抗菌肽基因启动子P制造技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽基因启动子在改良虫生真菌孢子中的用途，属于分子生物学领域，该启动子为通过分子生物学手段改良和利用虫生真菌提供了一种新选择，可利用其调节基因在产孢后期的表达，改良孢子对不良环境，如抗紫外，抗逆的耐受性。

Antimicrobial peptide gene promoter p

【技术实现步骤摘要】
抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途
本专利技术属于生物
，具体涉及球孢白僵菌抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途。
技术介绍
昆虫病原真菌是控制自然界害虫的主要因素之一(Charnley，1997)，具有种类繁多、生长迅速、能侵染宿主的不同发育阶段等特点，已成为生物农药中的重要组成部分(李增智，1997)。昆虫病原真菌还具有对环境友好、宿主不易产生抗性等优点，已被开发成生物杀虫剂，广泛应用在农林害虫及城市卫生昆虫的防治上。分生孢子是真菌杀虫剂的有效成份，其通过附着宿主体壁、萌发后穿透宿主体壁开始侵染过程，完成后又在僵虫体表大量产生，开始下一轮侵染过程。真菌致死昆虫后一般能在其体外大量产孢，引起扩散，在适宜时形成流行病，并与其它各种天敌和许多杀虫剂相容。真菌杀虫剂已在我国和欧美国家得到广泛的应用(冯明光，1998)，迄今为止，已有50多种登记注册的产品，包括球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)、玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)和蜡蚧轮枝菌(Verticilliumlecanii)在内的十多种真菌。最近，昆虫病原真菌，特别是经过基因工程改良后的菌株，在城市卫生害虫如蚊子、苍蝇、蟑螂及入侵害虫火蚁的防治中展示了巨大的潜力，显示出昆虫病原真菌在生防领域具有广阔的应用前景(Wangetal.，2007；Fanetal.，2012a，2012b；Fangetal.，2011)。因此，利用基因工程调控虫生真菌的孢子发育对于虫生真菌的推广应用及环境安全等具有重要意义。但总体说来，由于昆虫病原真菌在应用过程中存在防效不稳定及击倒害虫的时间过程等问题，因此真菌杀虫剂在农药市场，以及生物农药市场所占份额还较低。在昆虫病原微生物中，真菌的侵染机制比较特别，它不必被宿主吞食而直接通过外骨骼或表皮侵入寄主。其侵染过程分为以下几步：分生孢子附着在昆虫体壁并萌发，形成侵染结构(如附着胞)；菌丝穿过昆虫体壁，在虫体内生长并致病昆虫；最终真菌以死亡的虫体为营养源，大量产生分生孢子，孢子扩散后感染其它昆虫，开始其另一轮的侵染过程(Chanley，2003)。在此过程中，孢子是侵染的起始，也是一轮侵染完成的终点，其产量、活力及抗逆能力直接决定了真菌生防制剂的防治效果及市场地位。利用基因工程对昆虫病原真菌的孢子进行改良，提高其田间应用时对紫外、高温等不利条件的耐受性，或提高孢子产量，对于昆虫病原真菌的应用具有重要价值。现有的研究显示，孢子产生前后启动子的选择是决定成败的关键。长期以来，在昆虫病原真菌的转基因研究中均是以组成性启动子为主。但组成性启动子在非靶标位置及时间表达，往往会消耗生物体能量，甚至对生物体的生长造成不利影响。因此，为了利用基因工程研究昆虫病原真菌的产孢及孢子产生前后的特性，急需有产孢前、中、后期等不同阶段特异表达的启动子。但迄今为止，还没有在昆虫病原真菌产孢后期(孢子成熟阶段)表达启动子的报道。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术公开球孢白僵菌抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途，该启动子为通过分子生物学手段改良和利用虫生真菌提供了一种新选择，可利用其调节基因在产孢后期的表达，改良孢子对不良环境，如抗紫外，抗逆等特性。本专利技术通过下述技术方案实现：抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途。具体的，所述的用途为在调控虫生真菌产孢后基因表达或改良虫生真菌孢子中的用途。具体的，抗菌肽基因启动子PBbAFP1来自于球孢白僵菌。进一步的，所述虫生真菌为球孢白僵菌。具体的，抗菌肽基因启动子PBbAFP1具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列：SEQIDNO.1PBbAFP1启动子序列(983bp)ACGGAATAGATCAATCGTGGTAGGAAAGACTTTTTCCAGAGGCAGTGCTGTGTCGAGTAAATGTCGTGTAAAAATTTCTTCTCCCTTCTACAGTCTGCCGGAATCTTTTTTCCGCACGATGCACGGCATTGCAATGCATCAGATAACTAAACGAACAATGAAGCAAAGGCAGCGTCTAAAGGCTACAAAGTTCAAAGACATGCATGGTCCTTGTCCGCGAGCGGCAGTATAGATCACCTTAATGGGCCAACGGCCATCGCACGATTCTTACTTGATGTTTCCGGAATCGCTCTCAAAGCTGCTTGATCTGGCCCtTTTTTTCGCACCCCCACACGATTTGCAACTTCACACGAAATCACAGTGCGCGGCAACTGACGATCGACAACCGGCGCATGCCAAATGTGGTATCAATAATATCAGGCTGGCTCGGTGCACGGTCGGGGTGACAGTCGACGCTATAAATTCATGTACGTCTGACCGAGGCCCTCCGGCATCGAGCAATTAGTAGCAATGAGCAGCGCACGTATGACTAAAGTGTTGTCACAATCTTGTCTGGTGGCGCGATGGGCCGGAAGATCTCTCAGGCATTCGCTCCGTCGGGGGCCAATCGCAAACCATCAGTGCATCGCCTGCGTGCATCATAACACGGGGCGGGAATGGCCTAGACTAGAGATGATCGGTGATGTTACATAGGGTTGCATATATACGTGACGGTCGATGAGGCCCCCAGCCTGATTTCAGATTCCTTAATCAGTGAACCAAGCCCAAATAGGTACGGAGAGATGTATCCTCTGGCAAGCTCGTCGGTAGAAGCCCAATTCGAAACAGCCCGACTATCCCATCATGTACGATATAAAAAGGCTTCACGACCGCTCCAAAACATCACCTTACAAGTTACACCTCACCAAGAAGCATTCTGATATATCGTTCCCAATCATCACTTAGAAGCTTTCCCAATAAAATCACCTcAAAATTTTGCAAA本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：本专利技术抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途，启动子PBbAFP1具有良好的特异性，仅在产孢后期特异表达，具有重要的应用价值，可在球孢白僵菌产孢后期，调节特定基因在孢子中的表达，该启动子为通过分子生物学手段改良和利用虫生真菌提供了一种新选择，可利用其调节基因在产孢后期的表达，改良孢子对不良环境，如抗紫外，抗逆的耐受性，但又不影响虫生真菌的营养生长或产孢等特性。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施例的限定。在附图中：图1为本专利技术PBbAFP11::eGFP真核表达载体的构建：Ptrpc为构巢曲霉色氨酸合成基因C的启本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗菌肽基因启动子P

【技术特征摘要】
1.抗菌肽基因启动子PBbAFP1在改良虫生真菌孢子中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的用途为在调控虫生真菌产孢后基因表达或改良虫生真菌孢子中的用途。


3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，抗菌肽基因启动子PBbAFP1来自于球孢白僵菌。


4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述虫生真菌为绿僵菌或球孢白僵菌。


5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，抗菌肽基因启动子PBbAFP1具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列。


6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用野生型球...

【专利技术属性】
技术研发人员：范艳华，刘宇，童胜，李茂莲，袁敏，林冬梅，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50