结合CD3和肿瘤抗原的异二聚体抗体制造技术

本发明专利技术涉及新型异二聚体抗体。

Heterodimer antibody combining with CD3 and tumor antigen

【技术实现步骤摘要】
结合CD3和肿瘤抗原的异二聚体抗体相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§19(e)要求2014年11月26日提交的美国临时专利申请号62/085,117、2014年11月26日提交的美国临时专利申请号62/084,908、2014年11月26日提交的美国临时专利申请号62/085,027、2014年11月26日提交的美国临时专利申请号62/085,106、2015年5月8日提交的美国临时专利申请号62/159,111、2015年11月4日提交的美国临时专利申请号62/251,005和2015年11月4日提交的美国临时专利申请号62/250,971的优先权，其全部内容通过引用全文纳入本文，尤其是参考其中的附图、说明和权利要求。专利技术背景基于抗体的治疗已经成功用于治疗多种疾病，包括癌症和自身免疫/炎性病症。但仍然需要对这类药物的改进，尤其是增强其临床功效。正在探索的一条路是将其他和新抗原结合位点改造成基于抗体的药物，使得单个免疫球蛋白分子共结合两个不同的抗原。这种结合两个不同抗原的非天然或变换抗体形式通常被称为双特异性抗体。由于抗体可变区(Fv)的显著多样性理论上能产生上识别任何分子的Fv，双特异性抗体生成的一般方法是向抗体中引入新的可变区。已经探索的多种变换抗体形式用于双特异性靶向(Chames和Baty,2009,mAbs1[6]:1-9；Holliger和Hudson,2005,NatureBiotechnology23[9]:1126-1136；Kontermann,mAbs4(2):182(2012)，其全部通过引用纳入本文)。最初，通过将各自产生单个单克隆抗体的两个细胞系融合来制备双特异性抗体(Milstein等，1983,Nature305:537-540)。尽管得到的杂种杂交瘤或四倍体确实产生双特异性抗体，但它们仅是少数群体，并且需要大量纯化以分离所需抗体。其改造解决方案是使用抗体片段制备双特异性抗体。因为这样的片段缺乏全长抗体的复杂四级结构，所以可以在单个遗传构建体中连接可变轻链和重链。已经产生了许多不同形式的抗体片段，包括双抗体、单链双抗体、串联scFv和Fab2双特异性抗体(Chames和Baty，2009，mAbs1[6]：1-9；Holliger和Hudson，2005，NatureBiotechnology23[9]：1126-1136；通过引用明确地并入本文)。虽然这些形式可以在细菌中以高水平表达，并且由于其小尺寸可能具有有利的渗透益处，但它们在体内迅速清除，并且可能存在与其生产和稳定性有关的制造困难。这些缺点的主要原因是抗体片段通常缺乏具有相关功能的抗体恒定区，包括较大尺寸、高稳定性以及与血清中保持长半衰期的各种Fc受体和配体结合(即，新生儿Fc受体FcRn)或用作纯化的结合位点(即蛋白A和蛋白G)。已开始尝试通过将双重结合改造为全长抗体-样形式来解决基于片段的双特异性抗体的缺点(Wu等，2007，NatureBiotechnology25[11]：1290-1297；USSN12/477,711；Michaelson等，2009，mAbs1[2]：128-141；PCT/US2008/074693；Zuo等，2000，ProteinEngineering13[5]：361-367；USSN09/865,198；Shen等，2006，JBiolChem281[16]：10706-10714；Lu等，2005，JBiolChem280[20]：19665-19672；PCT/US2005/025472；明确地通过引用并入本文)。这些形式克服了抗体片段双特异性抗体的一些障碍，主要是因为它们含有Fc区。这些形式的一个明显缺点在于，因为它们在同二聚体恒定链顶部构建新的抗原结合位点，所以与新抗原的结合总是二价的。对于作为治疗性双特异性抗体形式中共同靶标而受瞩目的许多抗原而言，希望结合是单价的而不是二价的。对于许多免疫受体而言，通过一价结合相互作用的交联来实现细胞活化。交联机制通常由抗体/抗原免疫复合物介导，或通过效应细胞与靶细胞结合。例如，低亲和性Fcγ受体(FcγR)如FcγRIIa、FcγRIIb和FcγRIIIa与抗体Fc区单价结合。单价结合不会激活表达这些FcγR的细胞；然而，在免疫复合或细胞与细胞接触之后，受体被交联并聚集在细胞表面上，导致活化。对于负责介导细胞杀伤的受体，例如天然杀伤(NK)细胞上的FcγRIIIa，当效应细胞以高亲合形式结合靶细胞时，发生受体交联和细胞活化(Bowles和Weiner,2005,JImmunolMethods304:88-99，通过引用纳入本文)。类似地，在B细胞上，抑制性受体FcγRIIb仅在其与细胞表面B细胞受体(BCR)结合到免疫复合物中时才下调B细胞活化，一种由可溶性IgG与BCR识别的相同抗原的免疫复合介导的机制(Heyman2003,ImmunolLett88[2]:157-161；Smith和Clatworthy,2010,NatureReviewsImmunology10:328-343；明确地通过引用并入)。作为另一个实施例，T细胞的CD3激活仅在其相关联的T细胞受体(TCR)在高亲合细胞-细胞突触中与抗原呈递细胞上加载了抗原的MHC结合时发生(Kuhns等，2006，Immunity24：133-139)。实际上，使用抗CD3抗体的CD3的非特异性二价交联引起细胞因子风暴和毒性(Perruche等，2009,JImmunol183[2]:953-61；Chatenoud和Bluestone,2007,NatureReviewsImmunology7:622–632；明确地通过引用并入)。因此，对于实际临床应用，用于重定向杀伤靶细胞的CD3共结合的优选模式是单价结合，仅在与共结合靶标结合时才导致活化。CD38也称为环ADP核糖水解酶，是II型跨膜糖蛋白，具有长C末端胞外结构域和短N末端胞质结构域。在造血细胞中，多种功能效应被归结于CD38介导的信号传导，包括淋巴细胞增殖、细胞因子释放、调节B细胞和骨髓细胞发育和存活、以及诱导树突状细胞成熟。CD38在许多造血恶性肿瘤和源自各种造血恶性肿瘤的细胞系中上调，包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)，伯基特淋巴瘤(BL)，多发性骨髓瘤(MM)，B慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)，B和T急性淋巴细胞白血病(ALL)，T细胞淋巴瘤(TCL)，急性骨髓性白血病(AML)，毛细胞白血病(HCL)，霍奇金淋巴瘤(HL)和慢性骨髓性白血病(CML)。另一方面，造血系统的大多数原始多能干细胞是CD38-的。尽管抗癌药物有最新的发现和进展，但涉及CD38表达性肿瘤的许多癌症仍然预后不良。因此，需要更好的治疗此类癌症的方法。B细胞抗原CD19(CD19，也称为B细胞表面抗原B4，Leu-12)是人泛-B细胞表面标志物，从前-B细胞发育早期至终末分化为浆细胞都有表达。CD19促进成熟B细胞的增殖和存活。它与细胞表面上的CD21复合。它还与CD81和Leu-13结合并增强B细胞受体(BCR)信号传导。与BCR一起，CD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种异二聚体抗体，其包含：/na)包含SEQ ID NO:323的第一单体；/nb)包含SEQ ID NO:324的第二单体；和/nc)包含SEQ ID NO:325的轻链。/n

【技术特征摘要】
20141126 US 62/084,908;20141126 US 62/085,027;20141.一种异二聚体抗体，其包含：
a)包含SEQIDNO:323的第一单体；
b)包含SEQIDNO:324的第二单体；和
c)包含SEQIDNO:325的轻链。


2.一种核酸组合物，其包含：
a)编码SEQIDNO:323的第一核酸序列；
b)编码SEQIDNO:324的第...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·摩尔，J·德加莱斯，M·贝尔尼特，S·楚，R·拉什德，U·穆赫哈，SH·李，
申请(专利权)人：森科股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US