一种真姬菇的遗传转化方法技术

本发明专利技术涉及一种真姬菇的遗传转化方法，包括收集节孢子和转化农杆菌等。本发明专利技术利用来源于杏鲍菇中的萎锈灵抗性基因作为筛选标记，以农杆菌为介导，为通过遗传方法改良真姬菇品种奠定了基础，具有良好的市场应用前景。

A genetic transformation method of Pleurotus ostreatus

【技术实现步骤摘要】
一种真姬菇的遗传转化方法
本专利技术属于分子生物学领域，特别涉及一种真姬菇的遗传转化方法。
技术介绍
真姬菇是一种在我国被工厂化大量栽培的食用菌，营养价值高，具有很大的市场价值。另外有报道表明真姬菇的子实体具有抗黑色素瘤物质，具有潜在的药用价值。传统的杂交育种被用来改进栽培品种的口感和缩短生产周期。遗传转化是更快捷有效的改良品种农艺性状的方法。目前真姬菇遗传转化主要是以原生质体作为转化材料。原生质体的制备需要用融壁酶消化菌丝来去除细胞壁，操作比较繁琐。另外原生质体需要保存在高渗溶液中，比较脆弱而且容易在操作和离心过程中破碎。制备好的原生质体有很多丢失了细胞核，导致在遗传转化后的再生率低。某些担子菌在特定的培养条件下会产生无性孢子。节孢子是无性孢子的一种，它是由营养菌丝的细胞产生隔膜然后断裂形成的。先前已有研究培养真姬菇的单核菌丝能产生大量的节孢子，但到目前为止没有文献报道真姬菇的节孢子能用于遗传转化。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种真姬菇的遗传转化方法，该方法利用来源于杏鲍菇中的萎锈灵抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真姬菇的遗传转化方法，包括：/n(1)挑取含有转化质粒pTSdi-GUS的EHA105农杆菌单克隆，接菌到含有利发霉素和卡那霉素的LB液体培养基中，经摇床培养得到农杆菌菌液用于侵染；/n(2)将上述农杆菌菌液与重悬于IM液体培养基的真姬菇节孢子混合进行侵染，随后涂布到含琼脂的IM液体培养基上，遮光培养；最后用吐温-20洗下IM固体培养基上的节孢子，涂布在含有萎锈灵和头孢噻肟霉素的YMG平板上进行筛选，得到真姬菇转化子。/n

【技术特征摘要】
1.一种真姬菇的遗传转化方法，包括：
(1)挑取含有转化质粒pTSdi-GUS的EHA105农杆菌单克隆，接菌到含有利发霉素和卡那霉素的LB液体培养基中，经摇床培养得到农杆菌菌液用于侵染；
(2)将上述农杆菌菌液与重悬于IM液体培养基的真姬菇节孢子混合进行侵染，随后涂布到含琼脂的IM液体培养基上，遮光培养；最后用吐温-20洗下IM固体培养基上的节孢子，涂布在含有萎锈灵和头孢噻肟霉素的YMG平板上进行筛选，得到真姬菇转化子。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的LB液体培养基的组成为：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，5g/LNaCl，pH7.0。


3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚俊军，鲍大鹏，杨瑞恒，李焱，周陈力，李燕，万佳宁，唐利华，茅文俊，汪滢，龚明，邹根，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31