQIDNO:28的重链的CDR2、和SEQIDNO:29的重链的CDR3、SEQIDNO:30的轻链的CDR1、SEQIDNO:31的轻链的CDR2、和SEQIDNO:32的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.11.16”的六个CDR)。在本专利技术的一个实施方案中药物是药物抗体(DA)。在本专利技术的一个实施方案中，该方法是夹心测定法，其中步骤a)中，使药物/ADA复合物与特异性结合人IgG的抗体接触，其中使特异性结合人IgG的抗体固定在支持物上，因而使药物/ADA复合物固定在支持物上，并且其中根据步骤b)使固定的药物/ADA复合物随后与抗体接触，所述抗体是与微型猪IgG特异性结合的抗体。本专利技术的另一个方面是与微型猪IgG特异性结合的抗体，所述抗体包含SEQIDNO:3的重链的CDR1、SEQIDNO:4的重链的CDR2、和SEQIDNO:5的重链的CDR3、SEQIDNO:6的轻链的CDR1、SEQIDNO:7的轻链的CDR2、和SEQIDNO:8的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.8.14”的六个CDR)。本专利技术的另一个方面是与微型猪IgG特异性结合的抗体，所述抗体包含SEQIDNO:11的重链的CDR1、SEQIDNO:12的重链的CDR2、和SEQIDNO:13的重链的CDR3、SEQIDNO:14的轻链的CDR1、SEQIDNO:15的轻链的CDR2、和SEQIDNO:16的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“1.2.6”的六个CDR)。本专利技术的另一个方面是与微型猪IgG特异性结合的抗体，所述抗体包含SEQIDNO:19的重链的CDR1、SEQIDNO:20的重链的CDR2、和SEQIDNO:21的重链的CDR3、SEQIDNO:22的轻链的CDR1、SEQIDNO:23的轻链的CDR2、和SEQIDNO:24的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.3.8”的六个CDR)。本专利技术的另一个方面是与微型猪IgG特异性结合的抗体，所述抗体包含SEQIDNO:27的重链的CDR1、SEQIDNO:28的重链的CDR2、和SEQIDNO:29的重链的CDR3、SEQIDNO:30的轻链的CDR1、SEQIDNO:31的轻链的CDR2、和SEQIDNO:32的轻链的CDR3(它们对应于如本文中公开的抗体“2.11.16”的六个CDR)。本专利技术的另一个方面是用于确定微型猪样品中存在或不存在抗药物抗体(ADA)的方法中的与微型猪IgG特异性结合的本专利技术抗体。本专利技术的方法和抗体允许可靠地检测微型猪样品(例如血浆、玻璃体液和眼房水)中的ADA和药物/ADA复合物。本专利技术的抗体显示与来自人类或小鼠的IgG无相关交叉反应性。本专利技术的抗体特别合适应用于本专利技术的方法中，因为它们显示低的信噪比。本专利技术的方法允许在高药物剂量存在下(例如在玻璃体液样品中)可靠的检测。因此，这些方法例如有利于评估响本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.确定微型猪样品中存在或不存在抗药物抗体(ADA)的体外方法，所述方法包括：/na)使样品与过量的药物接触，其中ADA与所述药物结合以形成药物/ADA复合物，/nb)使药物/ADA复合物与特异性结合微型猪IgG的抗体接触，所述抗体选自包含以下者的抗体/ni.SEQ ID NO:3的重链的CDR1、SEQ ID NO:4的重链的CDR2、和SEQ ID NO:5的重链的CDR3、SEQ ID NO:6的轻链的CDR1、SEQ ID NO:7的轻链的CDR2和SEQ ID NO:8的轻链的CDR3；/nii.SEQ ID NO:19的重链的CDR1、SEQ ID NO:20的重链的CDR2、和SEQ ID NO:21的重链的CDR3、SEQ ID NO:22的轻链的CDR1、SEQ ID NO:23的轻链的CDR2、和SEQ ID NO:24的轻链的CDR3；或/niii.SEQ ID NO:27的重链的CDR1、SEQ ID NO:28的重链的CDR2、和SEQ ID NO:29的重链的CDR3、SEQ ID NO:30的轻链的CDR1、SEQ ID NO:31的轻链的CDR2、和SEQ ID NO:32的轻链的CDR3；和/n其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG结合，和/nc)确定与微型猪IgG特异性结合的抗体对药物/ADA复合物的结合以确定样品中是否存在ADA。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170808 EP 17185220.51.确定微型猪样品中存在或不存在抗药物抗体(ADA)的体外方法，所述方法包括：
a)使样品与过量的药物接触，其中ADA与所述药物结合以形成药物/ADA复合物，
b)使药物/ADA复合物与特异性结合微型猪IgG的抗体接触，所述抗体选自包含以下者的抗体
i.SEQIDNO:3的重链的CDR1、SEQIDNO:4的重链的CDR2、和SEQIDNO:5的重链的CDR3、SEQIDNO:6的轻链的CDR1、SEQIDNO:7的轻链的CDR2和SEQIDNO:8的轻链的CDR3；
ii.SEQIDNO:19的重链的CDR1、SEQIDNO:20的重链的CDR2、和SEQIDNO:21的重链的CDR3、SEQIDNO:22的轻链的CDR1、SEQIDNO:23的轻链的CDR2、和SEQIDNO:24的轻链的CDR3；或
iii.SEQIDNO:27的重链的CDR1、SEQIDNO:28的重链的CDR2、和SEQIDNO:29的重链的CDR3、SEQIDNO:30的轻链的CDR1、SEQIDNO:31的轻链的CDR2、和SEQIDNO:32的轻链的CDR3；和
其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG结合，和
c)确定与微型猪IgG特异性结合的抗体对药物/ADA复合物的结合以确定样品中是否存在ADA。


2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)中，将药物固定在支持物上。


3.确定微型猪样品中存在或不存在包含药物和与药物特异性结合的抗体的免疫复合物(药物/ADA复合物)的体外方法，所述方法包括：
a)使微型猪样品与固定化抗体接触，所述固定化抗体特异性结合药物以固定存在于微型猪样品中的药物/ADA复合物，
b)使药物/ADA复合物与特异性结合微型猪IgG的抗体接触，所述抗体选自包含以下者的抗体
i.SEQIDNO:3的重链的CDR1、SEQIDNO:4的重链的CDR2、和SEQIDNO:5的重链的CDR3、SEQIDNO:6的轻链的CDR1、SEQIDNO:7的轻链的CDR2和SEQIDNO:8的轻链的CDR3；
ii.SEQIDNO:19的重链的CDR1、SEQIDNO:20的重链的CDR2、和SEQIDNO:21的重链的CDR3、SEQIDNO:22的轻链的CDR1、SEQIDNO:23的轻链的CDR2、和SEQIDNO:24的轻链的CDR3；或
iii.SEQIDNO:27的重链的CDR1、SEQIDNO:28的重链的CDR2、和SEQIDNO:29的重链的CDR3、SEQIDNO:30的轻链的CDR1、SEQIDNO:31的轻链的CDR2、和SEQIDNO:32的轻链的CDR3；和
其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与人IgG结合，和
c)确定与微型猪IgG特异性结合的抗体对药物/ADA复合物的结合以确定样品中是否存在ADA。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中与微型猪IgG特异性结合的抗体不与小鼠IgG特异性结合。


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【专利技术属性】
技术研发人员：J·布洛克豪斯，A·赖泽，M·里特尔，KG·施图本拉赫，R·福格尔，M·扎德克，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH