对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法技术

本发明专利技术公开一种对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法，包括以下步骤：1)构建生物素连接酶质粒和具有AVI‑tag的靶蛋白质粒；2)取细胞密度达到1.2×10

Biotin labeling of proteins at the cellular level

【技术实现步骤摘要】
对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法
本专利技术涉及蛋白的表达和纯化的
，特别是涉及对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法。
技术介绍
生物素，是一种生物体内天然存在的小分子，其与亲和素形成的生物素-亲和素系统(Biotin-AvidinSystem，BAS)具有高亲和力的牢固结合以及多级放大效应，越来越多被应用于生物医学等领域。生物素经活化后可对蛋白质(抗原、抗体)等生物大分子进行标记，既保持了大分子的生物活性，又使大分子具有了BAS的高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点。在细胞和抗原的定位、检测，抗体亲和力筛选等研究中扮演者不可替代的角色，高质量的生物素标记蛋白的生产目前是一个重大的挑战。生物素连接酶(BiotinLigase)由birA基因编码所得，能活化生物素形成生物素酰-5'-腺苷酸，将生物素特异地转移到生物素受体标签蛋白(如AviTag融合蛋白)上，使标签蛋白生物素化，Avi-tag是一个由15个氨基酸残基组成的短肽标签，在体内或体外都能被生物素连接酶在赖氨酸残基连接上一个生物素，从而实现蛋白的生物素化。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)构建生物素连接酶质粒和具有AVI-tag的靶蛋白质粒；/n2)取细胞密度达到1.2×10

【技术特征摘要】
1.一种对蛋白在细胞水平进行生物素标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)构建生物素连接酶质粒和具有AVI-tag的靶蛋白质粒；
2)取细胞密度达到1.2×106cells/mL以上且活率≥95％的细胞，经离心后，用新鲜培养基将密度调节至1.2×106cells/mL；再向其中加入生物素至终浓度为50μM；
3)利用所述步骤1)构建的两种质粒共转染步骤2)获得的细胞；
4)经2～5天之后收集细胞或蛋白，检测细胞的标记情况。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述细胞为293F细胞或CHO细胞。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，在转染的前一天，将细胞密度调节到0.6～0.8×106cells/mL；在转染当天，F细胞密度达到1.2×106cells/mL左右，活率≥95％。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心方式为以...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔聪，秦毅，王卓智，顾继杰，李竞，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31