The invention discloses a recombinant baculovirus displaying cyhv \u2011 2 membrane protein and its preparation method and application. The display of orf25 on the surface of baculovirus is realized by fusing the extracellular region of orf25 with the signal peptide and transmembrane region of baculovirus AcMNPV gp64. The amino acid sequence of orf25 fusion protein expressed by recombinant baculovirus as the vector is SEQ idno: 3. In the invention, the truncated cyhv \u2011 2 glycoprotein orf25 is used as the antigen gene to construct a recombinant baculovirus, and the orf25 is successfully displayed on the surface of the virus. The recombinant virus was used to transduce crucian carp cells. Orf25 was expressed in crucian carp cells and displayed on the cell surface. The recombinant virus was used as cyhv-2 vaccine to immunize Allogynogenetic crucian carp. The results showed that the recombinant baculovirus could provide 83.3% relative protection against cyhv-2 infection.
【技术实现步骤摘要】
一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用
本专利技术属于病毒载体疫苗
,具体地说,涉及一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒及其制备方法和应用。
技术介绍
CyHV-2(鲤疱疹病毒2型)是感染异育银鲫引起疱疹病毒性造血器官坏死病的病原,春季和秋季是其致病的高发季节,死亡率可高达100%,近年来给我国的鲫鱼养殖业造成了严重的经济损失。CyHV-2是双链DNA病毒,基因组长达290kb,可编码150种蛋白,其中包括36种膜蛋白(Journalofvirology2013;87:2908-2922)。疫苗免疫是控制病毒感染的重要手段。研究表明,针对CyHV-2的感染,灭活疫苗可以为异育银鲫提供71.4%的相对保护率(Fish&ShellfishImmunology2016;49:344-350)。酵母表达系统表达纯化的CyHV-2的囊膜蛋白ORF25,ORF25C和ORF25D可以作为亚单位疫苗,为异育银鲫提供抵抗CyHV-2感染的保护性免疫(Fish&ShellfishImmunology2015;47:1024-1031)。但是这些疫苗需要注射到鲫鱼体内,使用不够简便,保护率也不理想。杆状病毒可以将外源蛋白通过gp64跨膜区展示在病毒颗粒表面、转导多种动物细胞并在转导细胞中表达所携带外源基因,还可以作为疫苗佐剂刺激动物免疫反应等特点,因此在动物疫苗的研究和生产领域有广泛的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的缺陷,提供 ...
【技术保护点】
1.一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒,其特征在于,ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPV gp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现,重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:3。/n
【技术特征摘要】
1.一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒,其特征在于,ORF25在杆状病毒表面的展示通过将ORF25的胞外区与杆状病毒AcMNPVgp64的信号肽和跨膜区进行融合表达来实现,重组杆状病毒为载体表达的ORF25融合蛋白的氨基酸序列为SEQIDNO:3。
2.一种展示CyHV-2膜蛋白的重组杆状病毒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、从感染CyHV-2的组织匀浆中提取总DNA作为模板,以SEQIDNO:1和SEQIDNO:2为引物,扩增ORF25的胞外区基因片段;
步骤2、...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈红英,曹志伟,南昊,许晓东,
申请(专利权)人:西北农林科技大学,
类型:发明
国别省市:陕西;61
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。