多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用。多系分化持续应激细胞可以从骨髓、脂肪、脐带、真皮等多种间充质组织中获得。本发明专利技术研究表明多系分化持续应激细胞能够有效治疗各种炎症，如关节炎、肌腱炎、鼻炎、肺炎、肾炎、结肠炎、妇科炎症、前列腺炎、蜂窝织炎、溃疡、荨麻疹、结核、伤寒、自身免疫性疾病(如脊柱炎、红斑狼疮、淋巴性甲状腺炎等)在内的多种疾病和症状，并且作用时间长久，具有极大的临床应用价值。

Application of multi lineage differentiation and sustained stress cells in the preparation of anti-inflammatory drugs

【技术实现步骤摘要】
多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用
本专利技术属于干细胞生物学和生物医药领域，具体涉及多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用
技术介绍
炎症是指具有血管系统的活体组织对损伤因子的防御性反应，如体表的外伤感染和各器官的大部分常见病和多发病(如关节炎、肺炎、肝炎、肾炎、自身免疫性炎症等)，典型表现为红、肿、热、痛，是十分常见而又重要的基本病理过程，而且随着疾病的发展炎症可导致严重的功能障碍，如关节炎引起的关节软骨破裂，类风湿性关节炎引起的关节畸形，输卵管炎引起的输卵管堵塞，慢性肾炎引起的肾功能衰竭等，给患者带来了沉重的心理和经济负担。以骨关节炎为例，据世界卫生组织调查研究显示，目前全世界骨关节炎患者已超过4亿。我国的骨关节炎患者超过人口总数的10％，多达1亿以上，膝关节炎致残率全球第二，且发病率随年龄增加而增高，防控形势严峻。然而，目前对炎症，尤其是慢性炎症的治疗仍缺乏治愈性治疗手段。现有的针对慢性炎症的治疗手段主要包括一些症状缓解药物，如非甾体类抗炎药、类固醇激素、对乙酰氨基酚等，但这些药物的疗效有限，并不能阻止疾病的进展，而且长期使用后会导致严重的副作用，因此，寻找和开发新的抗炎药物具有重要的医学意义和深远的社会意义。
技术实现思路
多系分化持续应激细胞是2010年在成人骨髓和真皮组织中新发现的一种成体干细胞，具备如下特性：1)特异性表达阶段特异性胚胎抗原3(stagespecificembryonicantigen-3，SSEA3)和CDl05；2)有应激耐受力；3)单细胞能形成细胞球，具备很强的自我更新能力；4)能分化为内、中、外三个胚层的细胞，但在裸鼠体内不形成畸胎瘤。本专利技术研究发现，多系分化持续应激细胞能够有效治疗各种慢性炎症。注射多系分化持续应激细胞可以显著治疗多种慢性炎症，并且作用时间长久，对包括关节炎、肌腱炎、鼻炎、肺炎、肾炎、结肠炎、妇科炎症、前列腺炎、蜂窝织炎、溃疡、荨麻疹、结核、伤寒、自身免疫性疾病(如脊柱炎、红斑狼疮、淋巴性甲状腺炎等)等在内的多种疾病和症状都有显著地治疗效果，具有极大的临床应用价值。本专利技术的目的是提供一种多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用，为临床治疗炎症的药物提供一种新的选择。为了解决上述技术问题，本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供一种多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用。优选的,所述抗炎药物为治疗慢性炎症的药物。所述慢性炎症包括如下因素引起的炎症：(1)物理因素如温度(高热、低温)、射线(放射线、紫外线)等引起的炎症；(2)外源性化学物质如强酸、强碱等腐蚀性物质及松节油、芥子气引起的炎症，以及内源性化学毒物如坏死组织的分解产物及在某些病理条件下堆积于体内的代谢产物如尿素等引起的炎症；(3)切割、撞击、挤压等机械性因素引起的炎症；(4)细菌、病毒、立克次体、支原体、真菌、螺旋体和寄生虫等通过在体内繁殖，产生、释放毒素直接导致细胞和组织损伤，或通过其抗原性诱发免疫反应导致的炎症；(5)各型变态反应均能造成组织和细胞损伤而导致炎症：I型变态反应如过敏性鼻炎、荨麻疹；II型变态反应如抗基底膜性肾小球肾炎；Ⅲ型变态反在如免疫复合物性肾小球肾炎和IV型变态反应如结核、伤寒等；此外还有某些自身免疫性疾病如淋巴性甲状腺炎、溃疡性结肠炎、脊柱炎、红斑狼疮等。进一步，本专利技术所述慢性炎症选自包括关节炎、肌腱炎、鼻炎、肺炎、肾炎、结肠炎、妇科炎症、前列腺炎、蜂窝织炎、溃疡、荨麻疹、结核、伤寒、淋巴性甲状腺炎、脊柱炎、红斑狼疮中的一种或几种。进一步，本专利技术所述多系分化持续应激细胞来源于骨髓、脂肪、脐带、真皮等间充质组织，可以悬浮成球生长也可以贴壁生长，表达SSEA-3，Oct3/4，Sox2，CD105，CD90，不表达CD34，CD45，CD11b。本专利技术一个具体的实施例使用的多系分化持续应激细胞来源于骨髓。本专利技术所述多系分化持续应激细胞可采用如文献(Kuroda,etal.,Uniquemultipotentcellsinadulthumanmesenchymalcellpopulations.PNAS,2010,107:8639-8643.)所述的方法制备得到。本专利技术一个具体的多系分化持续应激细胞制备方法如下：参考文献(Kuroda,etal.,PNAS,2010,107:8639-8643.)公开的方法制备得到骨髓细胞，利用多系分化持续应激细胞表达SSEA-3+/CD105+/CD45-的特性采用流式细胞分选技术对骨髓细胞进行分选，对分选出的多系分化持续应激细胞进行悬浮培养，使用a-MEM+0.9％MethoCultH4100+20％FBS培养基，培养1d后细胞开始聚集，单个细胞聚集成团形成细胞集落，之后细胞集落又分裂生长，形成干细胞球，3-5d细胞数目逐渐增多，细胞球逐渐增大，呈现大而透亮的形态。多系分化持续应激细胞传代培养后的成球时间要比第1代细胞明显缩短，从第2代开始，一般2d即可形成细胞球。采用多能干细胞标记物SSEA-3、Nanog、Oct4和Sox2对多系分化持续应激细胞做鉴定。采用本专利技术所述方法制备得到的多系分化持续应激细胞传代稳定性好，研究表明传代60代之后细胞性状仍保持稳定，体现为1)仍能形成细胞球悬浮生长；2)和传代5代之内的MUSE细胞具有相同的镇痛效果；3)蛋白质谱分析显示和传代5代的MUSE细胞相比，在细胞因子、趋化因子和受体等多方面蛋白表达都没有统计差异。本专利技术所述的多系分化持续应激细胞稳定的传代特性，对要求提供大量、标准化的细胞产品来制备抗炎药物极其有利。进一步，本专利技术所述多系分化持续应激细胞以细胞悬液的形式给药，所述细胞悬液按如下方法制备：将培养的多系分化持续应激细胞用0.25％trypsin-EDTA进行消化制成单细胞悬液，生理盐水洗涤后，再用生理盐水悬浮，即为多系分化持续应激细胞悬液。进一步，本专利技术所述多系分化持续应激细胞悬液中细胞浓度为1～10×107个/ml。进一步，本专利技术所述多系分化持续应激细胞悬液的药物用量是以多系分化持续应激细胞个数计数为5～10×106个/kg体重，局部注射(鞘内注射、关节腔内注射、皮下注射，肌肉注射等)1次；或5～10×107个/kg体重，静脉输注1次。本专利技术所述的药物，进一步还可以含有药学上可接受的辅料。本专利技术利用多种慢性炎症的小鼠模型，首次证明通过局部注射或静脉注射的方式移植多系分化持续应激细胞可以长时间的显著抑制多种慢性炎症模型小鼠的病程发展，减少炎症因子产生，抑制痛觉过敏。附图说明图1为人多系分化持续应激细胞(MUSE细胞)的制备和鉴定结果。(其中，图A：是收集培养到第3代的人骨髓细胞，利用多系分化持续应激细胞SSEA-3+/CD105+的特性采用流式细胞分选技术进行分选的结果。图B是分选出的多系分化持续应激细胞在悬浮培养下可由分选得到的单细胞形成细胞球。图C是将多系分化持续应激细胞的悬浮细胞球消化成单细胞后，进行贴壁培养时的细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.多系分化持续应激细胞在制备抗炎药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述抗炎药物为治疗慢性炎症的药物。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述慢性炎症包括如下因素引起的炎症：
(1)物理因素引起的炎症；
(2)外源性化学物质以及内源性化学毒物引起的炎症；
(3)机械性因素引起的炎症；
(4)由细菌、病毒、立克次体、支原体、真菌、螺旋体和寄生虫通过繁殖，产生毒素直接导致细胞和组织损伤，或通过其抗原性诱发免疫反应导致的炎症；
(5)变态反应或自身免疫性疾病引起的炎症。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述慢性炎症选自关节炎、肌腱炎、鼻炎、肺炎、肾炎、结肠炎、妇科炎症、前列腺炎、蜂窝...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈罡，顾晓松，王晓冬，赵雅玉，费颖，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32