一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体及其制备方法，所述骨靶向脂质体是在脂质体的磷脂双分子层骨架上修饰有两亲性材料阿仑膦酸钠‑透明质酸‑胱胺‑胆固醇。本发明专利技术通过在脂质体中修饰谷胱甘肽敏感的骨靶向材料制成，不仅可以靶向到骨组织，同时二硫键可以嵌入脂质体内部，在谷胱甘肽的丰富的肿瘤细胞内会迅速断裂从而释放出药物。

A glutathione sensitive bone targeting liposome and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体及其制备方法
本专利技术属于药物制剂
，具体涉及一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体及其制备方法。
技术介绍
骨肿瘤包括骨原位瘤、骨转移瘤以及白血病等疾病。由于骨组织存在硬度较大，血流量较低，渗透性差等问题，一般化疗药物很难到达靶部位，而且药物通常需要全身给药才可以在骨组织中达到有效的治疗浓度，不仅降低了药物的治疗效率，而且会对其他正常组织产生一定的毒副作用。阿糖胞苷属于水溶性药物，在体内的半衰期较短，若要发挥抗肿瘤效果，需要大量给药，药物按照口服或者注射难以达到作用部位，也会对正常组织造成一定的损害。为了克服这种困难，需要解决两方面问题，首先是要将药物输送到骨病部位，其次需要在病灶部位快速释放药物。因此，在制剂设计时，既需要将药物靶向到骨，其次需要在特定的病灶环境中使药物迅速释放。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种阿糖胞苷脂质体骨靶向制剂及其制备方法，通过在脂质体中修饰谷胱甘肽敏感的骨靶向材料制成，不仅可以靶向到骨组织，同时二硫键可以嵌入脂质体内部，在谷胱甘肽的丰富的肿瘤细胞内会迅速断裂从而释放出药物。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体，在脂质体的磷脂双分子层骨架上修饰有两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇；所述两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇的结构式如式Ⅰ所示：，其中，m=10-100，n=10-100。进一步地，所述两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇通过以下步骤制备得到：步骤1，取胱胺盐酸盐于二氯甲烷中，加入三乙胺做缚酸剂，在冰浴和氮气保护下滴加胆固醇甲酰氯，搅拌反应，反应结束后过滤，旋蒸并用二甲基甲酰胺复溶，得到胱胺-胆固醇；步骤2，将透明质酸溶于甲酰胺，加入催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI）和1-羟基苯并三氮唑（HOBT）活化，然后加入阿仑膦酸钠，搅拌反应，将产物透析，冻干后得到阿仑膦酸钠-透明质酸；步骤3，将阿仑膦酸钠-透明质酸溶于甲酰胺，加入催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDCI）和1-羟基苯并三氮唑（HOBT）活化，然后加入胱胺-胆固醇，搅拌反应，将产物透析，冻干，即得。进一步地，所述脂质体中包载有阿糖胞苷。上述谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体的制备方法，包括以下步骤：取卵磷脂、胆固醇、PEG按薄膜分散法制备的到空白脂质体，然后将阿糖胞苷溶液与空白脂质体共孵育，得到阿糖胞苷脂质体；再将两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇与阿糖胞苷脂质体共孵育，即可得到骨靶向脂质体。上述谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体的制备方法，包括以下步骤：取卵磷脂、胆固醇、PEG、两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇按薄膜分散法制备得到空白骨靶向脂质体，然后与阿糖胞苷溶液共孵育，即可得到骨靶向脂质体。本专利技术具有以下优点：1.本专利技术利用脂质体包裹阿糖胞苷，可以防止药物快速被机体代谢，从而增加药物在体内的长循环。2.本专利技术具有一定的靶向性，可以在骨部位蓄积，从而减少其他组织的毒副作用。3.本专利技术的脂质体在疏水端含有谷胱甘肽敏感的二硫键，药物达到靶部位后会迅速释放药物从而达到杀死肿瘤细胞的目的。附图说明图1为骨靶向脂质体的结构示意图。图2为阿糖胞苷原料药与骨靶向脂质体的羟基磷灰石吸附度。具体实施方式纳米药物近年来广泛用于癌症的治疗，一个传统的靶向纳米制剂一般由三个部分构成，靶头、载体和化疗药物。1986年，Pierce首次提出骨靶向概念：药物制剂具有趋向并聚集于骨部位的趋势。骨靶向的常用靶头包括四环素类、双膦酸盐和聚乙二酸类等等。在众多靶头中，阿仑膦酸钠是一类可以抑制骨吸收的双膦酸盐，研究发现，双膦酸盐结构中的两个磷酸基上的氧原子可以与骨主要成分（羟基磷灰石）中的钙离子发生螯合，从而显示出对骨组织和钙化组织的亲和力。肿瘤细胞内存在大量的谷胱甘肽，其浓度约为胞外的100~1000倍，这种巨大的浓度差为二硫键材料的应用提供了可用的价值。二硫键在谷胱甘肽含量较高的地方会快速断裂从而使纳米制剂迅速膨胀最终达到快速释放药物的效果。脂质体包裹小分子药物是一种常用的药用载体，即可以有效避免药物过早被代谢从而延长药物的体内循环，另一方面由于EPR效应可以使药物在肿瘤部位聚集。透明质酸是一种高分子的聚合物，是由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖。如下式所示，D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之间由β-1,3-配糖键相连，双糖单位之间由β-1,4-配糖键相连，。透明质酸是一种广泛存在于细胞间质的糖胺多糖，具有较高的安全性和可修饰性。此外，大量研究报道透明质酸具有主动靶向到肿瘤细胞中CD44蛋白的功能，是一种良好的生物载体。在本专利技术中，设计了两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇(ALN-HA-CYS-Chol)，结构式如式Ⅰ所示，以透明质酸为基核，阿仑膦酸钠的氨基基团与透明质酸中的部分羧基在催化剂的作用下形成酰胺键，同时连有胆固醇的胱胺与透明质酸中的其他羧基在催化剂的作用下形成酰胺键。在本专利技术的实施例中，由于低分子量的透明质酸具有良好的穿透性且易吸收降解等优点，因此选用分子量约为10000的透明质酸来进行修饰。，其中，m=10-100，n=10-100。进一步地，将两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇(ALN-HA-CYS-Chol)修饰在脂质体表面，如图1所示，通过疏水端胆固醇（Chol）插入脂质体内部，阿仑膦酸钠（ALN）暴漏在脂质体表面从而显示出骨靶向性，可以靶向到骨组织，由于该材料含有二硫键，同时二硫键可以嵌入脂质体内部，在谷胱甘肽丰富的肿瘤细胞内会迅速断裂从而释放出药物。在本专利技术的实施例中，选用阿糖胞苷作为模型药物，将其包载在上述脂质体中。上述载药脂质体的制备方法，可以是采用后插入法，先制成空白脂质体，载药后再加入ALN-HA-CYS-Chol进行修饰。同时，也可以是采用前插入法，直接制备ALN-HA-CYS-Chol修饰的空白骨靶向脂质体，然后再载药。下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，未详细描述的技术均按照本领域人员熟知的标准方法进行。本申请中提及的试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅作为举例，对本专利技术不是唯一的。可分别用其它适合的工具或生物材料来替代。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇(ALN-HA-CYS-Chol)通过有机合成法进行制备，在透明质酸的部分羧基上修饰阿仑膦酸钠作为靶头，在透明质酸的其他羧基位置上修饰胱胺-胆固醇。具体合成过程如下：(1)合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体，其特征在于：在脂质体的磷脂双分子层骨架上修饰有两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇；/n所述两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇的结构式如式Ⅰ所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种谷胱甘肽敏感的骨靶向脂质体，其特征在于：在脂质体的磷脂双分子层骨架上修饰有两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇；
所述两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇的结构式如式Ⅰ所示：

，
其中，m=10-100，n=10-100。


2.根据权利要求1所述的骨靶向脂质体，其特征在于：所述两亲性材料阿仑膦酸钠-透明质酸-胱胺-胆固醇通过以下步骤制备得到：
步骤1，取胱胺盐酸盐于二氯甲烷中，加入三乙胺做缚酸剂，在冰浴和氮气保护下滴加胆固醇甲酰氯，搅拌反应，反应结束后过滤，旋蒸并用二甲基甲酰胺复溶，得到胱胺-胆固醇；
步骤2，将透明质酸溶于甲酰胺，加入催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三氮唑进行活化，然后加入阿仑膦酸钠，搅拌反应，将产物透析，冻干后得到阿仑膦酸钠-透明质酸；
步骤3，将阿仑膦酸钠-透明质酸溶于甲酰胺，...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯学，吴豪，邹丹璐，慈天元，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32