一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，对盐肤木果实进行超临界CO

A method for the determination of Urushiol in the fruit of Rhus chinensis

【技术实现步骤摘要】
一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法
本专利技术涉及微量检测
，尤其涉及一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，具体为采用超临界CO2萃取-超高效液相色谱-质谱联用方法检测盐肤木果实中漆酚含量。
技术介绍
盐肤木(RhuschinensisMill.)，又叫五倍子树(山梧桐、黄瓤树、欺树)是中国常见的经济树种之一，分布地区比较广泛，适应性较强。盐肤木叶上所寄生的五倍子可供制药和工业染料的原料，其果实、种子还可榨油。在园林绿化中，可作为观叶、观果的树种之一。花开于8-9月，蜜、粉都很丰富，是良好的蜜源植物。根、叶、花及果均可入药，具有祛风化湿、消肿软坚、收敛解毒、生津润肺、降火化痰等功效。目前，盐肤木果油作为高不饱和脂肪酸的食用油已研发成功。但盐肤木果实中含有一定量的漆酚，漆酚(Urushiol)是由0-3个双键的C15、C16和C17侧链脂肪烃取代基的邻苯二酚衍生物混合物组成的多酚类化合物，具体结构如下：其中，R为(CH2)14CH3、或(CH2)7CH＝CH(CH2)5CH3、或(CH2)7CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)2CH3、或(CH2)7CH＝CHCH2CH＝CHCH＝CHCH3、或(CH2)7CH＝CHCH2CH＝CHCH2CH＝CH2等。而它们属易致过敏成分，对人体有害。它会导致皮肤接触性过敏皮疹，称为漆酚致接触性皮炎。当漆酚渗透入皮肤后，它会被人体免疫系统的一部分的树突状细胞的识别出是被皮肤吸收的，免疫细胞从而会迁移到淋巴结作用于T淋巴细胞，进而攻击皮肤，T淋巴细胞通过产生因子和细胞免疫杀伤破坏皮肤细胞，从而导致皮肤细胞由于受到自身免疫系统攻击而被破坏。因此，盐肤木果实食用或药用时都必须对其中所含的漆酚加以检测分析，但由于漆酚的侧链R中包括饱和、单烯、双烯和三烯烃基的结构相近，极性差异小，而且漆酚易氧化聚合，因此漆酚单体的分离极为困难。因此，对于盐肤木果实中漆酚含量的研究，对于盐肤木果实作为食用、药用等开发利用的研发有着重要意义。然而已有报道的漆酚检测，主要是对漆树中高含量的漆酚的检测，盐肤木果实中微量漆酚的检测却未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法。一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，对盐肤木果实进行超临界CO2萃取，然后采用超高效液相色谱-质谱联用技术进行测定。优选地，将盐肤木果实干燥，粉碎，然后进行超临界CO2萃取。优选地，干燥具体操作如下：盐肤木果实晒干，置于-20℃冰柜中保存，检测前取出烘干。优选地，粉碎至80-100目。优选地，超临界CO2萃取参数如下：萃取温度为38-42℃，萃取压力为23-27MPa；分离I温度(即分离油脂的温度)为48-52℃，分离I压力为9-11MPa；分离II温度(分离醇溶物的温度)为34-36℃，分离II压力为4.5-5.5MPa；萃取时间均为1.8-2.2h。优选地，超临界CO2萃取具体操作如下：将盐肤木果实粉末装入CO2萃取罐的装料桶中，运行超临界CO2萃取仪器，连续萃取1.8-2.2h，每28-32min从分离Ⅰ分离罐下放出萃取所得油脂，待温度平衡至室温(CO2气化挥发带走大量热量，使放出的油脂凝固成固体)，CO2挥尽后得到液态盐肤木果实油脂；再向超临界CO2萃取仪器中泵入无水乙醇(作为携带剂)，运行超临界CO2萃取仪器，连续萃取1.8-2.2h，每隔28-32min从分离Ⅱ分离罐下放出萃取所得醇溶物，待温度平衡至室温得到盐肤木果实乙醇提取液。优选地，超高效液相色谱-质谱分析前对超临界CO2萃取所得盐肤木果实油脂和盐肤木果实乙醇提取液进行预处理。优选地，盐肤木果实乙醇提取液预处理具体如下：将盐肤木果实乙醇提取液3-5℃静置过夜，取上清液，加甲醇稀释混合均匀(稀释目的是由于醇提液中漆酚浓度远高于油脂中漆酚浓度，稀释后两种样液中漆酚浓度接近，减小测定误差)，0.22μm的微孔滤膜过滤得到1#样品。优选地，上清液与甲醇的体积比为1：9。优选地，盐肤木果实油脂预处理具体如下：向盐肤木果实油脂中加入甲醇萃取其中多酚类物质，充分振摇使其混合均匀，3-5℃静置过夜，取上清液(甲醇层)，0.22μm的微孔滤膜过滤得到2#样品。优选地，盐肤木果实油脂与甲醇的体积比为1：1。由于漆酚易溶于甲醇、乙醇或乙腈而难溶于水和油脂等，故可用甲醇、乙醇或乙腈将其从果油中萃取出来，以减小质谱分析时的干扰，便于UPLC-MS分析。优选地，将1#样品和2#样品分别进行超高效液相色谱-质谱分析。优选地，超高效液相色谱洗脱条件如下：流动相A为质量分数为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为甲醇；洗脱梯度如下：0～10minA：B＝90％：10％10～15minA：B＝80％：20％15～25minA：B＝20％：80％25～30minA：B＝10％：90％30～35minA：B＝0％：100％流速0.25mL/min，柱温30℃，进样量2μL。优选地，质谱分析条件如下：电子电离，负离子模式，一级质谱电子电离毛细管出口电压175V，二级质谱碰撞能40eV，雾化器喷雾压力为35PSI，干燥气流速10L/min，干燥气温度320℃，鞘气温度280℃，鞘气流速11L/min。现有技术中，漆树的油漆(生漆)中漆酚的测定方法包括：可见分光光度计法、紫外光谱法、乙酰化测定法、薄层色谱法和高效液相色谱法。分光光度计法：《GB/T14703-2008生漆》中确定生漆中漆酚用可见分光光度计法，漆酚与三氯化铁和三乙醇胺(TEA)反应，生成TEA-Fe3+-漆酚蓝紫色络合物，在625nm波长处有最大吸收；该方法测定的灵敏度较低，由于生漆中漆酚含量高(可达生漆干重的50％左右)，对于测定生漆中漆酚含量，方法适用，而对盐肤木油脂中极微量的含量，该国标方法的灵敏度不够。紫外光谱测定法：由于漆酚的乙醇溶液在紫外区206nm处有最大吸收峰；由于206nm波长太短，太接近紫外波长的下限，能量过高，干扰过大，尤其不宜用来分析盐肤木油脂中微量漆酚的测定。乙酰化测定法：漆酚与乙酸酐-吡啶在无水介质中作用，使漆酚酯化并析出酸，用标准NaOH溶液滴定。该方法灵敏度过低，不宜用于分析盐肤木油脂中微量漆酚。高效液相色谱法；225nm虽不是漆酚的最灵敏线，但仍然有较强的吸收，常被用来做HPLC分离紫外检测器检测，但由于目前唯一可获得的漆酚标准品《GB/T14703-2008生漆》附录中饱和漆酚的制备方法制备的饱和漆酚，即漆酚结构中R支链中的1-3个双键被在兰尼镍催化下加H饱和而成了饱和漆酚，但盐肤木果实中漆酚多以不饱和漆酚(R支链中含1-3个双键)，饱和漆酚含本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，对盐肤木果实进行超临界CO

【技术特征摘要】
1.一种检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，对盐肤木果实进行超临界CO2萃取，然后采用超高效液相色谱-质谱联用技术进行测定。


2.根据权利要求1所述检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，将盐肤木果实干燥，粉碎，然后进行超临界CO2萃取。


3.根据权利要求2所述检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，干燥具体操作如下：盐肤木果实晒干，置于-20℃冰柜中保存，实验前取出烘干。


4.根据权利要求1所述检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，超临界CO2萃取参数如下：萃取温度为38-42℃，萃取压力为23-27MPa；分离I温度为48-52℃，分离I压力为9-11MPa；分离II温度为34-36℃，分离II压力为4.5-5.5MPa；萃取时间均为1.8-2.2h。


5.根据权利要求1所述检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，超临界CO2萃取具体操作如下：将盐肤木果实粉末装入CO2萃取罐的装料桶中，运行超临界CO2萃取仪器，连续萃取1.8-2.2h，每28-32min从分离Ⅰ分离罐下放出萃取所得油脂，待温度平衡至室温，CO2挥尽后得到液态盐肤木果实油脂；再向超临界CO2萃取仪器中泵入无水乙醇，运行超临界CO2萃取仪器，连续萃取1.8-2.2h，每隔28-32min从分离Ⅱ分离罐下放出萃取所得醇溶物，待温度平衡至室温得到盐肤木果实乙醇提取液。


6.根据权利要求1所述检测盐肤木果实中漆酚含量的方法，其特征在于，超高效液相色谱-质谱分析前对超临界CO...

【专利技术属性】
技术研发人员：闵运江，陈存武，许正刚，闵长莉，汪学军，王广林，陈乃东，乔德亮，邓辉，陈瀚，
申请(专利权)人：皖西学院，
类型：发明
国别省市：安徽;34