一种mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供一种mRNA可变剪切‑荧光素酶报告系统及其应用，所述的可变剪切‑荧光素酶报告系统，包含番茄RLPK基因的可变剪切区域序列和荧光素酶报告基因LUC序列。本发明专利技术还提供一种可变剪切‑荧光素酶报告系统的转基因烟草种子，利用农杆菌介导的瞬时过表达技术，在该转基因烟草叶片上表达外源基因；或者利用农杆菌介导的基因沉默技术，在该转基因烟草叶片上沉默烟草的內源基因，通过检测荧光素酶活性的变化来判断待测基因编码蛋白是否参与植物mRNA的可变剪切过程。本发明专利技术为快速筛选外源基因或植物内源基因是否调控植物mRNA可变剪切过程提供一套重要的技术手段。

A mRNA variable shear Luciferase Report System and its application

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统及其应用
本专利技术属于植物分子生物学领域，具体地说，本专利技术涉及一种荧光素酶报告系统及其应用，特别涉及一种特异性筛选待测基因是否参与植物mRNA可变剪切过程的荧光素酶报告系统及其应用，可用于对外源表达基因或植物內源基因是否参与植物的mRNA可变剪切过程进行快速筛选。
技术介绍
可变剪切是指同一种mRNA前体(pre-mRNA)通过不同的剪切方式产生不同mRNA的过程，在真核生物的生长发育过程中，绝大多数基因的pre-mRNA都需要经过5’端的核苷酸加帽，3’端添加多聚腺苷酸尾巴以及内含子剪切等一系列加工过程，才能产生成熟的mRNA1,2。RNA的可变剪切在调控生物的生长、发育等生命活动过程中发挥着重要作用，可变剪切不仅可以增加高等生物中基因表达的复杂程度3,4，而且可变剪切过程的一些副产物也会加工出多种非编码RNA进而参与到生物体的生长发育等过程5,6。目前，在可变剪切研究领域利用哺乳动物细胞、酵母和果蝇的细胞提取物构建的体外可变剪切系统为研究剪接体的组装和形成、剪切调节蛋白的功能及作用机制提供了极大的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统，其特征在于，该报告系统包含植物RLPK的可变剪切区域序列和荧光素酶报告基因序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统，其特征在于，该报告系统包含植物RLPK的可变剪切区域序列和荧光素酶报告基因序列。


2.根据权利要求1所述的mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统，其特征在于，所述的植物RLPK的可变剪切区域序列为SEQIDNO.1，所述的荧光素酶报告基因LUC序列为SEQIDNO.2，该mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统的序列为SEQIDNO.3。


3.一种mRNA可变剪切-荧光素酶报告系统的植物转基因载体，其特征在于，该植物转基因载体是将权利要求1或2中所述的植物RLPK的可变剪切区域序列和荧光素酶报告基因LUC序列一起连接到植物表达载体pCAMBIA1300中，得到植物转基因载体pCAMBIA1300:RLPK-LUC。


4.根据权利要求3所述的植物转基因载体，其特征在于，其构建过程包括以下步骤：
(1)提取番茄的基因组DNA，利用引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6扩增出植物RLPK的可变剪切区域序列，获得如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；
(2)利用引物SEQIDNO.7和SEQIDNO.8扩增出荧光素酶报告基因序列，获得如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；
(3)利用多片段重组的方法，将植物中RLPK的可变剪切区域序列和荧光素酶报告基因LUC序列连接到植物表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：董莎萌，黄杰，逯欣宇，王源超，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32