一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法技术

本发明专利技术涉及银杏叶提取物的检测技术领域，具体公开一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法，所述检测方法为UPLC‑MS法，其中UPLC的检测条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.08‑0.12vt％甲酸水溶液，流动相A与流动相B的体积比为10‑35:90‑60；柱温：35‑40℃；流速：0.1‑0.5ml/min；洗脱方式：等度洗脱；所述MS的检测模式为负离子模式。本发明专利技术可实现对成分复杂的银杏叶提取物或其制剂中的两种木脂素类化合物以及两种黄酮醇苷类化合物的同时定量检测，且检测的精密度和准确度高、重现性和稳定性好。

A method for the determination of lignans and flavonolglycosides in Ginkgo biloba extract or its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法
本专利技术涉及银杏叶提取物的检测
，尤其涉及一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法。
技术介绍
银杏叶提取物是从银杏叶中提取的有效物质，含有银杏总黄酮，银杏内酯等物质，有扩张血管，保护血管内皮组织、调节血脂、保护低密度脂蛋白、抑制PAF(血小板激活因子)，抑制血栓形成、清除自由基等作用。其中发挥清除自由基的作用的成分为木脂素类化合物；发挥扩张血管、保护血管内皮组织以及调节血脂等作用的主要成分是黄酮醇苷类化合物，因此银杏叶提取物或其制剂中木脂素类化合物和黄酮醇苷类化合物的含量直接影响其药效的发挥。但银杏叶提取物中的两种木脂素类化合物落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷经紫外全波长扫描后，发现两者在UV277nm处呈最大吸收，而该波长下黄酮醇苷类化合物(黄酮醇苷类化合物为Urolignoside和大波斯菊苷)也有较强的吸收，因此，无法通过普通高效液相色谱检测上述木脂素类化合物和黄酮醇苷类化合物的含量。
技术实现思路
针对现有高效液相色谱检测方法无法同时定量检测出银杏叶提取物或其制剂中木脂素类化合物(落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷)和黄酮醇苷类化合物(Urolignoside和大波斯菊苷)的含量的问题，本专利技术提供一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术实施例采用了如下的技术方案：一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法，所述木脂素类化合物为落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷，所述黄酮醇苷类化合物为Urolignoside和大波斯菊苷，所述检测方法为UPLC-MS法，其中所述UPLC的检测条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.08-0.12vt％甲酸水溶液，流动相A与流动相B的体积比为10-35:90-60；柱温：35-40℃；流速：0.1-0.5ml/min；洗脱方式：等度洗脱；所述MS的检测检测模式为ESI负离子模式。其中Urolignoside的结构式为如下：相对于现有技术，本专利技术提供的银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法，采用UPLC-MS联用的方法，通过选择上述UPLC色谱条件以及MS的检测的负离子模式，可实现对成分复杂的银杏叶提取物或其制剂(如舒血宁注射液)中的紫外吸收波长相同的落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷两种木脂素类化合物以及Urolignoside和大波斯菊苷两种黄酮醇苷类化合物的同时定量检测，简化了检验过程，节约了分析时间，且检测的精密度和准确度高、重现性和稳定性好，可用于银杏叶提取物或其制剂的质量控制及综合评价，为提高和控制银杏叶提取物或其制剂的质量提供了可靠保障。优选的，所述流动相B为0.1vt％甲酸水溶液。优选的，所述流动相A与流动相B的体积比为10:90。上述优选的流动相比例，能够更好地分离杂质，利于有落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷、Urolignoside、松脂醇二葡萄糖苷和大波斯菊苷的检出，可有效改善峰形，使检测结果的准确度及精密度更高。优选的，所述柱温为40℃，所述流速为0.1ml/min。优选的，所述检测方法中的进样体积为0.2-1.5μL。上述优选的色谱条件有利于进一步提高对落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷、Urolignoside、松脂醇二葡萄糖苷和大波斯菊苷检测的灵敏度。优选的，所述检测方法中的对照品溶液和供试品溶液的稀释溶剂为甲醇。优选的，所述检测方法中的对照品溶液中待检测成分的质量浓度为供试品溶液中的13-20倍。优选的，所述检测方法中的供试品溶液中银杏叶提取物的浓度为0.3-0.4mg/mL。附图说明图1是本专利技术实施例1中进行质谱条件考察的EIC色谱图；其中，A为正离子模式[M+H]+，B为负离子模式[M-H]-，C为正离子模式[M+Na]+，D为负离子模式[M+COOH]-；图2是本专利技术实施例1中UPLC-MS法测定舒血宁注射液的色谱图，其中。A空白甲醇，B和C舒血宁注射液，D混合对照品溶液；峰1：落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷，峰2：松脂醇二葡萄糖苷，峰3：Urolignoside，峰4：大波斯菊苷。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。为了更好的说明本专利技术实施例提供的，下面通过实施例做进一步的举例说明。实施例1材料与方法仪器：WatersXevoGX-XS四级杆串联飞行时间质谱试剂：乙腈、甲醇(色谱纯)，纯化水，其它试剂均为分析纯；落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷、松脂醇二葡萄糖苷、Urolignoside和大波斯菊苷对照品样品：银杏叶提取物、舒血宁注射液溶液的配制：对照品溶液的制备：精密称取落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷12.16mg于50ml容量瓶、松脂醇二葡萄糖苷10.90mg于50ml容量瓶、Urolignoside9.20mg于50ml容量瓶、大波斯菊苷10.26mg于50ml容量瓶，甲醇溶解并定容，作为对照品母液。精密量取2ml落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷、2ml松脂醇二葡萄糖苷、5mlUrolignoside和1ml大波斯菊苷对照品母液至同一25ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，作为混合对照品溶液。供试品溶液的制备：精密量取180mg银杏叶提取物于50ml容量瓶，甲醇溶解并定容，再精密量取1mL上述溶液至10mL容量瓶，甲醇定容，作为银杏叶提取物供试品溶液。精密量取1ml舒血宁注射液10ml容量瓶，甲醇定容，作为舒血宁注射液供试品溶液。质谱条件的考察：通过提取舒血宁注射液中各待测成分的精确分子量，发现松脂醇二葡萄糖苷相对其它木脂素相应最低，因此，以松脂醇二葡萄糖苷为考察对象，考察质谱条件，通过比较了正、负离子模式下松脂醇二葡萄糖苷提取离子流(EIC)色谱图，如图1所示，松脂醇二葡萄糖苷在负离子模式下相应好，其母离子的加和物[M+COOH]峰(m/z＝727.2449)明显高于[M-H]-分子离子峰(m/z＝681.2395)，因此，可同时提取样品和对照品中松脂醇二葡萄糖苷的精确分子量m/z＝727.2449(误差范围0.02Da)，计算各自EIC色谱图的峰面积以达到定量的目的。检测方法：通过UPLC-MS法测定舒血宁注射液中落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷、松脂醇二葡萄糖苷、Urolignoside和大波斯菊苷的含量，检测条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，2.1mm×100mm，1.6μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法，所述木脂素类化合物为落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷，所述黄酮醇苷类化合物为Urolignoside和大波斯菊苷，其特征在于：所述检测方法为UPLC-MS法，其中UPLC的检测条件为：/n色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；/n流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.08-0.12vt％甲酸水溶液，流动相A与流动相B的体积比为10-35:90-60；/n柱温：35-40℃；/n流速：0.1-0.5ml/min；/n洗脱方式：等度洗脱；/n所述MS的检测模式为ESI负离子模式。/n

【技术特征摘要】
1.一种银杏叶提取物或其制剂中木脂素类和黄酮醇苷类化合物的检测方法，所述木脂素类化合物为落叶松脂素-4,4-二葡萄糖苷和松脂醇二葡萄糖苷，所述黄酮醇苷类化合物为Urolignoside和大波斯菊苷，其特征在于：所述检测方法为UPLC-MS法，其中UPLC的检测条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；
流动相：流动相A为乙腈，流动相B为0.08-0.12vt％甲酸水溶液，流动相A与流动相B的体积比为10-35:90-60；
柱温：35-40℃；
流速：0.1-0.5ml/min；
洗脱方式：等度洗脱；
所述MS的检测模式为ESI负离子模式。


2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述流动相B为0.1vt％甲酸水溶液。


3.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉彩，李响明，杨琴，周永妍，王文鹏，王雪莲，孙胜斌，姜国志，
申请(专利权)人：神威药业集团有限公司，河北神威药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13