一种天然Rakicidins类化合物Rakicidin B1-2及其发酵提取方法技术

本发明专利技术属于天然化合物技术领域，具体涉及一种天然Rakicidins类化合物Rakicidin B1‑2及其发酵提取方法。本发明专利技术从海洋小单孢菌发酵液中分离得到新的Rakicidins组分Rakicidin B1‑2，该化合物结构与已知的Rakicidin B1相比，在于11、14位开环，且在11位接入乙氧基。本发明专利技术天然化合物Rakicidin B1‑2对常氧和乏氧条件下培养的人结肠癌细胞HCT‑8和人胰腺癌细胞PANC‑1均具有一定的体外抑制作用，对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌、艰难梭菌和万古霉素耐药粪肠球菌等10株厌氧菌均具有一定的抑制活性，是一种结构新颖活性较好的次级代谢产物，具有较高的药用价值。

A natural rakicidin B1-2 and its fermentation and extraction method

【技术实现步骤摘要】
一种天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其发酵提取方法
本专利技术属于天然化合物
，具体涉及一种天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其发酵提取方法。
技术介绍
目前，已从海洋微生物的代谢产物中分离出几百种生物活性物质，其中部分是可能有临床应用价值的具有抗肿瘤活性或抑菌活性的抗生素，Rakicidins化合物即是其中一类重要的化合物，目前已报道从小单孢菌和链霉菌中发现了一系列具有抗肿瘤活性或抑菌活性的Rakicidins化合物。近年来，文献已报道海洋Micromonosporasp.FIM02-523能够产生包括RakicidinA、B、B1等在内的一系列具有抗肿瘤活性的脂肽类化合物。2006年，本课题组在国内首先报道从该株小单孢菌中分离到化合物RakicidinA和B。研究发现，RakicidinA具有卓越的乏氧选择性抗肿瘤细胞活性，在乏氧条件下抗结肠癌HCT-8细胞活性是常氧条件下的17.5倍，被许多同行认为是一个极富开发前景的抗乏氧肿瘤细胞及抗CSC药物；而RakicidinB的体外抗肿瘤活性考察也显示，其对肿瘤细胞株K562、L929的生长有明显抑制作用。2016年本课题组又得到一种新的化合物RakicidinB1，实验采用移植人结肠癌HCT-8肿瘤斑马鱼模型测试了RakicidinA、B、B1的体内抑瘤活性，结果表明，RakicidinA、B、B1均对斑马鱼体内的HCT-8细胞移植瘤均有抑制活性，且初步试验表明，其抗乏氧肿瘤细胞是基于其能有效抑制HIF-1(乏氧诱导因子-1)的表达。在先研究进一步测定了RakicidinA、B、B1化合物对HCT-8、MGC803、A549、A375、HepG2和CASKI五种人肿瘤细胞株的细胞毒活性，结果显示，已分离的三个化合物对这些肿瘤细胞株均具有显著的抑制活性。2018年，本课题组又从海洋Micromonosporasp.FIM02-523菌株的代谢物中分离纯化到另外三个新化合物RakicidinG、H、I，活性实验结果显示，RakicidinG、H、I化合物均对人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1有较强的细胞毒活性，且在乏氧条件下更强，并且三个化合物对多种革兰氏阳性厌氧菌也有较好的抑制活性。可见，Rakicidins化合物具有极好的临床应用前景。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2，并进一步公开其发酵提取方法。为解决上述技术问题，本专利技术所述的一种天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其药学上可接受的盐，所述化合物RakicidinB1-2具有如下式(Ⅰ)所示的结构：本专利技术还公开了一种制备所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的方法，所述RakicidinB1-2是由保藏编号为CGMCCNo.14823的海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609经发酵及分离获得。具体的，本专利技术所述海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.14823，保藏日期为2017年10月16日。优选的，所述的制备所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的方法，包括如下步骤：(1)取保存的海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609进行发酵，收集发酵液进行固液分离获得菌丝体；将所得菌丝体用甲醇或乙醇浸泡，收集浸泡液；(2)以D3502大孔树脂吸附柱进行层析，并分别以67％和75％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集75％乙醇-水洗脱液组分；(3)将收集的洗脱液以HZ816树脂吸附柱进行层析，并分别以66％、69％和73％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集含有RakicidinB1-2的73％的乙醇-水洗脱液组分；(4)以乙酸乙酯或二氯甲烷萃取所得洗脱液，浓缩获得粗品后用甲醇溶解，进行半制备液相色谱分离，并以体积比710：290的乙腈-水进行洗脱，分段收集，即得。具体的，所述步骤(2)中，所述D3502大孔树脂吸附柱的径高比为1：5-1：10，装柱体积2.5-4.0L，吸附流速为30-45ml/min。具体的，所述步骤(3)中，所述HZ816树脂吸附柱径高比为1：5-1：8，装柱体积2.2-3L，吸附流速为25-35ml/min。具体的，所述步骤(4)中，所述半制备液相色谱为WelchMaterial，5μm，250mm×10mm，控制洗脱液流速8ml/min。本专利技术还公开了所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其药学上可接受的盐用于制备具有抗肿瘤活性和抗临床致病厌氧菌活性药物的用途。具体的，所述肿瘤包括人结肠癌、人胰腺癌；所述致病厌氧菌包括甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌、万古霉素中度敏感金黄色葡萄球菌、万古霉素耐药粪肠球菌和艰难梭菌。具体的，所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其药学上可接受的盐的日服用剂量为1-5000mg/天，也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。本专利技术还公开了一种治疗致病厌氧菌感染疾病的药物，以所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其药学上可接受的盐为活性成分，并添加药学上可接受的载体。具体的，所述药物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。本专利技术还公开了海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609用于发酵制备天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的用途，所述海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNo.14823。本专利技术从海洋小单孢菌发酵液中分离得到新的Rakicidins组分RakicidinB1-2，该化合物结构与已知的RakicidinB1相比，在于11、14位开环，且在11位接入乙氧基。本专利技术天然化合物RakicidinB1-2对常氧和乏氧条件下培养的人结肠癌细胞HCT-8和人胰腺癌细胞PANC-1均具有一定的体外抑制作用，对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌、艰难梭菌和万古霉素耐药粪肠球菌等10株厌氧菌均具有一定的抑制活性，是一种结构新颖活性较好的次级代谢产物，具有较高的药用价值。实验例1、抗肿瘤活性测试将提取得到的RakicidinB1-2样品溶解在DMSO中使得溶度达到1ug/ml，再分别稀释使得终浓度为0.5ug/ml、0.25ug/ml、0.125ug/ml、0.0625ug/ml、0.03125ug/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天然Rakicidins类化合物Rakicidin B1-2及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物Rakicidin B1-2具有如下式(Ⅰ)所示的结构：/n

【技术特征摘要】
1.一种天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物RakicidinB1-2具有如下式(Ⅰ)所示的结构：





2.一种制备权利要求1所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的方法，其特征在于，所述RakicidinB1-2是由保藏编号为CGMCCNo.14823的海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609经发酵及分离获得。


3.根据权利要求2所述的制备所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取保存的海洋小单孢菌株Micromonosporasp.FIM-R160609进行发酵，收集发酵液进行固液分离获得菌丝体；将所得菌丝体用甲醇或乙醇浸泡，收集浸泡液；
(2)以D3502大孔树脂吸附柱进行层析，并分别以67％和75％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集75％乙醇-水洗脱液组分；
(3)将收集的洗脱液以HZ816树脂吸附柱进行层析，并分别以66％、69％和73％的乙醇-水溶液进行梯度洗脱，收集含有RakicidinB1-2的73％的乙醇-水洗脱液组分；
(4)以乙酸乙酯或二氯甲烷萃取所得洗脱液，浓缩获得粗品后用甲醇溶解，进行半制备液相色谱分离，并以体积比710：290的乙腈-水进行洗脱，分段收集，即得。


4.根据权利要求3所述的制备所述天然Rakicidins类化合物RakicidinB1-2的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述D3502大孔树脂吸附柱的径高比为1：5-1：10，装柱体积2.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽，林风，江红，赵薇，周剑，江宏磊，连云阳，
申请(专利权)人：福建省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35