一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法，本发明专利技术采用环介导等温技术，并根据Genebank中已提交的WVMV基因的CP序列设计引物，获得LAMP引物组，所述的LAMP引物组包括F3、B3、FIP和BIP四种引物，该试剂盒还包括LAMP反应基础液，LAMP反应基础液和LAMP引物组构成了检测体系，该试剂盒能够简单快速地检测到紫藤脉花叶病毒，其具有快速、灵敏、特异性强等优势，克服了传统技术中的一些不足。应用本发明专利技术提供的方法检测WVMV全程可在两个小时内完成，LAMP反应在恒温水浴锅中进行，不需要繁琐的实验步骤及昂贵的分子试剂及仪器。

A lamp primer set, kit and method for rapid detection of Wisteria vein mosaic virus

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法
本专利技术涉及一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组、试剂盒和方法，属于生物工程

技术介绍
紫藤(WisteriaSinensis)是一种大型落叶植物，紫藤花叶病是紫藤的一种严重病害。其最早在美国被报道(Brierley和Lorentz，1957)。Bos(1970)将其命名为紫藤脉花叶病毒(WVMV)。紫藤花叶病毒(Wisteriaveneinmosaicvirus，WVMV)是马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的一员，由紫藤花叶病毒引起的紫藤花叶病已成为世界性病害。感染叶片呈黄化、花叶斑点、变窄、扭曲、坏死斑点，降低开花能力，使它们无法出售，对园艺产业造成了严重的经济损失。WVMV可由桃蚜(Myzuspersica)和豆蚜(Aphiscraccivora)非持久性传播，也可摩擦接种传播，但不能由种子传播。在田间防控难度极大，所以早期病害的预警对病害的传播和蔓延尤为重要。但现有传统的鉴定方法耗时耗力，对实验环境要求较高。因此，建立一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组，其特征在于，包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP四种反应引物，所述四种反应引物依为：/n正向外引物F3： 5'- GTCGTCTCCAGATGTGAAT -3 '；/n反向外引物B3： 5'- CAGACCATACCTAGGCATAT -3 '；/n正向内引物FIP： 5'- GGCATTTTCAACTATGGGTTTAAGTTGTTTGGGTTATGATGGATGG -3 '；/n反向内引物BIP： 5'- AAGCCAACTCTGAGACAAATCATATGGTCCTTCA GCATTCC -3 '。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组，其特征在于，包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP四种反应引物，所述四种反应引物依为：
正向外引物F3：5'-GTCGTCTCCAGATGTGAAT-3'；
反向外引物B3：5'-CAGACCATACCTAGGCATAT-3'；
正向内引物FIP：5'-GGCATTTTCAACTATGGGTTTAAGTTGTTTGGGTTATGATGGATGG-3'；
反向内引物BIP：5'-AAGCCAACTCTGAGACAAATCATATGGTCCTTCAGCATTCC-3'。


2.一种包含权利要求1所述快速检测紫藤脉花叶病毒的LAMP引物组的检测紫藤脉花叶病毒的LAMP检测试剂盒。


3.根据权利要求2所述的检测紫藤脉花叶病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于，含有LAMP检测优化体系，该LAMP检测体系包括：正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、LAMP反应基础液（10×Thermopobuffer，8UBstDNA聚合酶，dNTPs，Betain和MgCl2），其中，内引物与外引物的浓度比为4:1，内引物包括正向内引物FIP、反向内引物BIP，外引物包括正向外引物F3、反向外引物B3。


4.根据权利要求3所述的检测紫藤脉花叶病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于，LAMP检测体系中各主成分终浓度为：正向内引物FIP和反向内引物BIP0.8μM、正向外引物F3和反向外引物B30.2μM，8UBstDNA聚合酶0.32U/μL，dNTPs1.0mM，Betain0.8M，MgCl21.6mM。


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【专利技术属性】
技术研发人员：朱峰，朱鹏翔，纪兆林，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32