一种马铃薯病毒检测方法技术

本发明专利技术属于马铃薯病毒领域，尤其是一种马铃薯Y病毒检测方法，其包括以下步骤：S1：取0.1g带有症状的新鲜烟叶，放入提前用液氮预冷的灭菌研钵中，加入液氮充分研磨，直至叶片呈白色粉末状，之后迅速将粉末转移至液氮预冷的2ml离心管内；S2：在样品粉末潮解前迅速加入Trizol，充分混匀，再加入氯仿，颠倒混匀，冰上静置；S3：离心机提前开启调至4℃，离心15min，本发明专利技术丰富了人们对WTMV的了解，并获得了其全基因组核酸序列，有利于人们研究WTMV的遗传信息及种群遗传分化，这对于及早了解WTMV的分布、流行及防控有一定的帮助，为以后农业的发展奠定了基础。

A detection method of potato virus

【技术实现步骤摘要】
一种马铃薯病毒检测方法
本专利技术涉及马铃薯病毒
，尤其涉及一种马铃薯病毒检测方法。
技术介绍
野番茄花叶病毒(Wildtomatomosaicvirus，WTMV)于2008年在越南野番茄中首次被发现，染病植株表现为花叶、萎缩等症状，全基因组序列大小为9659nt(GenBank登录号:DQ851495)。2013年，在泰国北碧报道了WTMV能侵染辣椒，随后在中国广东省的烟草上也证实了该病毒的存在。WTMV在野生番茄和水茄上引起花叶，在甜椒(Capsicumannuum)上引起叶脉褪绿，在烟草上能引起黄化和花叶。本专利技术采用的两对特异性引物辣椒叶脉斑点病毒(CVMV)和野番茄花叶病毒(WTMV)对从德宏陇川县创希达农林有限公司基地采集的辣椒样品进行RT-PCR检测，最终发现了一种新型野生番茄花叶病毒，属于马铃薯Y病毒属。将该病毒转接到烟草上，7d后发现顶叶卷曲，皱缩。马铃薯Y病毒属病毒(potyviruses)为正义单链RNA病毒，该属病毒主要通过蚜虫传播。马铃薯Y病毒属的病毒粒子为弯曲线状，无包膜，长为680～900nm，直本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马铃薯病毒检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：取0.1g带有症状的新鲜烟叶，放入提前用液氮预冷的灭菌研钵中，加入液氮充分研磨，直至叶片呈白色粉末状，之后迅速将粉末转移至液氮预冷的2ml离心管内；/nS2：在样品粉末潮解前迅速加入Trizol，充分混匀，再加入氯仿，颠倒混匀，冰上静置；/nS3：离心机提前开启调至4℃，离心15min；/nS4：离心后将上层水相转移至新的离心管内，加入提前预冷的异丙醇，上下颠倒混匀，室温孵育，然后离心；/nS5：弃去上清液，加入1ml 75％乙醇，轻弹离心管，使乙醇充分洗涤沉淀；/nS6：离心5min，弃去上清液；/nS7：重复步骤5、6，然后将...

【技术特征摘要】
1.一种马铃薯病毒检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取0.1g带有症状的新鲜烟叶，放入提前用液氮预冷的灭菌研钵中，加入液氮充分研磨，直至叶片呈白色粉末状，之后迅速将粉末转移至液氮预冷的2ml离心管内；
S2：在样品粉末潮解前迅速加入Trizol，充分混匀，再加入氯仿，颠倒混匀，冰上静置；
S3：离心机提前开启调至4℃，离心15min；
S4：离心后将上层水相转移至新的离心管内，加入提前预冷的异丙醇，上下颠倒混匀，室温孵育，然后离心；
S5：弃去上清液，加入1ml75％乙醇，轻弹离心管，使乙醇充分洗涤沉淀；
S6：离心5min，弃去上清液；
S7：重复步骤5、6，然后将洗涤好的离心管置于超净工作台中吹干，避免管内有液体；
S8：加入DEPC水溶解RNA继续实验或置于冰箱中保存。


2.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测方法，其特征在于，所述S2中，在样品粉末潮解前迅速加入1mlTrizol，充分混匀，再加入200μl氯仿，颠倒混匀，冰上静置5min。


3.根据权利要求1所述的一种马铃薯病毒检测方法，其特征在于，所述S3中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡永亮，陈玉芹，黄家卫，王彦兵，郑宽瑜，王应清，施罗丽，
申请(专利权)人：云南衡原检测技术有限公司，云南省德宏热带农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53