一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法技术

本发明专利技术涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。本发明专利技术纯化分离方法中采用纳滤膜除杂除盐分离效果突出，使得分离获得浓缩液中丙谷二肽含量较高、收率较高，同时大大缩短了分离时间，减少了蒸发浓缩的压力，降低能耗，产生的废水也可以通过套用提高丙谷二肽的收率，并且减少废水的生成。

A method of separation and purification of CGD by nanofiltration membrane

【技术实现步骤摘要】
一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法
本专利技术涉及丙谷二肽的分离纯化，具体的说是一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法。
技术介绍
丙谷二肽，学名N-(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，是L-谷氨酰胺的一种改性化合物，易溶于水。L-谷氨酰胺是机体内含量非常丰富的一种氨基酸，是人体多种组织代谢的参与体，人体缺乏L-谷氨酰胺会引发多种疾病。由于L-谷氨酰胺溶解度低且不稳定，因此L-谷氨酰胺的肠外应用受到了限制。丙谷二肽可在体内分解为L-谷氨酰胺和L-丙氨酸，这一特性使经由肠外营养输液补充L-谷氨酰胺成为可能。丙谷二肽分解释放出的氨基酸作为营养物质各自储存在身体的相应部位并随机体的需要进行代谢。由于丙谷二肽药用价值的特殊性，就像生理盐水、葡萄糖一样，将成为救护病人的必需品。目前生产丙谷二肽主要有化学合成法和生物酶催化法。其中化学合成法以Boc-丙氨酸或氯丙酰-谷氨酰胺为原料制备而成，此法得到的丙谷二肽纯度高，但合成路线略长；生物酶催化法具有工艺简单、条件温和、质量指标易控制、成本低等优点，更适合放大进行工业化生产。丙谷二肽的精制方法一般有浓缩蒸发结晶、溶媒结晶、离子交换树脂法、电渗析法等，其中结晶法工序多，高纯度时精制困难，步骤繁琐，离子交换树脂除盐收率极低，且产生大量含盐废水，电渗析法工艺放大困难，急需一种工艺简单、产率较高的丙谷二肽纯化方法。公布号为CN107267380A的专利公开了一种包括纳滤膜系统的丙谷二肽制备工艺系统，但其后续高纯度丙谷二肽精制仍不能达到满意效果。十二烷基磺酸盐乙醇溶液能增加体系中杂质的溶解度，提纯效果与单纯醇析结晶相比，得到的晶体纯度更高，更易分离。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种纳滤膜和十二烷基磺酸盐析晶工艺分离纯化丙谷二肽的方法。为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。所述制备丙谷二肽酶反应液通过50-100nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶。所述经陶瓷膜过滤除酶后反应液经旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，浓缩至原质量的20％-50％，浓缩后反应液经过100-200道尔顿的纳滤膜，在压力为1.3-2.4MPa下过滤除杂质，合并每次经纳滤膜过滤除杂后的浓缩液，待用。所述经纳滤膜过滤后浓缩液再次浓缩,所得浓缩液中固体与溶液的质量比为1:1-4，将每次再浓缩后的浓缩液合并待用。所述每100g上述合并的浓缩液中，于30-80℃温度下滴加50-300mL的含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液，而后以5℃-60℃/h的降温速率降温至0-20℃，过滤、洗涤滤饼，干燥后得到丙谷二肽晶体。其中，含十二烷基磺酸盐的乙醇溶液中十二烷基磺酸盐终浓度为3wt％。所述十二烷基磺酸盐为十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸氨或十二烷基磺酸钾。本专利技术所具有的优点：1.本专利技术分离方法将过滤膜和十二烷基磺酸盐析晶工艺相互结合，进而获得高纯度的丙谷二肽，纯化过程中采用100-200道尔顿的纳滤膜，滤膜可进一步的过滤盐类，同时将分子量小的谷氨酰胺和L-丙氨酸反应物杂质过滤掉，进而使纳滤后的浓缩液中含有纯度较高的丙谷二肽，并采用特定盐的乙醇溶液析晶，进而获得高纯度丙谷二肽。2.本专利技术纯化分离方法中采用纳滤膜除杂除盐分离效果突出，使得分离获得浓缩液中丙谷二肽含量较高、收率较高，同时大大缩短了分离时间，减少了蒸发浓缩的压力，降低能耗，产生的废水也可以通过套用提高丙谷二肽的收率，并且减少废水的生成。3.本专利技术采用纳滤分离纯化后浓缩液中丙谷二肽含量较纯，只需要简单的蒸发结晶，即可一步得到丙谷二肽晶体，整体工艺简单、易操作。具体实施方式以下结合实例对本专利技术的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本专利技术，并不局限于本专利技术。实施例1将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的30％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为2.1MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到98.7％，除谷氨酰胺量达到99.4％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩至浓缩液中固体质量占浓缩液质量的25％，于60℃滴加100mL含3％十二烷基磺酸氨的乙醇溶液，滴加后以20℃/h的速度梯度降温至10℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体109.3g，纯度为98.5％。实施例2将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的40％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.9MPa，，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到98.1％，除谷氨酰胺量达到98.3％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到97％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的33％，于50℃滴加150mL含3％十二烷基磺酸钠的乙醇溶液，滴加后以20℃/h的速度梯度降温至10℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体105.6g，纯度为97.3％。实施例3将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.02％，谷氨酰胺含量2.13％，盐含量1.97％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的50％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.7MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水再次进行纳滤，得到二次清液和浓缩液。一次清液和二次清液总除盐量达到97.5％，除谷氨酰胺量达到97.8％。将两次浓缩液合并，浓缩液中丙谷二肽纯度达到96.5％以上，收率达到90％以上。浓缩液继续经过旋转蒸发仪浓缩到浓缩液中固体质量占浓缩液质量的50％，于70℃滴加200mL含3％十二烷基磺酸钾的乙醇溶液，滴加后以15℃/h的速度梯度降温至5℃，过滤，得到丙谷二肽晶体,得到丙谷二肽晶体104.9g，纯度为97.7％。实施例4将制备丙谷二肽酶反应液通过50nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶，反应液中丙谷二肽含量4.53％，谷氨酰胺含量2.09％，盐含量2.06％。将去除酶后的3L反应液经旋转蒸发仪浓缩掉原体积的60％后经过100-200道尔顿的纳滤膜浓缩除盐，膜操作压力为1.5MPa，得到一次清液和浓缩液，向纳滤装置中加入1.5L水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：将制备丙谷二肽酶反应液依次通过陶滤除酶、纳滤除杂除盐后的浓缩液蒸发结晶，即获得纯度为98％以上的丙谷二肽。


2.按权利要求1所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述制备丙谷二肽酶反应液通过50-100nm陶瓷膜过滤除去反应液中的酶。


3.按权利要求1或2所述的纳滤膜分离纯化丙谷二肽的方法，其特征在于：所述经陶瓷膜过滤除酶后反应液经旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，浓缩至原质量的20％-50％，浓缩后反应液经过100-200道尔顿的纳滤膜，在压力为1.3-2.4MPa下过滤除杂质，合并每次经纳滤膜过滤除杂后的浓缩液，待用。

【专利技术属性】
技术研发人员：李阳，洪永德，姜书华，吴文忠，
申请(专利权)人：大连医诺生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21