一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，该方法通过在pFastbac Dual质粒中p10启动子和多角体启动子之后分别克隆外源蛋白基因，同时在p10启动子和多角体启动子之间插入同源重复序列，使得表达的外源蛋白量大大增加，表达的外源蛋白保持了其原有的免疫原性。本发明专利技术的表达外源蛋白的方法高效，低成本，能用于大量制备疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用
本专利技术属于遗传工程领域，涉及杆状病毒高效表达外源蛋白的方法。
技术介绍
杆状病毒是一类双链DNA病毒，自然界中主要感染鳞翅目、膜翅目和双翅目昆虫。杆状病毒基因组可以插入较大片段外源基因、表达外源蛋白，表达的外源蛋白具有较好的修饰加工，具有良好的生物学活性，至今已用杆状病毒表达的蛋白有千种，杆状病毒表达系统已被公认为是优良的表达系统。然而，如何提高杆状病毒表达系统表达外源蛋白的表达量一直是国内外学者研究的方向，多数是通过改造杆状病毒来实现提高外源蛋白表达量。虽然经过改造的杆状病毒在一定程度上提高了外源蛋白的表达量，但是杆状病毒的改造都是针对具体外源基因来进行的特定改造，不适合其他的外源蛋白的高效表达，不具有通用性，当需要表达其他的外源基因时，还需要重新对其他的外源基因进行改造。因此，需要提供一种应用范围更广、针对不同蛋白的杆状病毒高效表达的方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，其中，所述方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，其中，所述方法包括：步骤(1)将AcMNPV基因组中同源重复序列插入AcMNPV的P

【技术特征摘要】
1.一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，其中，所述方法包括：步骤(1)将AcMNPV基因组中同源重复序列插入AcMNPV的Pp10和PPH之间，获得之间插入了同源重复序列的Pp10和PPH序列；步骤(2)将所述外源蛋白基因各一个拷贝分别插入到pFastbacDual质粒中Pp10和PPH之后，获得包含所述Pp10和外源蛋白基因、所述PPH和外源蛋白基因双表达盒的pFastbacDual质粒；步骤(3)将所述步骤(1)获得的之间插入了同源重复序列的Pp10和PPH序列替换掉所述步骤(2)中所述pFastbacDual质粒上的相邻的Pp10和PPH，获得包含所述Pp10和外源蛋白基因、所述PPH和外源蛋白基因的双表达盒及所述双表达盒之间插入了同源重复序列的质粒；步骤(4)将所述步骤(3)获得的包含双拷贝外源基因及同源重复序列的质粒转化DH10Bac感受态细胞，获得重组Bacmid质粒；步骤(5)将所述步骤(4)获得的所述重组Bacmid质粒转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；以及步骤(6)培养所述步骤(5)得到的重组杆状病毒，收获上清，得到表达的所述外源蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(1)中所述的同源重复序列为Hr3，Hr3为SEQID.No.7所示；或所述的同源重复序列为Hr1，Hr1为SEQID.No.8所示。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(1)中的所述之间插入了同源重复序列的Pp10和PPH序列如SEQID.No.1或SEQID.No.2所示。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(2)中所述外源蛋白基因包括禽腺病毒Penton蛋白、禽腺病毒Fiber-2蛋白、禽减蛋综合征病毒Penton蛋白、禽减蛋综合征病毒Fiber蛋白、鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白、猪圆环病毒3型Cap蛋白、猪圆环病毒2型Cap蛋白、猪伪狂犬病病毒gB蛋白、猪伪狂犬病病毒gD蛋白、猪细小病毒VP2蛋白、猪瘟病毒E2蛋白、牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白、牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白、口蹄疫病毒VP0蛋白、口蹄疫病毒VP3蛋白、口蹄疫病毒VP1蛋白、兔瘟病毒VP60蛋白、日本血吸虫GALE蛋白、日本血吸虫Wnt5蛋白。


5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(5)中的昆虫细胞为sf21、sf9、或Highfive细胞。


6.一种制备疫苗的方法，其中，所述方法包括：：步骤(1)将AcMNPV基因组中同源重复序列插入AcMNPV的Pp10和PPH之间，获得之间插入了同源重复序列的Pp10和PPH序列；步骤(2)将所述外源蛋白基因各一个拷贝分别插入...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，王同燕，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，洛阳惠中生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41