【技术实现步骤摘要】
一种微球试剂的制备方法
本专利技术涉及医学检测领域,具体涉及一种微球试剂的制备方法。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A(SerumamyloidAprotein,SAA)是一种由肝脏分泌的急性相蛋白,并能与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。现在,临床研究把目光集中在炎性疾病急性反应期间的SAA类型。SAA是个灵敏的参数,它在炎性反应大约8h后开始升高,且超过参考范围上限时间早于c反应蛋白(CRP),然而CRP在正常人中的中位数值与参考范围上限的差距,大约有10倍,而在SAA中仅有5倍。这样在一些轻微感染,例如,许多病毒感染中SAA升高要比CRP更为常见。在感染性疾病中,SAA的绝对上升要高于CRP,因此SAA测定,尤其对“正常”与微小急性相反应可提供更好的鉴别。通常约2/3感冒患者SAA升高,但少于1/2的患者相同表现CRP升高。在病毒感染病例中,SAA和CRP浓度升高见于腺病毒感染者。SAA和CRP的反应形式在急性感染的恢复阶段是平行的,这同时适用于细菌和病毒感染。随着SAA在临床中的应用范围越来越广泛,用于临床上检测SAA的方法主要有胶乳增强免疫比浊法、放射性免疫测定法、免疫速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验等。其中,目前市场上免疫比浊法制备的SAA的检测试剂盒大多采用两步法,第一步偶联剂将微球表面的官能团活化,第二步活化后的微球与抗体结合产生共价键。这种方法为了把未结合的抗体和偶联剂除去,需要进行多次的过滤和清洗,在过滤和清洗过程中,一般使用离心和超滤的方法。这些过滤和清洗过程耗时长、工艺繁锁,且 ...
【技术保护点】
1.一种微球试剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:/n1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合,超声分散;/n2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,混合、超声分散;/n3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,混合,得到所述微球试剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种微球试剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
1)将微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液混合,超声分散;
2)向步骤1)分散后的溶液加入第三助剂,混合、超声分散;
3)向步骤2)分散后的溶液加入第四助剂,混合,得到所述微球试剂。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述微球溶液中的微球为苯乙烯微球;
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐;
优选地,所述偶联剂溶液中的偶联剂还包括N-羟基琥珀酰亚胺;
优选地,所述微球溶液、血清淀粉样蛋白A抗体溶液和偶联剂溶液的体积比为1:1:(0.5-1)。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤1)所述微球溶液中,微球的质量浓度为0.1-0.5%;
优选地,步骤1)所述血清淀粉样蛋白A抗体溶液中,血清淀粉样蛋白A抗体的质量浓度为0.1-0.5%;
优选地,步骤1)所述偶联剂溶液中,偶联剂的质量浓度为3-10mg/L。
4.根据权利要去1-3任一项所述的方法,其特征在于,所述微球溶液和血清淀粉样蛋白A抗体溶液的溶剂均为第一助剂;其中,所述第一助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.5-2%的悬浊剂、0.1-0.5%的防腐剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述偶联剂溶液的溶剂为第二助剂;其中,所述第二助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2.0%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述第一助剂和第二助剂的pH均为5-7.5。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法,其特征在于,所述第一助剂和第二助剂中的缓冲液各自独立地包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液或磷酸缓冲盐溶液中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的无机盐各自独立地包括氯化钾和/或氯化钠;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的防腐剂各自独立地包括Proclin300和/或叠氮化钠;
优选地,所述第一助剂和第二助剂中的表面活性剂各自独立地包括吐温-20、吐温-80或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第一助剂中的悬浊剂包括海藻糖、蔗糖或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合;
优选地,所述第二助剂中的稳定剂包括牛血清白蛋白、明胶或甘油中的任意一种或至少两种的组合。
6.根据权利要去1-5任一项所述的方法,其特征在于,步骤1)所述混合的时间为1-24h;
优选地,步骤1)所述混合的转速为20-50rpm。
7.根据权利要去1-6任一项所述的方法,其特征在于,所述第三助剂包括以下质量浓度的组分:1-5%的无机盐、0.1-0.5%的防腐剂、0.5-2%的稳定剂、0.01-1%的表面活性剂,余量为缓冲液;
优选地,所述第三助剂的pH均为5-7.5;
优选地,所述第三助剂中的缓冲液包括包括2-(N-吗啉基)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓...
【专利技术属性】
技术研发人员:李子樵,王森,
申请(专利权)人:蓝怡科技集团股份有限公司,浙江蓝怡医药有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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