磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3肽试剂和方法技术

本发明专利技术涉及磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3特异性肽试剂、使用所述肽试剂检测肝细胞癌细胞的方法，以及使用所述肽试剂靶向肝细胞癌细胞的方法。

Phosphatidylinositol proteoglycan-3 peptide reagent and method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3肽试剂和方法本申请要求2017年3月8日提交的美国临时专利申请第62/468,626号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。通过引用并入电子递交的材料通过引用整体并入的是与本文同时提交并且如下标识的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表：在2018年3月6日创建的名为“50687_SeqListing.txt”的1,717字节ASCII(文本)文件。
本专利技术涉及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3特异性肽试剂、使用肽试剂检测肝细胞癌细胞的方法，以及使用肽试剂靶向肝细胞癌细胞的方法。
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是全球约80万人死亡的原因，代表全球癌症死亡的第二大常见原因。HCC是肝脏的原发性癌症，且主要发生在患有潜在的慢性肝病的患者中，例如肝炎和肝硬化[Cicalese等人，《肝细胞癌(HepatocellularCacinoma)》，Medscape(2014年5月20日更新)]。HCC的病理生理学未知且预后较差，具有小于25％的5年生存率。肥胖流行导致越来越多的可以进展为纤维化、肝硬化和最终HCC的非酒精性脂肪肝病患者群体[Cicalese等人，同前文献；Maluccio及Covey，《临床医生的癌症杂志(CancerJ.Clin.)》，62(6):394-399(2012)]。肝切除术是患有可切除(非扩散性)HCC的患者的黄金标准。目前，外科医生利用白光进行边缘大于1cm的HCC切除，以粗略地可视化经切割的肝脏表面。然而，大多数HCC患者存在患病的肝实质，因此保留肝实质对于维持尽可能多的功能性肝组织至关重要。需要更准确的检测肿瘤边缘的方法来降低复发率而不牺牲活组织。化疗目前作为HCC的新辅助疗法提供，但大多数化学治疗剂并不区分恶性细胞和正常细胞，因此会导致严重的不良反应和全身毒性。预期这些药物通过增强的渗透性和滞留(EPR)效应通过渗漏的脉管系统被动地积聚在HCC中。然而，仅10％至20％的患者具有可切除的肝脏，并且其中切除后的复发率在2年后为50％，在5年后为近75％(Maluccio及Covey，同前文献)。索拉非尼(Nexavar)是一种抑制RAF/MEK/ERK途径和酪氨酸激酶的小分子，并且被FDA批准用于治疗HCC[Wilhelm等人，《癌症研究(CancerRes)》，64:7099-7109(2004)]。这种药物是不适合手术的晚期HCC患者的标准治疗方法。然而，在临床研究(SHARP)中，索拉非尼仅显示出相对于安慰剂的最小(～3个月)生存优势[Llovet等人，《英格兰医学期刊(NEnglJMed)》，359：378-390(2008)]，并且与白种人患者相比，索拉非尼可能在亚洲人患者中效果更低，发现其中存活时间显著缩短(6.5个月对比7.9个月)[Cheng等人，《肿瘤学(LancetOncol)》，10:25-34(2009)]。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(本文中有时缩写为GPC3)是硫酸乙酰肝素膜结合的蛋白多糖，其在正常成人肝脏、肝硬化或良性病变中不存在，但发现锚定在肿瘤肝细胞中的细胞表面。其在高达80％的HCC中过表达。[Capurro等人，《胃肠病学(Gastroenterology)》，125(1):89-97(2003)；Nakatsura等人，《生物化学生我物理研究(BiochemBiophysResCommun)》，306:16-25(2003)；Shafizadeh等人，《现代病理学(ModPathol.)》，21(8):1011-1018(2008)]。GPC3通过刺激Wnt信号传导促进HCC生长并具有反映肿瘤分期的表达水平[Zhu等人，Gut，48：558-564(2001)]。许多免疫化学研究已发现HCC中GPC3的强阳性染色以及低级别和高级别发育不良时的最少染色[Shirakawa等人，《国际肿瘤杂志(IntJOncol)》，34:649-656(2009)；Yamauchi等人，《现代病理学》，18:1591-1598(2005)；Wang等人，《人类病理学(HumPathol)》，37:1435-1441(2006)]。已发现GPC3对HCC的敏感性和特异性明显高于α-胎蛋白(AFP)，后者是广泛用于HCC监测的血清生物标记物[Xu等人，《癌症研究临床肿瘤学杂志(J.CancerRes.ClinOncol)》，139:1417-1424(2013)]。用于检测和治疗HCC的新产品和方法是本领域中需要的。新产品和方法对于提高HCC的存活率和降低医疗保健成本具有重要的临床应用。
技术实现思路
在一个方面，本公开提供一种试剂，其包括肽ALLANHEELFQT(SEQIDNO:1)、ALLANHEELF(SEQIDNO:2)、GLHTSATNLYLH(SEQIDNO:3)、SGVYKVAYDWQH(SEQIDNO:4)或VGVESCASRCNN(SEQIDNO:5)，或所述肽的多聚体形式，其中所述试剂特异性地结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3。在一些实施例中，多聚体形式是二聚体。在一些实施例中，肽试剂基本上由肽或肽的多聚体形式组成。在一些实施例中，所述试剂包括至少一个与肽或所述肽的多聚体形式连接的可检测标记。在一些实施例中，可检测标记可以通过显微镜、光声、超声或磁共振成像来检测。在一些实施例中，通过显微镜可检测的标记是异硫氰酸荧光素(FITC)、Cy5、Cy5.5或IRdye800。在一些实施例中，可检测标记通过肽连接子连接到肽。在一些实施例中，连接子的末端氨基酸是赖氨酸。在一些实施例中，连接子包括SEQIDNO:7中所示的序列GGGSK。在一些实施例中，所述试剂包括至少一个与肽或所述肽的多聚体形式连接的治疗部分。在一些实施例中，治疗部分是化学治疗剂。在一些实施例中，治疗部分是胶束，例如包封化学治疗剂(例如索拉非尼)的聚合物胶束。在一些实施例中，所述试剂包括至少一个与肽或所述肽的多聚体形式连接的可检测标记和至少一个与肽或所述肽的多聚体形式连接的治疗部分。在另一方面，本公开提供了一种组合物，其包括本专利技术的试剂和医药学上可接受的赋形剂。在又一方面，本公开提供用于检测患者中的HCC的方法，其包括以下步骤：将本专利技术的试剂给予患者的肝脏以及检测所述试剂与癌细胞的结合。在又另一方面，本公开提供用于检测患者中的HCC的方法，其包括以下步骤：将本专利技术的试剂给予患者以及检测试剂结合。在另一方面，本公开提供一种确定患者中肝癌和/或癌症转移或癌症复发的治疗有效性的方法，其包括以下步骤：将本专利技术的试剂给予患者，使用所述试剂标记的第一量细胞可视化，以及将所述第一量与先前可视化的用所述试剂标记的第二量细胞进行比较，其中第一量标记细胞相对于先前可视化的第二量标记细胞的减少指示有效治疗。在一些实施例中，所述方法还包括获得由试剂标记的细胞的活检体。在又一方面，本公开提供一种用于将治疗部分递送到患者的HCC细胞的方法，其包括将本专利技术的试剂给予患者的步骤。在另一方面，本公开提供一种用于将本专利技术的组合物给予有需要的患者的试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂，其包括磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3特异性肽ALLANHEELFQT(SEQ ID NO:1)、ALLANHEELF(SEQ ID NO:2)、GLHTSATNLYLH(SEQ ID NO:3)、SGVYKVAYDWQH(SEQ ID NO:4)或VGVESCASRCNN(SEQ ID NO:5)，或所述肽的多聚体形式，/n其中所述肽特异性地结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3且/n其中至少一个可检测标记、至少一个治疗部分或这两种与所述肽或所述肽的多聚体形式连接。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170308 US 62/468,6261.一种试剂，其包括磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3特异性肽ALLANHEELFQT(SEQIDNO:1)、ALLANHEELF(SEQIDNO:2)、GLHTSATNLYLH(SEQIDNO:3)、SGVYKVAYDWQH(SEQIDNO:4)或VGVESCASRCNN(SEQIDNO:5)，或所述肽的多聚体形式，
其中所述肽特异性地结合磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3且
其中至少一个可检测标记、至少一个治疗部分或这两种与所述肽或所述肽的多聚体形式连接。


2.根据权利要求1所述的试剂，其包括至少一个与所述肽连接的可检测标记。


3.根据权利要求2所述的试剂，其中所述可检测标记能够通过显微镜、光声、超声、PET、SPECT或磁共振成像检测。


4.根据权利要求3所述的试剂，其中通过显微镜可检测的所述标记是异硫氰酸荧光素(FITC)。


5.根据权利要求3所述的试剂，其中通过显微镜可检测的所述标记是Cy5。


6.根据权利要求3所述的试剂，其中通过显微镜可检测的所述标记是Cy5.5。


7.根据权利要求3所述的试剂，其中通过显微镜可检测的所述标记是IRdye800。


8.根据权利要求1所述的试剂，其中所述肽的所述多聚体形式是与氨基己酸连接子形成的二聚体。


9.根据权利要求2所述的试剂，其中所述可检测标记通过肽连接子与所述肽连接。


10.根据权利要求9所述的试剂，其中所述连接子的末端氨基酸是赖氨酸。


11.根据权利要求10所述的试剂，其中所述连接子包括SEQIDNO:7中所示的序列GGGSK。


12.根据1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所述的试剂，其包括至少一个与所述肽连接的治疗部分。


13.根据权利要求12所述的试剂，其中所述治疗部分是化学治疗剂。

【专利技术属性】
技术研发人员：J·周，T·D·王，Z·李，B·P·乔希，
申请(专利权)人：密歇根大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US