一种kdtA基因改造的重组菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种kdtA基因改造的重组菌株及其构建方法与应用，是对大肠杆菌中的kdtA基因进行点突变形成，突变后的kdtA基因序列如SEQ ID NO:2所示。该重组菌株与未突变的野生型菌株相比，有利于生产高浓度的L‑苏氨酸，且菌株稳定性好，作为L‑苏氨酸生产菌株能够进一步降低生产成本。

A recombinant kdta strain and its construction and Application

【技术实现步骤摘要】
一种kdtA基因改造的重组菌株及其构建方法与应用
本专利技术属于基因工程和微生物
，具体涉及一种kdtA基因改造的重组菌株及其构建方法与应用。
技术介绍
L-苏氨酸是八大必需氨基酸之一，且是人和动物自身不能合成的氨基酸。L-苏氨酸可以强化谷物吸收，调节体内代谢平衡，促进机体生长发育，被广泛应用于饲料、医药及食品工业中。目前，L-苏氨酸生产主要有化学合成法、蛋白水解法和微生物发酵法，其中微生物发酵法生产成本低、生产强度高、对环境污染小，因而成为目前工业生产L-苏氨酸应用最广泛的方法。多种细菌可用于L-苏氨酸的微生物发酵生产，如大肠杆菌、棒状杆菌属、沙雷氏菌属等的野生型诱导获得的突变株作为生产菌株。具体实例包括抗氨基酸类似物突变株或甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸等多种营养缺陷型。然而，传统诱变育种由于随机突变造成菌株生长缓慢及产生较多副产物，不易获得高产菌株。因此，运用代谢工程手段构建重组大肠杆菌是生产L-苏氨酸的有效途径。目前，利用表达质粒介导的氨基酸合成途径和竞争途径中关键性酶基因的过表达或弱化是对大肠杆菌进行基因改造的主要手段。但是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列包括SEQ ID NO:1所示的野生型kdtA基因编码序列第82位碱基发生突变而形成的序列；/n优选，所述突变为SEQ ID NO:1中第82位碱基由由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)；，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列包括SEQIDNO:1所示的野生型kdtA基因编码序列第82位碱基发生突变而形成的序列；
优选，所述突变为SEQIDNO:1中第82位碱基由由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T)；，所述多核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。


2.重组蛋白，其由权利要求1的多核苷酸序列编码。
优选地，所述重组蛋白由SEQIDNO:2所示的多核苷酸序列编码；
优选地，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。


3.重组载体，包括如权利要求1所述的多核苷酸序列或权利要求2所述的重组蛋白。


4.一种重组菌株，含有编码序列发生点突变的kdtA基因编码核苷酸序列；
优选地，所述重组菌株含有权利要求3所述的重组载体。


5.根据权利要求4所述的重组菌株，其特征在于，是将所述重组载体导入宿主菌株中重组形成；


6.根据权利要求4或5所述的重组菌株，其特征在于，所述宿主菌株为E.coliK12(W3110)菌株、E.coliCGMCC7.232菌株。


7.一种如权利要求4-6任一项所述的重组菌株的构建方法，包括如下步骤：
改造如SEQIDNO:1所示的野生型kdtA基因开放阅读框区域的核苷酸序列，使其第82位碱基发生突变，得到包含突变kdtA编码基因的产L-苏氨酸重组菌株；
示例性的，所述突变是指SEQI...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏爱英，孟刚，贾慧萍，高晓航，马风勇，周晓群，赵春光，
申请(专利权)人：黑龙江伊品生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙;23