一种基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌及应用制造技术

本发明专利技术属于酒糟降解技术领域，具体为一种基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌及应用。该菌株为大肠杆菌BL21－P7，于2019年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2019856。该菌株用于酒糟纤维素的降解。该工程菌的重组内切葡聚糖酶对底物耐酸性强，转化效率高，可提高底物利用率，节约工艺成本。该方法构建的工程菌，缩短了菌株生长周期，可使内切葡聚糖酶的表达量及酶活性大大提高，其较强的耐酸性质，适用于酒糟这种酸性环境，有利于酒糟的腐熟，达到资源的可持续发展，解决酒糟对环境的污染问题。

An efficient acid resistant endoglucanase engineering strain based on distiller's grains and its application

【技术实现步骤摘要】
一种基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌及应用
本专利技术属于酒糟降解
，具体为一种基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌及应用。
技术介绍
酒糟以其独特的固态发酵方式和固态白酒蒸馏生产而出现，而我国酒糟年产量达数千万吨。酒糟中含有粗蛋白质、粗淀粉、粗脂肪、粗纤维(包括木质素、纤维素和半纤维素)、灰分和无氮提取物，除此之外，酒糟中还含有多种酶、有机酸和大量菌体自溶产生的嘌呤、嘧啶和类脂化合物。研究表明，利用酒糟生产生物有机肥，以其独特的优势，可以为农业废弃物和农作物生产搭建一座桥梁，开辟以“酒糟－生物有机肥－农作物”为循环模式的可持续发展道路。然而，传统腐熟剂中的菌株存在生长周期长，酶活性低等问题，影响酒糟腐熟。由于酒糟酸度高，酒糟粗纤维难以降解，造成酒糟腐熟周期长、腐熟不彻底等问题，导致酒糟利用率低。这不仅是对资源的极大浪费，更会严重污染环境，无法实现对资源的可持续无污染利用。国内外学者围绕这一重大课题开展了大量的研究发现，利用微生物产生的纤维素酶可将酒糟降解为可利用的资源，提高酒糟的利用率，实现资源的可持续和无污染利用，也使酒糟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌，其特征在于：该菌株为大肠杆菌BL21－P7，于2019年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2019856。/n

【技术特征摘要】
1.一株基于酒糟的高效耐酸内切葡聚糖酶工程菌，其特征在于：该菌株为大肠杆菌BL21－P7，于2019年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2019856。


2.如权利要求1所述工程菌的应用，其特征在于：该菌株用于酒糟纤维素的降解。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于包括以下步骤：
1)称取一定量白酒生产企业的废弃物酒糟，并向酒糟中添加花生壳，搅拌均匀；
2)制备大肠杆菌BL21－P7上清液，并将该上清液与步骤1)中的酒糟与花生壳混合物搅拌均匀；
3)向步骤2)的混合物中喷洒水、尿素和酒糟灰后进行发酵即实现对酒糟中纤维的降解。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤1)中酒糟与花生壳的质量比为0.5－1.5：2－4；大肠杆菌BL21－P7上清液的添加量为花生壳与酒糟总质量的3％－4％。


5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：尿素的添加量为花生壳与酒糟总质量的0.3％；酒糟灰的添加量为使混合物的pH值为5.0－8.0，水的添加量为使混合物的含水量为45wt％。


6.如权利要求3所述的应用，其特征在于：大肠杆菌BL21－P7上清液的制备步骤为：按2％接种量将大肠杆菌BL21－P7的种子液接种至500mlLB液体培养基，在37℃，180r/min的条件下培养至OD600为0.6～0.8，加入IPTG后在30℃，140r/min条件下过夜诱导12h；在8000rpm/min，10℃条件下离心2min收菌，菌体重悬于6mlPBS缓冲液中，在300W的功率下超声波破碎20min后，在8000rpm/min，10℃的条件下离心30min，吸取上清液。

【专利技术属性】
技术研发人员：左勇，秦世蓉，何颂捷，张晶，黄雪芹，
申请(专利权)人：四川轻化工大学，四川师范大学，
类型：发明
国别省市：四川;51