一种siRNA经皮递送组合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种siRNA经皮递送组合物及其用途。本发明专利技术将蜂海绵骨针与普通柔性脂质体、阳离子柔性脂质体结合使用，能够增强siRNA在体外的皮肤渗透性。蜂海绵骨针与阳离子柔性脂质体联合使用显示出对siRNA最好的经皮促渗效果，有望成为RNAi治疗一种很有前途的递送系统，为局部递送siRNA应用于皮肤病的治疗开辟新的机会。

A siRNA transdermal delivery composition and its application

【技术实现步骤摘要】
一种siRNA经皮递送组合物及其用途
本专利技术属于经皮给药制剂
，具体涉及一种siRNA经皮递送组合物及其用途。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)引发的特定基因沉默机制，即利用具有21至23个核苷酸的短双链RNA以高度序列特异性的方式抑制基因表达。RNAi疗法已被证明可以治疗由异常的基因表达引起的皮肤疾病，包括脱发，牛皮癣，过敏性皮肤病，皮肤癌，先天性肺炎和色素沉着等等。对这些皮肤病区域中的特定基因抑制，RNAi治疗的局部应用可以避免全身给药涉及的首过代谢和副作用，同时局部给药可以直接在皮肤病变部位发挥作用，提高患者的依从性，等等。由于siRNA是亲水性的且带负电荷的生物大分子(～13kDa)，因此其向活体皮肤细胞的局部递送主要存在两个障碍。递送第一个障碍是皮肤的最外层角质层(SC)，主要是由于角质层是“砖和水泥”构造和亲脂性。为了克服这种皮肤障碍，已经开发和利用了各种渗透增强策略和技术，例如微针，化学渗透增强剂和纳米载体系统等。之前的研究，我们已经证明蜂海绵骨针(SHS)作为新型硅微针，单独或与柔性脂质体结合使用可用来改善亲水性大分子的经皮吸收。SHS可以穿透皮肤角质层，在角质层上产生大量持久的微通道(持续时间可达72h)，在1.77cm2施加10mgSHS，可在每mm2上产生约850个微孔。siRNA局部递送的第二个障碍皮肤细胞膜。采用了许多方法来克服这一挑战，促进siRNA的内在化，例如电穿孔，脂质复合物和热休克等。为了使裸露的siRNA局部应用后保持其稳定，将siRNA封装到纳米载体中，是一种最大程度保护siRNA免受降解的策略。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种siRNA经皮递送组合物及其用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：一种siRNA经皮递送组合物，包括海绵骨针、柔性脂质体和所述siRNA。一实施例中：所述柔性脂质体与所述siRNA为柔性脂质体携载siRNA形式，或为柔性脂质体与siRNA的混合形式即非携载形式，优选柔性脂质体携载siRNA形式。一实施例中：所述海绵骨针为蜂海绵骨针，来源于蜂海绵Haliclonasp.。海绵骨针的纯度最好不低于90％。一实施例中：所述海绵骨针为海绵骨针溶液的形式，该海绵骨针溶液为缓冲液、去离子水、双蒸水或生理盐水配制而成，其中海绵骨针的质量浓度为0.01～100％。一实施例中：所述柔性脂质体包括普通柔性脂质体与阳离子柔性脂质体。本专利技术所述的柔性脂质体是在普通脂质体的制备过程中加入表面活性物质(例如胆酸钠、去氧胆酸钠、吐温、司盘、聚氧乙烯油醚等)制备得到，具有高度的变形能力。柔性脂质体按照所带的电荷可以分为阳离子柔性脂质体、阴离子柔性脂质体和中性柔性脂质体。本专利技术所述的阳离子柔性脂质体即为带正电荷的柔性脂质体。本专利技术所述的阳离子柔性脂质体可以通过带阳离子的磷脂((2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)、2,3-二油酰氧丙基-1-溴化三甲胺(DOTMA)、二甲基双十八烷基溴化铵(DDAB)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)等中的至少一种)与表面活性剂制备得到。本专利技术所述的普通柔性脂质体为除阳离子柔性脂质体之外的其他柔性脂质体，例如可以为中性柔性脂质体。本专利技术所述的普通柔性脂质体可以通过大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等与表面活性剂制备得到。一实施例中：所述普通柔性脂质体的磷脂浓度为3～5％。一实施例中：所述普通柔性脂质体的膜材包括大豆卵磷脂和表面活性剂。一实施例中：大豆卵磷脂和表面活性剂的质量比为4:1～1.5。一实施例中：所述阳离子柔性脂质体的磷脂浓度为0.02％～1.5％，优选0.04％～0.06％。一实施例中：所述阳离子柔性脂质体的膜材包括DOTAP和表面活性剂。一实施例中：DOTAP和表面活性剂的质量比为1:1～1.5。一实施例中：所述表面活性剂为聚氧乙烯20油醚。一实施例中：所述普通柔性脂质体的粒径为90～110nm，ζ电位为-10～0mV，携载siRNA后ζ电位降低。一实施例中：所述阳离子柔性脂质体的粒径为90～110nm，ζ电位为30～40mV，携载siRNA后ζ电位降低，降低至20～30mV或-35～-25mV。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是：一种siRNA经皮递送组合物的使用方法，先将所述海绵骨针施加于皮肤，然后将所述柔性脂质体和所述siRNA施加于皮肤。或者将该siRNA经皮递送组合物直接施加于皮肤。一实施例中：将所述海绵骨针施加于皮肤时，可以配合手动或电动的按摩方式。一实施例中：在皮肤上施用所述柔性脂质体和所述siRNA之前，需要先洗去残留的海绵骨针。一实施例中：所述海绵骨针在皮肤上的施用量为2～8mg/cm2。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之三是：一种siRNA经皮递送组合物在基因敲除中的用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之四是：一种siRNA经皮递送组合物在制备经皮吸收制剂或化妆品中的用途。一实施例中：所述经皮吸收制剂或化妆品为海绵骨针、柔性脂质体和siRNA直接制成，例如将海绵骨针、柔性脂质体和siRNA分别按照本专利技术提供的方法制备得到，或者按照其他医学上、药学上或化妆品上的相关工艺制备得到，或将海绵骨针、柔性脂质体和siRNA混合后按照医学上、药学上或化妆品上的相关工艺制备得到；或者，该经皮吸收制剂或化妆品为海绵骨针、柔性脂质体和siRNA分别添加辅料后按照医学上、药学上或化妆品上的相关工艺制备得到，或将海绵骨针、柔性脂质体、siRNA和辅料混合，按照医学上、药学上或化妆品上的相关工艺制备得到。本专利技术所述的辅料应为医学上、药学上或化妆品上可接受的、符合相关法规的辅料，例如包括稀释剂、溶剂、赋形剂、吸收剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、乳化剂、助悬剂、表面活性剂、成膜剂、抛射剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、杀菌剂、防腐剂等。本技术方案与
技术介绍
相比，它具有如下优点：本专利技术将SHS与不同的脂质囊泡，普通柔性脂质体(FL)和阳离子柔性脂质体(CFL)结合使用，以大大增强siRNA在体外的皮肤渗透性。此外，SHS和CFL(0.05％)的联合使用可产生协同作用，以将GAPDH-siRNA传递至皮肤细胞，从而显著抑制BALB/c雌性小鼠中GAPDH蛋白的表达，此外，将SHS和CFL的局部联合使用可适应于其他目标部位或皮肤病变部位，为局部递送siRNA应用于皮肤病的治疗以及新型功能化妆品领域开辟新的机会。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1为实施例2中脂质体表征，其中：a.脂质体大小，b.脂质体电位，c.脂质体柔性。图2为实施例3的体外经皮渗透实验中不同局部治疗下皮肤的GAPDH-si本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种siRNA经皮递送组合物，其特征在于：包括海绵骨针、柔性脂质体和所述siRNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种siRNA经皮递送组合物，其特征在于：包括海绵骨针、柔性脂质体和所述siRNA。


2.根据权利要求1所述的siRNA经皮递送组合物，其特征在于：所述柔性脂质体与所述siRNA为柔性脂质体携载siRNA形式，或为柔性脂质体与siRNA的混合形式。


3.根据权利要求1所述的siRNA经皮递送组合物，其特征在于：所述柔性脂质体包括普通柔性脂质体与阳离子柔性脂质体。


4.根据权利要求3所述的siRNA经皮递送组合物，其特征在于：所述阳离子柔性脂质体的磷脂浓度为0.02％～1.5％。


5.根据权利要求4所述的siRNA经皮递送组合物，其特征在于：所述阳离子柔性脂质体的磷脂浓度为0.04％～0.06％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈铭，梁雪娇，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35