【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多重偶联和氧化方法专利
本专利技术涉及立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸领域，并且涉及立体限定的核苷单体以及使用所述单体合成立体限定的寡核苷酸的方法。本文公开了寡核苷酸改良的合成方法，其中在单个延伸循环内有重复的偶联和氧化步骤。该方法使得立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸的产率提高且纯度更高。专利技术背景最近变得很明显的是，在寡核苷酸中使用立体限定的硫代磷酸酯核苷间键可优化治疗性寡核苷酸的药理学特征。然而，与非立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸相比，目前立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸的制备相对低效。因此，需要提高立体限定的寡核苷酸的合成效率。Wan等人,NucleicAcidsResearch(AdvanceAccess，2014年11月14日出版)公开了在DNA间隙区内含有手性硫代磷酸酯键的(S)cETGapmer反义寡核苷酸的合成方法。Wan等人制备的寡核苷酸将氧杂氮杂磷杂环戊烷(oxazaphospholidine)DNA单体掺入(S)cETGapmer中。将DNA酰胺化物制备成在乙腈/甲苯(1:1v/v)中0.2M浓度的溶液...
【技术保护点】
1.合成立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸的方法，包括以下步骤：/na)使与固相载体相连的核苷或寡核苷酸的受保护的5'-羟基末端脱保护，/nb)将氧杂氮杂磷杂环戊烷亚磷酰胺单体与核苷或寡核苷酸的脱保护的5'-羟基末端偶联，形成亚磷酸三酯中间体，/nc)用硫化试剂氧化亚磷酸三酯中间体，然后进行任选的洗涤步骤，/nd)在同一个延伸循环内重复步骤b)和c)，/ne)任选地重复步骤a)到d)以进行一个或多个进一步的延伸循环，和/nf)将寡核苷酸脱保护和从固体载体上切割。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170628 EP 17178454.91.合成立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸的方法，包括以下步骤：
a)使与固相载体相连的核苷或寡核苷酸的受保护的5'-羟基末端脱保护，
b)将氧杂氮杂磷杂环戊烷亚磷酰胺单体与核苷或寡核苷酸的脱保护的5'-羟基末端偶联，形成亚磷酸三酯中间体，
c)用硫化试剂氧化亚磷酸三酯中间体，然后进行任选的洗涤步骤，
d)在同一个延伸循环内重复步骤b)和c)，
e)任选地重复步骤a)到d)以进行一个或多个进一步的延伸循环，和
f)将寡核苷酸脱保护和从固体载体上切割。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤d)至少进行两次。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述偶联反应在乙腈溶剂组合物中进行。
4.如权利要求2所述的方法，其中乙腈溶剂包含乙腈和芳族杂环溶剂。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述方法包括多个进一步的延伸循环。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸是反义寡核苷酸。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂在水中于20℃下具有pKa4–7或为7–17。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂是芳族杂环碱。
9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂是芳族杂环酸。
10.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述芳族杂环溶剂选自吡啶、2-甲基吡啶、4-甲基吡啶、3-甲基吡啶、二甲基吡啶和吡咯。
11.如权利要求1-1...
【专利技术属性】
技术研发人员：E·D·丰德，D·J·汉森，
申请(专利权)人：罗氏创新中心哥本哈根有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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